单元检测卷(一)
(时间：75分钟 满分：100分)
一、选择题(本题共19小题，每小题2分，共38分。每小题给出的四个选项中，只有一个选项是最符合题目要求的)
1.为获得优良的发酵食品，实验室在三支试管中培养了酵母菌、醋酸菌、乳酸菌。图中甲、乙、丙三支试管的菌种及其发酵食品对应正确的是( )
甲试管：酵母菌—果酒、乙试管：醋酸菌—果醋、丙试管：乳酸菌—泡菜
甲试管：醋酸菌—泡菜、乙试管：酵母菌—果酒、丙试管：乳酸菌—果醋
甲试管：乳酸菌—果酒、乙试管：酵母菌—泡菜、丙试管：醋酸菌—果醋
甲试管：醋酸菌—果醋、乙试管：乳酸菌—泡菜、丙试管：酵母菌—果酒
2．关于平板划线法和稀释涂布平板法的叙述，不正确的是( )
只能应用于固体培养基接种
都可以用于微生物的计数
接种培养后均可获得单菌落
接种用具都需进行严格灭菌
3．(2024·绿谷联盟联考)下列关于培养基的配制和灭菌的叙述，正确的是( )
配制培养基时，先进行灭菌，再调节pH
培养基的配制必须在酒精灯火焰旁进行
将培养基转移到三角瓶和试管时必须用玻璃漏斗
尿素固体培养基中的所有成分均需在121 ℃下灭菌15 min
(2024·嘉兴高二期中)阅读下列材料，回答4～5题。
酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。
4．上图为纯化酵母菌的一个操作环节，下列叙述错误的是( )
该操作步骤是接种，方法是平板划线法
除第一次划线外，以后的每一次划线的起点是上一次划线的末端
图中酵母菌密度最小的是最后画线处5
该接种方法可用于酵母菌的计数
5．研究人员从土壤中筛选得到可以利用工业废甲醇的酵母菌株，并对其降解甲醇的条件进行了研究。下列叙述正确的是( )
筛选该酵母菌株需要在以甲醇为唯一碳源的培养基中培养
探究最适温度时对发酵液的pH没有要求
只能用稀释涂布平板法分离该酵母菌
利用该酵母菌株降解甲醇时需严格保持无氧环境
6．(2024·九省联考广西卷，4)以木薯淀粉水解糖为原料，利用酿酒酵母生产燃料乙醇的过程，叙述错误的是( )
发酵全过程中酿酒酵母菌数量持续增加
发酵过程中乙醇浓度会影响酿酒酵母的活性
生产过程中酿酒酵母既有需氧呼吸，也有厌氧呼吸
需要考虑发酵体系中渗透压对酿酒酵母生长的影响
7.抑菌圈是指在细菌培养基上，细菌生长受到抗生素抑制的范围。抑菌圈的大小与抗生素的浓度、细菌的敏感性、培养基的成分等因素有关。通常是抑菌圈越大越好，因为这意昧着抗生素的抑菌效果越强，对细菌的杀灭作用也更强。为探究不同浓度的青霉素对流感杆菌的抑菌效果，某实验小组将流感杆菌接种到蛋白胨培养基上，接着用滤纸片蘸取不同浓度的青霉素放置在该平板上。培养一段时间后，结果如图所示。下列说法正确的是( )
若流感杆菌离不开维生素，需在该培养基上另添加维生素
放置滤纸片前，培养基表面丙处对应的流感杆菌浓度高
将流感杆菌接种到该培养基上，所用接种工具是接种环
图示三个滤纸片中，甲滤纸片对应的青霉素浓度抑菌效果最好
8．无菌操作是微生物培养过程中的关键环节，下列叙述错误的是( )
煮沸可以杀死微生物细胞和一部分芽孢，达到消毒目的
培养真菌时，在培养基中加入青霉素可抑制某些细菌的生长
在酒精灯火焰旁操作可以减少空气中微生物落入培养基的可能性
含葡萄糖的培养基需在121 ℃(1 kg/cm2压力)条件下高压蒸汽灭菌20分钟
9．为了筛选能产生阿拉伯胶(一种多糖)降解酶的菌株SM01，应选用下表中的哪种培养基( )
培养基 阿拉 伯胶 阿拉伯 胶酶 NaNO3 牛肉膏 MgSO4 KCl FeSO4
甲 25 － － 3 1 0.5 0.01
乙 25 10－6 － － 1 0.5 0.01
丙 － － 3 3 1 0.5 0.01
丁 25 － 3 － 1 0.5 0.01
注：单位为g/L。
甲 乙
丙 丁
10．幽门螺杆菌是急慢性胃炎和胃溃疡的主要致病菌，它能将尿素分解成氨气等物质。若从携带者胃黏膜样本中分离幽门螺杆菌，下列相关实验步骤和方法合理的是( )
配制培养基时应以尿素为唯一碳源
可利用酚红指示剂鉴定幽门螺杆菌的菌落
培养微生物的试剂和器具都要进行高压蒸汽灭菌
样本可用蒸馏水稀释后涂布平板，统计样本中活菌数量
11．在三个培养皿中各加入等量但不同种的大肠杆菌培养基，在培养皿中培养36小时后计算细菌的克隆数(下表)。下列培养皿的结果中，能说明大肠杆菌生长需要碳源的是( )
在不同条件下大肠杆菌的生长量
培养皿 培养基 培养皿上的细菌克隆数
Ⅰ 琼脂、糖类 35
Ⅱ 琼脂、糖类和维生素 250
Ⅲ 琼脂和维生素 0
培养皿Ⅰ和Ⅲ 培养皿Ⅰ和Ⅱ
培养皿Ⅱ和Ⅲ 培养皿Ⅲ
12.某高校采用如图所示的发酵罐进行葡萄酒发酵过程的研究。下列叙述正确的是( )
为加快发酵速度，应使发酵液保持35 ℃的恒温
给发酵罐适时排气，后期可缩短排气间隔时间
可以通过监测发酵过程中残余糖的浓度来决定何时终止发酵
若定期对培养液中酵母菌进行计数，只能采用稀释涂布平板法
13．发酵工程在食品工业、医药工业和农牧业等许多领域得到了广泛的应用。在发酵过程中，发酵条件控制至关重要。下列关于发酵条件控制的叙述，错误的是( )
发酵过程要严格控制温度、pH、溶解氧等发酵条件
发酵过程中微生物代谢产热和机械搅拌产热，会使发酵罐温度升高，因此要及时调节发酵罐温度
