(共26张PPT)
第4节 蛋白质工程的原理和应用
能说出蛋白质工程崛起的缘由。
能概述蛋白质工程的基本原理。
能举例说明蛋白质工程的应用。
右图是用发出不同颜色荧光的细菌“画"的美妙图案。这些细菌能够发出荧光,是因为在它们的体内导入了荧光蛋白的基因。最早被发现的荧光蛋白是绿色荧光蛋白,科学家通过改造它,获得了黄色荧光蛋白等。这些荧光蛋白在细胞内生命活动的检测、肿瘤的示踪研究等领域有着重要应用。
用细菌“画画”(视频)
1. 科学家利用了什么技术让细菌能发出绿色荧光?
基因工程技术使细菌表达了荧光蛋白。
2. 科学家是怎样对蛋白质分子进行设计和改造让细菌能发出黄色荧光?
对蛋白质分子的设计和改造是通过蛋白质工程来实现的
从社会中来
是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础,通过改造或合成基因,来改造现有蛋白质,或制造一种新的蛋白质,以满足人类生产和生活的需求。
基础
结果
目的
蛋白质工程是在基因工程的基础上,延伸出来的第二代基因工程,是涉及多学科的综合科技工程。
操作手段及对象
蛋白质工程
1.基因工程的实质和不足:
将一种生物的______转移到另一种生物体内,后者可以产生它______________________,进而表现出____________。
(1)基因工程的实质:
基因
本不能产生的蛋白质
新的性状
只能生产自然界中已存在的蛋白质
(2)基因工程的局限性:
①基因工程原则上只能生产自然界中已存在的蛋白质;
②天然蛋白质是生物长期进化过程中形成的,它们的结构和功能符合特定物种生存的需要,却不一定完全符合人类生产和生活的需要;
(3)蛋白质工程崛起的缘由:
一、蛋白质工程崛起的缘由
赖氨酸合成
调控
达到一定浓度
两种酶的活性
352位的苏氨酸变成异亮氨酸
二氢吡啶二羧酸合成酶
天冬氨酸激酶
+
104位的天冬酰胺变成异亮氨酸
赖氨酸含量
抑制
提高
提高
限制
提高
提高5倍
提高2倍
蛋白质工程是怎样进行的呢?基本原理是什么?
2.实例:提高玉米赖氨酸含量
请同学们自主阅读教材P94,思考回答问题。
1.蛋白质工程的目标、实质、结果。
2.为什么蛋白质工程改造基因而不是直接改造蛋白质?
3.回顾天然蛋白质合成的过程,构建出蛋白质工程的基本思路。
4.如何辨别一个操作是基因工程还是蛋白质工程?
二、蛋白质工程的基本原理
1.实质、目标和结果:
为什么蛋白质工程需改造基因而不是直接改造蛋白质?
思考:
①蛋白质的高级结构十分复杂,直接改造难度大;
②蛋白质是由基因编码的,改造了基因可以间接改造蛋白质;
③基因可以遗传,蛋白质无法遗传;
目标
实质
结果
根据人们对蛋白质功能的特定需求,对蛋白质的结构进行设计改造。
通过改造或合成基因,来定向改造现有蛋白质或制造新的蛋白质。
生产出自然界没有的蛋白质。
2.天然蛋白质合成过程:
按照中心法则进行
基因
表达
形成具有特定氨基酸序列的多肽链
形成具有高级结构的蛋白质
行使生物功能
转录
翻译
预期功能
生物功能
设计
推测
改造或合成
行使
折叠
目的基因
转录
mRNA
翻译
蛋白质
(三维结构)
多肽链
3.蛋白质工程的基本设计思路:
逆中心法则,与天然蛋白质合成的过程相反
蛋白质工程基本思路的应用
思考 讨论
1.怎样得出决定这一段肽链的脱氧核苷酸序列?请把相应的碱基序列写出来。
某多肽链的一段氨基酸序列是:
丙氨酸
……
……
色氨酸
赖氨酸
苯丙
氨酸
查密码子表
mRNA序列
脱氧核苷酸序列
第一个 碱基 第二个碱基 第三个碱基
U C A G U 苯丙氨酸 苯丙氨酸 亮氨酸 亮氨酸 丝氨酸 丝氨酸 丝氨酸 丝氨酸 酪氨酸 酪氨酸 终 止 终 止 半胱氨酸 半胱氨酸 终 止 色氨酸 U
C
A
G
C 亮氨酸 亮氨酸 亮氨酸 亮氨酸 脯氨酸 脯氨酸 脯氨酸 脯氨酸 组氨酸 组氨酸 谷氨酰胺 谷氨酰胺 精氨酸 精氨酸 精氨酸 精氨酸 U
C
A
G
A 异亮氨酸 异亮氨酸 异亮氨酸 甲硫氨酸(起始) 苏氨酸 苏氨酸 苏氨酸 苏氨酸 天冬酰胺 天冬酰胺 赖氨酸 赖氨酸 丝氨酸 丝氨酸 精氨酸 精氨酸 U
C
A
G
G 缬氨酸 缬氨酸 缬氨酸 缬氨酸、甲硫氨酸(起始) 丙氨酸 丙氨酸 丙氨酸 丙氨酸 天冬氨酸 天冬氨酸 谷氨酸 谷氨酸 甘氨酸 甘氨酸 甘氨酸 甘氨酸 U
C
A
G
氨基酸序列:
丙氨酸—色氨酸—赖氨酸—谷氨酸—苯丙氨酸
mRNA序列:
4×1×2×2×2 = 32种
脱氧核苷酸序列有32种
2.确定目的基因的碱基序列后,怎样才能合成或改造目的基因?
