(12)重组DNA技术的基本工具
——高二生物学人教版(2019)选择性必修三课堂速测
基础检测
限制性内核酸酶——“分子手术刀”
1.来源:主要来自原核生物。
2.特点:具有 性。
(1)识别DNA分子的特定核苷酸序列。
(2)切割特定部位的两个核苷酸之间的 键。
3.结果:
DNA连接酶——“分子缝合针”
1.作用:将 “缝合”起来,恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。
2.种类:
种 类 来 源 特 点
E.coliDNA连接酶 只能“缝合”具有 的双链DNA片段
T4DNA连接酶 T4噬菌体 既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端,又可以“缝合”双链DNA片段的 末端
基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”
1.种类:质粒、 、动植物病毒等。
2.常用载体——质粒
(1)本质:质粒是一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞
之外,并具有自我复制能力的环状双链DNA分子。
(2)作为载体的三个条件。
①质粒DNA分子上有一个或多个限制酶切割位点。
②能在细胞内自我复制,或整合到 上,随受体DNA同步复制。
③含有特殊的标记基因。
3.DNA的粗提取与鉴定
1.实验原理
(1) 不溶于酒精, 溶于酒精。
(2)DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同,它能溶于2_mol/L的NaCl溶液。
(3)在一定温度下,DNA遇 试剂会呈现蓝色。
2.实验步骤
(1)称取30 g洋葱,切碎,加入10 mL研磨液,充分研磨。
↓
(2)漏斗中垫纱布,将研磨液过滤到烧杯中,4 ℃处理,取上清液。
↓
(3)在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液,静置2~3 min,用玻璃棒沿同一方向搅拌,卷起丝状物,并用滤纸吸去水分。
↓
(4)取两支20 ml的试管编号A、B,各加入2 mol/L的NaCl溶液5 mL,将丝状物溶于B试管的NaCl溶液中。然后向两支试管中各加入4 mL的 试剂。混匀后,将试管置于沸水中加热5 min。
↓
(5)结果观察:A试管 ,B试管变蓝色。
小试牛刀
1.限制性内切核酸酶EcoRⅠ识别并切割双链DNA,用EcoRⅠ完全酶切果蝇基因组DNA,理论上得到DNA片段的平均长度(碱基对)约为( )
A.6 B.250 C.4000 D.24000
2.下列物质,不属于基因工程所需最基本工具的是( )
A.X射线 B.DNA连接酶 C.质粒 D.限制性核酸内切酶
3.基因工程中用两种不同的限制酶切割某一环状DNA分子后,最终得到的片段有( )
A.1个 B.2个 C.3个 D.4个
4.下列关于DNA连接酶的理解正确的是( )
A.DNA连接酶的化学本质是蛋白质
B.DNA连接酶识别DNA分子上的特定碱基序列
C.DNA连接酶不能被反复使用
D.在基因工程操作中可以用DNA聚合酶代替DNA连接酶
5.下列有关基因工程中载体的说法正确的是( )
A.基因工程的载体只有质粒
B.噬菌体可以作为动物基因工程的载体
C.质粒能够在宿主细胞中稳定保存,并在宿主细胞内复制
D.动物病毒不可以作为载体
6.下列有关基因工程的叙述,正确的是( )
A.基因工程是细胞水平上的生物工程 B.基因工程能定向改造生物的性状
C.基因工程的产物对生物都有利 D.基因工程引起的变异属于基因突变
7.基因工程技术也称为DNA重组技术,下列有关基因工程的说法错误的是( )
A.基因工程的基本原理是基因重组
B.基因工程常用的工具酶有限制酶、DNA连接酶和运载体
C.基因工程可以定向改造生物的性状
D.基因工程常用的运载体有质粒、噬菌体和动植物病毒
8.以下关于质粒的叙述不正确的是( )
A.质粒上有复制原点,可以在受体细胞中自主复制
B.质粒能携带外源DNA片段进入受体细胞
C.具有一个或多个限制酶酶切位点,便于目的基因的表达
D.质粒上常有特殊的标记基因
答案以及解析
1.答案:C
解析:C对,据题意可知,限制性内切核酸酶EcoRⅠ的识别序列为,则理论上,该序列出现的概率为1/(4×4×4×4×4×4)=1/4096,即每平均4096个碱基对序列中会出现一个限制性内切核酸酶EcoRⅠ的识别序列,故用限制性内切核酸酶EcoRⅠ完全酶切果蝇基因组DNA,理论上得到DNA片段的平均长度(碱基对个数)约为4O00。
2.答案:A
解析:基因工程需要限制性核酸内切酶来获取目的基因,并将运载体切开;需要DNA连接酶将目的基因和运载体连接起来;需要质粒等运载体将目的基因转入受体细胞中;不需要X射线。
3.答案:B
解析:一种限制酶在DNA分子上进行切割,可得到一个切口,两个黏性末端,所以此题答案选B。
4.答案:A
解析:DNA连接酶的化学本质是蛋白质,A正确;限制酶能够识别DNA分子上的特定碱基序列,DNA连接酶不需要识别DNA分子上的特定碱基序列,B错误;DNA连接酶可以被反复使用,C错误;DNA连接酶能够将两个DNA片段连接起来,而DNA聚合酶只是将一个个脱氧核苷酸连接起到主链上,因此在基因工程操作中不可以用DNA聚合酶代替DNA连接酶,D错误。
5.答案:C
解析:基因工程常用的载体有质粒、噬菌体、动植物病毒等,A、D错误;噬菌体是专门寄生在细菌体内的病毒,不可以作为动物基因工程的载体,B错误;质粒能够在宿主细胞中稳定保存,并在宿主细胞内复制,C正确。
6.答案:B
解析:基因工程是分子水平上的生物工程,A错误;基因工程育种的优点之一是目的性强,可以按照人们的意愿定向改造生物,B正确;基因工程的产物对生物不都是有益的,也可能会存在食品安全,生物安全等问题,C错误;基因工程产生的变异属于基因重组,D错误。
7.答案:B
解析:基因工程的基本原理是人为的基因重组,A正确;基因工程常用的工具酶有限制酶、DNA连接酶,运载体不属于工具酶,B错误;通俗地说,基因工程就是按照人们的意愿,把一种生物的某种基因提取出来,加以修饰改造后放到另一种生物的细胞里定向改造生物的性状,C正确;基因工程常用的运载体有质粒、噬菌体和动植物病毒,D正确。故选B。
8.答案:C
解析:质粒作为载体必须具备的条件之一是能自我复制,故质粒上有复制原点,可以在受体细胞中自主复制,A正确;质粒能携带外源DNA片段进入受体细胞,B正确;运载体中必须具有一个或多个限制酶酶切位点,便于目的基因插入,C错误;质粒上常有特殊的标记基因,便于重组DNA分子的筛选,D正确。