培养基中营养物质的利用和代谢物的积累，可能会导致发酵液pH发生改变，如工业酿酒会导致pH上升
现代工业发酵对发酵条件的监测和控制是通过计算机系统实现的，可以使发酵过程处于最佳状态
14．下列对发酵产品的分离、提纯和加工的说法，错误的是( )
为了获得大量酵母菌，可采用离心等方法
酿制白酒时，常用蒸馏的方法提取发酵产品
通常在微生物生长的稳定期，从放出的老培养基中分离发酵产品
发酵过程中的环境条件只影响微生物的生长繁殖，不影响微生物代谢产物的形成
阅读下列材料，回答15～16题。
北魏贾思勰的《齐民要术》记载泡菜制作的方法，泡菜使用低浓度的盐水，再经乳酸菌发酵，制成一种带酸味的腌制品，只要乳酸含量达到一定的浓度，并使产品隔绝空气，就可以达到久贮的目的。
15．下列关于泡菜的叙述，错误的是( )
参与泡菜腌制的微生物为厌氧乳酸菌，在无氧条件下将葡萄糖分解成乳酸使泡菜带酸味
腌制泡菜时盐水应没过全部菜料，盖上坛盖再用水密封泡菜坛
盖上泡菜坛盖，用水封住坛口的目的是使泡菜始终浸入在水环境中
从泡菜汁中可以分离到制作酸奶的菌种
16．泡菜发酵的微生物主要是乳酸菌，而在发酵初期，水槽内经常有气泡产生，这些气泡产生的原因及成分分析最合理的是( )
乳酸菌初期进行需氧呼吸产生CO2；气体为CO2
发酵初期活动强烈的是酵母菌，其利用氧气产生CO2；气体为CO2
因腌制过程中的盐进入蔬菜使蔬菜体积变小，气体被排出；气体为空气
乳酸菌在发酵过程中产生了热量，使坛内温度升高，空气受热膨胀排出；气体为空气
17．(2024·山东滨州高二期中改编)下列有关微生物的分离、培养及计数的相关说法，正确的是( )
培养霉菌时一般需要将培养基调至中性偏碱
用平板划线法分离菌种，划线5个区域，接种环需要灼烧灭菌6次
用稀释涂布平板法进行微生物计数时，结果往往比实际值多
接种、分离后使用过的器皿须先洗涤再彻底灭菌
18．(2024·九省联考广西卷，10)渥堆是六堡茶生产的关键工艺，渥堆期间微生物分泌的多酚氧化酶可催化茶叶中的儿茶素(C15H14O6)形成黄红色的氧化聚合物。要从渥堆茶叶样品中筛选产多酚氧化酶的细菌，下表中培养基配方设计最合理的是(注：“－”表示不添加；“＋”表示添加。)( )
组分/ (g·L－1) 名称 儿茶 素 牛肉 膏 葡萄 糖 KNO3 蛋白胨 NaCl 琼脂
2 5 20 1 10 5 18
A 甲 － － ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
B 乙 ＋ ＋ － － ＋ ＋ ＋
C 丙 ＋ － ＋ － － ＋ ＋
D 丁 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ － －
A B
C D
19．研究小组欲从土壤中筛选某种抗生素产生菌，进行如下实验：首先将土壤样品充分稀释涂布在培养基甲上，待长出单菌落后，再将单菌落取出并移至涂布有S菌的培养基乙上，一段时间后观察结果如图所示。下列说法正确的是( )
涂布前必须使用清水对土壤样品进行充分稀释
只有采用稀释涂布平板法接种，才能在培养基甲上获得单菌落
有抑菌圈的菌落产生的抗生素能抑制S菌的生长
抑菌圈的直径越大，说明菌落产生抗生素的能力就越强
二、非选择题(本题共5小题，共62分)
20．(12分)(2024·温州新力量联盟联考)下图甲、乙是微生物接种常用的两种方式，回答相关问题：
(1)(4分)图甲是利用________法进行微生物接种的，图乙是利用________法进行微生物接种的，这两种方法所用的接种工具分别是________和________。
(2)(4分)平板划线时，为保证微生物的数目随划线次数的增加而逐步减少，除第一次划线，每次划线都要从________开始，平板划线结束后，最后一次划的线不能与第一次划的线________。
(3)(2分)接种操作一定要在酒精灯火焰附近进行，原因是_________________________________________________________________。
(4)(2分)假设用图乙所示方法接种培养结束后，发现培养基上菌落连成一片，可能的原因是________________________________________________________
___________________________________________________________________。
21．(12分)酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。下图所示为操作流程，请回答下列问题：
(1)(2分)配制培养基时，应及时对培养基进行分装，并进行________灭菌。
(2)(2分)取步骤②中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中，在步骤③中将温度约50 ℃的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后________培养。
(3)(2分)挑取分离平板中长出的单菌落，按步骤④所示进行划线。下列叙述合理的有________(多选)。