确定目的基因的碱基序列后,可以人工合成目的基因或从基因文库中获取目的基因。对基因的改造经常会用到基因定点突变技术来进行碱基的替换、增添等。
改造蛋白质
天然蛋白质
蛋白质工程基本思路的应用
思考 讨论
蛋白质工程与基因工程的比较
项目 蛋白质工程 基因工程
操作对象
操作起点
操作水平
操作流程
结果
实质
联系 基因
基因
DNA分子水平
DNA分子水平
预期蛋白质功能→设计蛋白质结构→推测氨基酸序列→找到并改变对应的脱氧核苷酸序列(基因)或合成新基因→获得所需要的蛋白质
目的基因的筛选与获取→基因表达载体的构建→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定
可生产自然界没有的蛋白质
生产自然界已有的蛋白质
通过改造或合成基因来定向改造现有蛋白质或制造新的蛋白质
将一种生物的基因转移到另一种生物体内,后者可以产生它本不能产生的蛋白质,进而表现出新的性状
①蛋白质工程是在基因工程基础上延伸出来的第二代基因工程;
②蛋白质工程离不开基因工程,其包含基因工程的基本操作。
预期蛋白质功能
目的基因
是否合成新的基因
蛋白质工程
是否对原有基
因进行改造
是
否
是
否
蛋白质工程
基因工程
看蛋白质
看基因
是否为天然蛋白质
是
否
蛋白质工程
基因工程
如何确定一个操作过程是基因工程技术还是蛋白质工程技术?
自主阅读教材P95,总结蛋白质工程的应用领域及实例。
应用 实例
医药工业方面
其他工业方面
农业方面
三、蛋白质工程的应用
1.医药工业方面
(1)研发速效胰岛素类似物
天然蛋白质易形成二聚体或六聚体
预期结构
改造
B28位脯氨酸替换为天冬氨酸或将它与B29位的赖氨酸交换位置
新胰岛素基因
转录
mRNA
折叠
预期功能
行使功能
降低胰岛素的聚合作用
设计结构
改变B链第20~29位氨基酸组成
推测序列
翻译
多肽链
有效抑制胰岛素的聚合
定点突变
定点突变
(2)延长干扰素体外保存时间
天然干扰素
(体外保存困难)
改造后的干扰素
(-70℃可保存半年)
半胱氨酸
丝氨酸
干扰素在体外保存
相当困难
将干扰素分子上的一个半胱氨酸变成丝氨酸
在-70℃下干扰素可保存半年
(3)制备人鼠嵌合抗体
小鼠单克隆抗体会使人体产生免疫反应,从而导致治疗效果大大降低。
通过改造基因,将小鼠抗体上结合抗原的区域(即可变区)“嫁接”到人的抗体(即恒定区)上,经过这样改造的抗体诱发免疫反应的强度就会减低很多。
①医学问题
②解决方法
基因融合
鼠抗体
人抗体
恒定区
恒定区
可变区
可变区
嵌合抗体
对人体的不良反应减少
改进酶的性能或开发新的工业用酶
如利用蛋白质工程获得枯草杆菌蛋白酶的突变体,筛选出符合工业化生产需求的突变体,提高该酶的使用价值。
枯草杆菌蛋白酶
枯草杆菌
2.其他工业方面的运用:
3.农业方面的运用:
(1)改造某些参与调控光合作用的酶,以提高植物光合作用的速率,增加粮食的产量。
3.农业方面的运用:
伊维菌素是新型的广谱、高效、低毒抗生素类抗寄生虫药
(2)设计优良微生物农药,通过改造微生物蛋白质的结构,使它防治病虫害的效果增强。
应用 实例
医药工业方面
其他工业方面
农业方面
改造胰岛素基因,获得速效胰岛素类似物
改造干扰素基因,延长保存时间
生产人鼠嵌合抗体,降低了诱发人体免疫反应的强度
改进酶的性能或开发新的工业用酶
改造某些参与调控光合作用的酶
设计优良微生物农药
【小结】
(1)面临的问题:蛋白质发挥功能必须依赖于正确的高级结构,而这种高级结构往往十分复杂。
(2)前景展望:要设计出更加符合人类需要的蛋白质,还需要不断地攻坚克难。随着科技的深入发展,蛋白质工程将会给人类带来更多的福祉。
4.面临的问题及前景:
蛋白质工程
理论基础
技术手段
目标
基本思路
实践应用
蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系
通过改造或合成基因,来改造现有蛋白质,或制造一种新的蛋白质
根据人们对蛋白质功能的特定需求,对蛋白质的结构进行设计改造
从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列(基因)或合成新的基因→获得所需要的蛋白质。
药物研发
改进酶的性能或开发新的工业用酶
增加粮食产量、研发新型农药