a．为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌
b．划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落
c．挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量
d．可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受菌株
(4)(6分)步骤⑤中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和____________供应。为监测酵母的活细胞密度，经等体积台盼蓝染液染色，理论上应统计________色细胞的个数。
22．(13分)酸奶是牛奶经过乳酸菌(主要是保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌)发酵制成的。乳酸菌可将牛奶中的乳糖转化为乳酸，从而减轻某些人群的乳糖不耐受症状。请回答问题：
(1)(3分)为鉴别市售酸奶中的菌种，应该采用平板划线法或________法，在________培养基上进行接种，观察所获单菌落的特征。还要对菌落中的菌种进行涂片，并用________进行进一步的观察和鉴定。
(2)(2分)实验前需要进行灭菌的是________。
a．培养基 b．培养皿 c．恒温培养箱 d．实验者的双手 e．酸奶
(3)(2分)某同学在配制平板时加入CaCO3，从而成功筛选出高效产生乳酸的菌株，其筛选依据的原理是_________________________________________________
___________________________________________________________________。
(4)(6分)抗生素在现代畜牧业中的广泛应用，不可避免地造成牛奶中抗生素残留。若长期饮用含有抗生素的牛奶，会对人体健康造成危害。利用嗜热链球菌对抗生素的高敏感性，该同学进行了如下实验：
将灭菌的滤纸圆片(直径8 mm)，分别浸润在不同处理的牛奶中一段时间后，放置在涂布了嗜热链球菌的平板上(如下图)，在37 ℃下培养24 h，测量结果如下表：
组别 牛奶处理方法 抑菌圈直径/mm
1 含抗生素消毒鲜牛奶 4.5
2 不含抗生素消毒鲜牛奶 0
3 含抗生素鲜牛奶 4.6
4 不含抗生素鲜牛奶 0
5 待测奶样 5.8
通过3、4组实验可得出的结论为__________________；通过1、3组实验可得出的结论为：__________________；第5组的实验结果表明，此待测奶样是否适合用于制作酸奶？__________________________________________。
23．(12分)(2022·全国甲卷，37)某同学从被石油污染的土壤中分离得到A和B两株可以降解石油的细菌，在此基础上采用平板培养法比较二者降解石油的能力，并分析两个菌株的其他生理功能。
实验所用的培养基成分如下：
培养基Ⅰ：K2HPO4、MgSO4、NH4NO3、石油。
培养基Ⅱ：K2HPO4、MgSO4、石油。
操作步骤：
①将A、B菌株分别接种在两瓶液体培养基Ⅰ中培养，得到A、B菌液；
②液体培养基Ⅰ、Ⅱ中添加琼脂，分别制成平板Ⅰ、Ⅱ，并按图中所示在平板上打甲、乙两孔。
回答下列问题：
菌株 透明圈大小
平板Ⅰ 平板Ⅱ
A ＋＋＋ ＋＋
B ＋＋ －
（1）（2分）实验所用培养基中作为碳源的成分是 。培养基中NH4NO3的作用是为菌株的生长提供氮源，氮源在菌体内可以参与合成 （答出2种即可）等生物大分子。
（2）（2分）步骤①中，在资源和空间不受限制的阶段，若最初接种N0个A细菌，繁殖n代后细菌的数量是 。
（3）（4分）为了比较A、B降解石油的能力，某同学利用步骤②所得到的平板Ⅰ、Ⅱ进行实验，结果如表所示（“＋”表示有透明圈，“＋”越多表示透明圈越大，“－”表示无透明圈），推测该同学的实验思路是___________________________________________________________________
___________________________________________________________________。
（4）（4分）现有一贫氮且被石油污染的土壤，根据上表所示实验结果，治理石油污染应选用的菌株是 ，理由是___________________________________________________________________
___________________________________________________________________。
24.（13分）待测药物在琼脂平板中扩散使其周围的细菌生长受到抑制而形成的透明圈叫作抑菌圈。抑菌圈研究法中经常使用牛津杯法和打孔法，牛津杯法是将已灭菌的牛津杯置于平板中，打孔法是用已灭菌的打孔器在平板上打孔。某研究小组的实验流程如图1，回答下列问题：
→→→
图1
（1）（3分）蛋白胨可为微生物的生长提供 等营养物质。为了使培养基呈固态，需要加入 。为了防止外来杂菌污染，常常采取 法对培养基进行灭菌。
（2）（4分）预加菌液倾注倒平板是向已冷却至50 ℃左右的培养基中注入一定量的菌液，混合均匀后倒平板。倒平板的温度过高，容易烫伤操作者和 ， 温度过低又会导致 。
（3）（6分）将一定的待测药物接种于牛津杯或小孔中，置于4 ℃条件下处理2 h，目的是_____________________________________________________________
___________________________________________________________________。
两种方法的示意图如图2，通过比较抑菌圈，发现打孔法误差较小，原因是牛津杯法药物从表面向四周呈球形扩散，培养基越厚，培养基表面和底部药物的浓度差异越明显，导致____________________________________________________
____________________________________________________________________，
对测量造成一定的影响。
单元检测卷(一)
1．D [醋酸菌是好氧菌，分布在试管上层，用于制果醋，为甲试管；乳酸菌是厌氧菌，分布于试管下层，用于泡菜发酵，为乙试管；酵母菌是兼性厌氧型，有氧无氧都能生存，在试管中分布均匀，用于果酒制作，为丙试管。]
2．B [平板划线法和稀释涂布平板法均是在固体培养基表面操作，A正确；平板划线法和稀释涂布平板法均可获得单菌落，但平板划线法不能用于微生物的计数，B错误，C正确；二者均需对接种用具灭菌，D正确。]
3．C [配制培养基时，应先调节pH，再进行灭菌，减少杂菌污染的机会，A错误；培养基的配制不需要在酒精灯火焰旁进行，因为配制好的培养基需要进行高压蒸汽灭菌，B错误；将培养基转移到三角瓶和试管时必须用玻璃漏斗，以免培养基粘在三角瓶壁或试管壁上，C正确；尿素受热会分解，须采用G6玻璃砂漏斗进行过滤除菌，D错误。]
4．D [接种过程按区域进行划线接种，这种接种方法属于平板划线法，A正确；划线的过程也是菌种得到分散的过程，通过划线使菌种得到稀释，所以除第一次划线外，以后的每一次划线的起点是上一次划线的末端，经培养就可以在划线的尾部得到单个细胞繁殖成的单菌落，B正确；通过划线使菌种得到稀释，所以最后一个划线区域5中酵母菌密度最小，C正确；该接种方法不能用于酵母菌的计数，D错误。]
5．A [筛选降解甲醇的酵母菌，需要在以甲醇为唯一碳源的培养基中培养，该培养基让以甲醇为唯一碳源的酵母菌可以生长，同时抑制或阻止了其他微生物生长，A正确；探究培养酵母菌的最适温度时，每个温度下发酵液的pH都要相同且适宜酵母菌生长、繁殖，B错误；分离酵母菌除了可以用稀释涂布平板法外，还可以用其他方法，如平板划线法，C错误；酵母菌是兼性厌氧生物，在有氧条件下进行需氧呼吸，大量繁殖，所以在培养的初期要保证有氧环境，让酵母菌大量繁殖，以保证酵母菌的数量，D错误。]
6．A [发酵全过程中酿酒酵母菌数量先增加后减少，A错误；发酵过程中乙醇浓度过高会抑制酿酒酵母的活性，B正确；生产过程中酿酒酵母早期进行需氧呼吸大量繁殖，后期进行厌氧呼吸产生酒精，C正确；渗透压也会影响酵母细胞的活性，故需要考虑发酵体系中渗透压对酿酒酵母生长的影响，D正确。]
7．D [据题可知．该培养基为蛋白胨培养基，蛋白胨中含有碳源、氮源、维生素，A错误；该实验自变量是青霉素的浓度，培养基表面流感杆菌应均匀分布，B错误；流感杆菌在培养基表面均匀分布，采用稀释涂布平板法，所用接种工具是涂布器，C错误；图示三个滤纸片中，甲滤纸片对应的抑菌圈最大，甲滤纸片对应的青霉素浓度抑菌效果最好，D正确。]
8．D [葡萄糖在115 ℃以上会焦化，因此对含葡萄糖的培养基，应采用适应降低温度、压力(112 ℃，500 g/cm2)以及延长时间(30 min)的高压灭菌方法灭菌，或采用已在121 ℃下高压蒸汽灭菌的、孔径最小的G6玻璃砂漏斗对葡萄糖进行过滤除菌后，再在超净工作台内添加到培养基中，D错误。]
9．D [培养基丁以阿拉伯胶作为唯一碳源符合要求，即利用培养基丁可以筛选该菌株，D正确。]
10．B [选择培养基中应以尿素为唯一氮源，A不合理；在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素，为幽门螺杆菌的菌落，B合理；接种室、接种箱等常用紫外线消毒法处理，涂布器等常用灼烧灭菌法处理，培养基及多种器材用高压蒸汽灭菌法处理，C不合理；稀释涂布平板法的样本需要用无菌水进行稀释，D不合理。]
11．C [分析表格数据可知，Ⅰ与Ⅱ对照，自变量是维生素的有无，说明大多数大肠杆菌生长需要外界提供维生素；Ⅱ和Ⅲ对照，自变量是糖类有无，说明大肠杆菌的生长需要糖类(糖类主要提供碳源和能源)。综上，C正确，A、B、D错误。]
12．C [酵母菌发酵的适宜温度为25 ℃左右，A错误；在发酵过程中需要给发酵罐适时排气，随着发酵过程的进行，产生的二氧化碳越来越少，后期可延长排气间隔时间，B错误；葡萄酒发酵的原料是糖类，因此可以通过监测发酵过程中残余糖的浓度来决定何时终止发酵，C正确；若定期对培养液中酵母菌进行计数，除采用稀释涂布平板法，还可以采用显微镜计数法，D错误。]
13．C [果酒制作过程中不仅会产生酒精，还会产生大量的二氧化碳，因此利用酵母菌制作果酒的过程中，发酵液的pH会下降，C错误。]
14．D [将培养液进行离心，在沉淀中可以获得大量的酵母菌，A正确；通过蒸馏把酒醅中的酒精、水、高级醇、酯类等有效成分变为蒸汽，再经冷却即可得到白酒，B正确；稳定期的生长菌群总数处于平稳阶段，此时期细菌增殖数与死亡数渐趋平衡，许多重要的发酵产物主要在此期间大量积累并达到最高峰，可在这个时期从放出的老培养基中分离发酵产品，C正确；发酵过程中的环境条件不仅影响微生物的生长繁殖，也影响微生物代谢产物的形成，D错误。]
15．C [在制作泡菜时，利用的微生物是乳酸菌，腌制时，盐水应没过全部菜料，盖上坛盖，用水封住坛口的目的是防止外界空气进入，保持无氧环境，B正确，C错误；乳酸菌为厌氧菌，在无氧条件下将葡萄糖分解成乳酸使泡菜带酸味，A正确；制作泡菜和酸奶都是利用乳酸菌，故从泡菜汁中可以分离到制作酸奶的菌种，D正确。]
16．B [乳酸菌是厌氧型微生物，只能进行厌氧呼吸产生乳酸，A错误；泡菜发酵初期有气泡产生，可能是酵母菌进行需氧呼吸产生了CO2，B正确，C、D错误。]
17．B [在培养霉菌时，需要将培养基pH调至中性偏酸，A错误；用平板划线法分离菌种，划线5个区域，每次接种之前需要灼烧接种环灭菌，最后划线完成也需要灼烧灭菌，共6次，B正确；用稀释涂布平板法进行微生物计数时，统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，C错误；微生物实验完成后需先灭菌后再对相关工具进行洗涤，以免造成环境污染，D错误。]
18．B [甲培养基没有儿茶素，无法筛选，A错误；乙培养基为固体培养基，且含有碳源、氮源、无机盐、水、儿茶素，B正确；丙培养基没有氮源，产多酚氧化酶的细菌无法生存，C错误；丁未加入琼脂，液体培养基无法筛选，D错误。]
19．C [涂布前必须使用无菌水对土壤样品进行充分稀释，A错误；稀释涂布平板法和平板划线法接种，都能在培养基甲上获得单菌落，B错误；有抑菌圈说明该圈内S菌不生长，即有抑菌圈的菌落产生的抗生素能抑制S菌的生长，C正确；抑菌圈直径与菌落直径的比值越大，说明该菌落产生抗生素的能力越强，不能只看抑菌圈直径的大小，D错误。]
20．(1)平板划线 稀释涂布平板 接种环 涂布器
(2)上一次划线的末端 相连(或相接、相交、交叉等)
(3)酒精灯火焰附近存在着无菌区域
(4)稀释倍数不够，菌液的浓度太高
解析 (1)根据图甲接种后的结果可知，甲接种微生物采用的是平板划线法，这种方法的接种工具是接种环；图乙采用的接种工具是涂布器，可见其利用的是稀释涂布平板法。(2)平板划线时，除第一次划线，每次划线前都要从上一次划线的末端开始，这是因为接种环需通过上一次的划线获得菌种后再进行下一次的划线分离，这样才能保证微生物的数目随划线次数的增加而逐步减少。平板划线结束后，最后一次的划线不能与第一次的划线相连(或相接、相交、交叉等)。(3)由于火焰附近存在着无菌区域，因此为了防止杂菌污染，接种操作一定要在火焰附近进行。(4)采用稀释涂布平板法进行菌种分离时，如果稀释倍数不够，菌液的浓度太高，就会导致微生物不能分散成单个细胞，在培养基上出现菌落连成一片的现象。
21．(1)高压蒸汽 (2)倒置 (3)abd
(4)氧气 无
解析 (1)配制培养基时，分装到锥形瓶中进行高压蒸汽灭菌。(2)平板应倒置培养，以避免冷凝水滴入培养基，造成污染。(3)平板划线时，接种针、接种环使用前和每次划线后都需要进行灼烧灭菌，以免造成杂菌污染，a合理；划线时不能划破培养基表面，否则不能形成正常菌落，b合理；挑取菌落时，应挑取多个不同的菌落，分别测定酵母细胞中蛋白质含量，c不合理；逐步提高培养基中甲醇的浓度，能筛选出其中的耐受菌，获得甲醇高耐受菌株，d合理。(4)台盼蓝只染死细胞。
22．(1)稀释涂布平板 固体 显微镜
(2)ab
(3)乳酸会与CaCO3反应形成透明圈，透明圈直径越大，产生乳酸能力越强
(4)抗生素能够杀死嗜热链球菌，形成抑菌圈 消毒不会使牛奶中的抗生素减少或消除 不适合
解析 (1)为鉴别市售酸奶中的菌种，应该采用平板划线法或稀释涂布平板法，在固体培养基上进行接种，观察所获单菌落的特征。还要对菌落中的菌种进行涂片，并用显微镜进行进一步的观察和鉴定。(2)消毒是指采用较温和的物理、化学方法仅杀死物体表面或内部一部分不需要的微生物。灭菌则是采用强烈的物理、化学方法杀灭物体表面以及内部的一切微生物的方法。培养基和培养皿需要灭菌；恒温培养箱和实验者的双手需要消毒；酸奶中含有菌种，不能进行消毒和灭菌。(3)某同学在配制平板时加入CaCO3，从而成功筛选出高效产生乳酸的菌株，其筛选依据的原理是乳酸会与CaCO3反应形成透明圈，透明圈直径越大，产生乳酸能力越强。(4)3、4组实验的自变量是有无抗生素，实验结果显示含抗生素鲜牛奶有抑菌圈，不含抗生素的鲜牛奶没有抑菌圈，说明抗生素能够杀死嗜热链球菌，形成抑菌圈。1、3组实验的自变量是鲜牛奶是否消毒，实验结果显示不管鲜牛奶是否消毒，其抑菌圈都存在且大小基本相同，说明消毒不会使牛奶中的抗生素减少或消除。第5组待测奶样抑菌圈直径为5.8 mm，说明该奶样含有抗生素，故不适合用于制作酸奶。
23．(1)石油 DNA、RNA、蛋白质
(2)N0·2n (3)在无菌条件下，将等量等浓度的A菌液和B菌液分别接种到平板Ⅰ的甲和乙两孔处，平板Ⅱ也进行同样的操作，在相同且适宜条件下培养一段时间，比较两个平板的两孔处的透明圈大小并作记录，根据透明圈大降解能力强，透明圈小降解能力弱，进而比较A、B降解石油的能力 (4)A A菌株降解石油的能力高于B菌株，并且在没有添加氮源的培养基中也能生长
解析 (1)培养基的成分有碳源、氮源、无机盐和水等，从组成培养基的物质所含化学元素可知，作为碳源的成分是石油。生物大分子DNA、RNA、蛋白质都含有N元素，故氮源在菌体内可以参与合成这些物质。(2)由题意“资源和空间不受限制”可知，细菌数量的增长呈“J”形增长，细菌每繁殖一代就是上一代的2倍，根据公式Nt＝N0·λt，λ＝2，繁殖n代后细菌的数量是N0·2n。(3)分析表格数据可知，实验的结果是：在平板Ⅰ上，A菌株降解石油的能力高于B菌株；在平板Ⅱ上，A菌株仍然能降解石油，而B菌株不能降解，根据实验的单一变量和对照原则，推测该同学的思路是：在无菌条件下，将等量等浓度的A菌液和B菌液分别接种到平板Ⅰ的甲和乙两孔处，平板Ⅱ也进行同样的操作，在相同且适宜条件下培养一段时间，比较两个平板的两孔处的透明圈大小并作记录，根据透明圈大降解能力强，透明圈小降解能力弱，进而比较A、B降解石油的能力。(4)由表格数据可知，因为A菌株降解石油的能力高于B菌株，并且在没有添加氮源的培养基中也能生长，所以要治理贫氮且被石油污染的土壤，应该选用A菌株。
24．(1)碳源、氮源 凝固剂(琼脂) 高压蒸汽灭菌
(2)杀死培养基中的微生物 培养基快速凝固
(3)使药物在培养基上扩散 培养基不同深度的抑菌圈大小不同
解析 (1)蛋白胨来源于动植物蛋白，富含有机氮化合物，也含一些维生素和糖类，可以为微生物的生长提供碳源、氮源等营养物质。为了使培养基呈固态，需要加入凝固剂，常用的是琼脂。常采取高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。(2)待培养基冷却到50 ℃左右时倒平板，温度过高，容易烫伤操作者和杀死培养基中的微生物，温度过低时，培养基容易凝固。(3)将一定的待测药物接种于牛津杯或小孔中，置于4 ℃条件下处理2 h，目的是使药物在培养基上扩散。两种方法的示意图如图2，通过比较抑菌圈，发现打孔法误差较小，原因是牛津杯法药物从表面向四周呈球形扩散，培养基越厚，培养基表面和底部药物的浓度差异越明显，导致培养基不同深度的抑菌圈大小不同，对测量造成一定的影响。(共69张PPT)
单元检测卷(一)
(时间：75分钟 满分：100分)
D
一、选择题(本题共19小题，每小题2分，共38分。每小题给出的四个选项中，只有一个选项是最符合题目要求的)
1.为获得优良的发酵食品，实验室在三支试管中培养了酵母菌、醋酸菌、乳酸菌。图中甲、乙、丙三支试管的菌种及其发酵食品对应正确的是( )
A.甲试管：酵母菌—果酒、乙试管：醋酸菌—果醋、
丙试管：乳酸菌—泡菜
B.甲试管：醋酸菌—泡菜、乙试管：酵母菌—果酒、
丙试管：乳酸菌—果醋
C.甲试管：乳酸菌—果酒、乙试管：酵母菌—泡菜、丙试管：醋酸菌—果醋
D.甲试管：醋酸菌—果醋、乙试管：乳酸菌—泡菜、丙试管：酵母菌—果酒
解析：醋酸菌是好氧菌，分布在试管上层，用于制果醋，为甲试管；乳酸菌是厌氧菌，分布于试管下层，用于泡菜发酵，为乙试管；酵母菌是兼性厌氧型，有氧无氧都能生存，在试管中分布均匀，用于果酒制作，为丙试管。
A.甲试管：酵母菌—果酒、乙试管：醋酸菌—果醋、丙试管：乳酸菌—泡菜
B.甲试管：醋酸菌—泡菜、乙试管：酵母菌—果酒、丙试管：乳酸菌—果醋
C.甲试管：乳酸菌—果酒、乙试管：酵母菌—泡菜、丙试管：醋酸菌—果醋
D.甲试管：醋酸菌—果醋、乙试管：乳酸菌—泡菜、丙试管：酵母菌—果酒
2.关于平板划线法和稀释涂布平板法的叙述，不正确的是( )
A.只能应用于固体培养基接种 B.都可以用于微生物的计数
C.接种培养后均可获得单菌落 D.接种用具都需进行严格灭菌
解析：平板划线法和稀释涂布平板法均是在固体培养基表面操作，A正确；
平板划线法和稀释涂布平板法均可获得单菌落，但平板划线法不能用于微生物的计数，B错误，C正确；
二者均需对接种用具灭菌，D正确。
B
3.(2024·绿谷联盟联考)下列关于培养基的配制和灭菌的叙述，正确的是( )
A.配制培养基时，先进行灭菌，再调节pH
B.培养基的配制必须在酒精灯火焰旁进行
C.将培养基转移到三角瓶和试管时必须用玻璃漏斗
D.尿素固体培养基中的所有成分均需在121 ℃下灭菌15 min
C
解析：配制培养基时，应先调节pH，再进行灭菌，减少杂菌污染的机会，A错误；
培养基的配制不需要在酒精灯火焰旁进行，因为配制好的培养基需要进行高压蒸汽灭菌，B错误；
将培养基转移到三角瓶和试管时必须用玻璃漏斗，以免培养基粘在三角瓶壁或试管壁上，C正确；
尿素受热会分解，须采用G6玻璃砂漏斗进行过滤除菌，D错误。
(2024·嘉兴高二期中)阅读下列材料，回答4～5题。
酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。
4.如图为纯化酵母菌的一个操作环节，下列叙述错误的是( )
A.该操作步骤是接种，方法是平板划线法
B.除第一次划线外，以后的每一次划线的起点是上一次划线的末端
C.图中酵母菌密度最小的是最后画线处5
D.该接种方法可用于酵母菌的计数
D
解析：接种过程按区域进行划线接种，这种接种方法属于平板划线法，A正确；
划线的过程也是菌种得到分散的过程，通过划线使菌种得到稀释，所以除第一次划线外，以后的每一次划线的起点是上一次划线的末端，经培养就可以在划线的尾部得到单个细胞繁殖成的单菌落，B正确；
通过划线使菌种得到稀释，所以最后一个划线区域5中酵母菌密度最小，C正确；
该接种方法不能用于酵母菌的计数，D错误。
A.该操作步骤是接种，方法是平板划线法
B.除第一次划线外，以后的每一次划线的起点是上一次划线的末端
C.图中酵母菌密度最小的是最后画线处5
D.该接种方法可用于酵母菌的计数
5.研究人员从土壤中筛选得到可以利用工业废甲醇的酵母菌株，并对其降解甲醇的条件进行了研究。下列叙述正确的是( )
A.筛选该酵母菌株需要在以甲醇为唯一
碳源的培养基中培养
B.探究最适温度时对发酵液的pH没有要求
C.只能用稀释涂布平板法分离该酵母菌
D.利用该酵母菌株降解甲醇时需严格保持无氧环境
A
解析：筛选降解甲醇的酵母菌，需要在以甲醇为唯一碳源的培养基中培养，该培养基让以甲醇为唯一碳源的酵母菌可以生长，同时抑制或阻止了其他微生物生长，A正确；
探究培养酵母菌的最适温度时，每个温度下发酵液的pH都要相同且适宜酵母菌生长、繁殖，B错误；
分离酵母菌除了可以用稀释涂布平板法外，还可以用其他方法，如平板划线法，C错误；
酵母菌是兼性厌氧生物，在有氧条件下进行需氧呼吸，大量繁殖，所以在培养的初期要保证有氧环境，让酵母菌大量繁殖，以保证酵母菌的数量，D错误。
A.筛选该酵母菌株需要在以甲醇为唯一碳源的培养基中培养
B.探究最适温度时对发酵液的pH没有要求
C.只能用稀释涂布平板法分离该酵母菌
D.利用该酵母菌株降解甲醇时需严格保持无氧环境
6.(2024·九省联考广西卷，4)以木薯淀粉水解糖为原料，利用酿酒酵母生产燃料乙醇的过程，叙述错误的是( )
A.发酵全过程中酿酒酵母菌数量持续增加
B.发酵过程中乙醇浓度会影响酿酒酵母的活性
C.生产过程中酿酒酵母既有需氧呼吸，也有厌氧呼吸
D.需要考虑发酵体系中渗透压对酿酒酵母生长的影响
A
解析：发酵全过程中酿酒酵母菌数量先增加后减少，A错误；
发酵过程中乙醇浓度过高会抑制酿酒酵母的活性，B正确；
生产过程中酿酒酵母早期进行需氧呼吸大量繁殖，后期进行厌氧呼吸产生酒精，C正确；
渗透压也会影响酵母细胞的活性，故需要考虑发酵体系中渗透压对酿酒酵母生长的影响，D正确。
7.抑菌圈是指在细菌培养基上，细菌生长受到抗生素抑制的范围。抑菌圈的大小与抗生素的浓度、细菌的敏感性、培养基的成分等因素有关。通常是抑菌圈越大越好，因为这意昧着抗生素的抑菌效果越强，对细菌的杀灭作用也更强。为探究不同浓度的青霉素对流感杆菌的抑菌效果，某实验小组将流感杆菌接种到蛋白胨培养基上，接着用滤纸片蘸取不同浓度的青霉素放置在该平板上。培养一段时间后，结果如图所示。下列说法正确的是( )
D
A.若流感杆菌离不开维生素，需在该培养基上另添加维生素
B.放置滤纸片前，培养基表面丙处对应的流感杆菌浓度高
C.将流感杆菌接种到该培养基上，所用接种工具是接种环
D.图示三个滤纸片中，甲滤纸片对应的青霉素浓度抑菌效果最好
解析：据题可知.该培养基为蛋白胨培养基，蛋白胨中含有碳源、氮源、维生素，A错误；
该实验自变量是青霉素的浓度，培养基表面流感杆菌应均匀分布，B错误；
流感杆菌在培养基表面均匀分布，采用稀释涂布平板法，所用接种工具是涂布器，C错误；
图示三个滤纸片中，甲滤纸片对应的抑菌圈最大，甲滤纸片对应的青霉素浓度抑菌效果最好，D正确。
A.若流感杆菌离不开维生素，需在该培养基上另添加维生素
B.放置滤纸片前，培养基表面丙处对应的流感杆菌浓度高
C.将流感杆菌接种到该培养基上，所用接种工具是接种环
D.图示三个滤纸片中，甲滤纸片对应的青霉素浓度抑菌效果最好
8.无菌操作是微生物培养过程中的关键环节，下列叙述错误的是( )
A.煮沸可以杀死微生物细胞和一部分芽孢，达到消毒目的
B.培养真菌时，在培养基中加入青霉素可抑制某些细菌的生长
C.在酒精灯火焰旁操作可以减少空气中微生物落入培养基的可能性
D.含葡萄糖的培养基需在121 ℃(1 kg/cm2压力)条件下高压蒸汽灭菌20分钟
D
解析：葡萄糖在115 ℃以上会焦化，因此对含葡萄糖的培养基，应采用适应降低温度、压力(112 ℃，500 g/cm2)以及延长时间(30 min)的高压灭菌方法灭菌，或采用已在121 ℃下高压蒸汽灭菌的、孔径最小的G6玻璃砂漏斗对葡萄糖进行过滤除菌后，再在超净工作台内添加到培养基中，D错误。
9.为了筛选能产生阿拉伯胶(一种多糖)降解酶的菌株SM01，应选用下表中的哪种培养基( )
D
培养基 阿拉伯胶 阿拉伯胶酶 NaNO3 牛肉膏 MgSO4 KCl FeSO4
甲 25 － － 3 1 0.5 0.01
乙 25 10－6 － － 1 0.5 0.01
丙 － － 3 3 1 0.5 0.01
丁 25 － 3 － 1 0.5 0.01
注：单位为g/L。
A.甲 B.乙 C.丙 D.丁
解析：培养基丁以阿拉伯胶作为唯一碳源符合要求，即利用培养基丁可以筛选该菌株，D正确。
10.幽门螺杆菌是急慢性胃炎和胃溃疡的主要致病菌，它能将尿素分解成氨气等物质。若从携带者胃黏膜样本中分离幽门螺杆菌，下列相关实验步骤和方法合理的是( )
A.配制培养基时应以尿素为唯一碳源
B.可利用酚红指示剂鉴定幽门螺杆菌的菌落
C.培养微生物的试剂和器具都要进行高压蒸汽灭菌
D.样本可用蒸馏水稀释后涂布平板，统计样本中活菌数量
B
解析：选择培养基中应以尿素为唯一氮源，A不合理；
在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素，为幽门螺杆菌的菌落，B合理；
接种室、接种箱等常用紫外线消毒法处理，涂布器等常用灼烧灭菌法处理，培养基及多种器材用高压蒸汽灭菌法处理，C不合理；
稀释涂布平板法的样本需要用无菌水进行稀释，D不合理。
11.在三个培养皿中各加入等量但不同种的大肠杆菌培养基，在培养皿中培养36小时后计算细菌的克隆数(下表)。下列培养皿的结果中，能说明大肠杆菌生长需要碳源的是( )
C
在不同条件下大肠杆菌的生长量 培养皿 培养基 培养皿上的细菌克隆数
Ⅰ 琼脂、糖类 35
Ⅱ 琼脂、糖类和维生素 250
Ⅲ 琼脂和维生素 0
A.培养皿Ⅰ和Ⅲ B.培养皿Ⅰ和Ⅱ
C.培养皿Ⅱ和Ⅲ D.培养皿Ⅲ
解析：分析表格数据可知，Ⅰ与Ⅱ对照，自变量是维生素的有无，说明大多数大肠杆菌生长需要外界提供维生素；Ⅱ和Ⅲ对照，自变量是糖类有无，说明大肠杆菌的生长需要糖类(糖类主要提供碳源和能源)。综上，C正确，A、B、D错误。
12.某高校采用如图所示的发酵罐进行葡萄酒发酵过程的研究。下列叙述正确的是( )
C
A.为加快发酵速度，应使发酵液保持35 ℃的恒温
B.给发酵罐适时排气，后期可缩短排气间隔时间
C.可以通过监测发酵过程中残余糖的浓度来决定何时终止发酵
D.若定期对培养液中酵母菌进行计数，只能采用稀释涂布平板法
解析：酵母菌发酵的适宜温度为25 ℃左右，A错误；
在发酵过程中需要给发酵罐适时排气，随着发酵过程的进行，产生的二氧化碳越来越少，后期可延长排气间隔时间，B错误；
葡萄酒发酵的原料是糖类，因此可以通过监测发酵过程中残余糖的浓度来决定何时终止发酵，C正确；
若定期对培养液中酵母菌进行计数，除采用稀释涂布平板法，还可以采用显微镜计数法，D错误。
A.为加快发酵速度，应使发酵液保持35 ℃的恒温
B.给发酵罐适时排气，后期可缩短排气间隔时间
C.可以通过监测发酵过程中残余糖的浓度来决定何时终止发酵
D.若定期对培养液中酵母菌进行计数，只能采用稀释涂布平板法
13.发酵工程在食品工业、医药工业和农牧业等许多领域得到了广泛的应用。在发酵过程中，发酵条件控制至关重要。下列关于发酵条件控制的叙述，错误的是( )
A.发酵过程要严格控制温度、pH、溶解氧等发酵条件
B.发酵过程中微生物代谢产热和机械搅拌产热，会使发酵罐温度升高，因此要及时调节发酵罐温度
C.培养基中营养物质的利用和代谢物的积累，可能会导致发酵液pH发生改变，如工业酿酒会导致pH上升
D.现代工业发酵对发酵条件的监测和控制是通过计算机系统实现的，可以使发酵过程处于最佳状态
C
解析：果酒制作过程中不仅会产生酒精，还会产生大量的二氧化碳，因此利用酵母菌制作果酒的过程中，发酵液的pH会下降，C错误。
14.下列对发酵产品的分离、提纯和加工的说法，错误的是( )
A.为了获得大量酵母菌，可采用离心等方法
B.酿制白酒时，常用蒸馏的方法提取发酵产品
C.通常在微生物生长的稳定期，从放出的老培养基中分离发酵产品
D.发酵过程中的环境条件只影响微生物的生长繁殖，不影响微生物代谢产物的形成
D
解析：将培养液进行离心，在沉淀中可以获得大量的酵母菌，A正确；
通过蒸馏把酒醅中的酒精、水、高级醇、酯类等有效成分变为蒸汽，再经冷却即可得到白酒，B正确；
稳定期的生长菌群总数处于平稳阶段，此时期细菌增殖数与死亡数渐趋平衡，许多重要的发酵产物主要在此期间大量积累并达到最高峰，可在这个时期从放出的老培养基中分离发酵产品，C正确；
发酵过程中的环境条件不仅影响微生物的生长繁殖，也影响微生物代谢产物的形成，D错误。
阅读下列材料，回答15～16题。
北魏贾思勰的《齐民要术》记载泡菜制作的方法，泡菜使用低浓度的盐水，再经乳酸菌发酵，制成一种带酸味的腌制品，只要乳酸含量达到一定的浓度，并使产品隔绝空气，就可以达到久贮的目的。
15.下列关于泡菜的叙述，错误的是( )
A.参与泡菜腌制的微生物为厌氧乳酸菌，在无氧条件下将葡萄糖分解成乳酸使泡菜带酸味
B.腌制泡菜时盐水应没过全部菜料，盖上坛盖再用水密封泡菜坛
C.盖上泡菜坛盖，用水封住坛口的目的是使泡菜始终浸入在水环境中
D.从泡菜汁中可以分离到制作酸奶的菌种
C
解析：在制作泡菜时，利用的微生物是乳酸菌，腌制时，盐水应没过全部菜料，盖上坛盖，用水封住坛口的目的是防止外界空气进入，保持无氧环境，B正确，C错误；
乳酸菌为厌氧菌，在无氧条件下将葡萄糖分解成乳酸使泡菜带酸味，A正确；
制作泡菜和酸奶都是利用乳酸菌，故从泡菜汁中可以分离到制作酸奶的菌种，D正确。
16.泡菜发酵的微生物主要是乳酸菌，而在发酵初期，水槽内经常有气泡产生，这些气泡产生的原因及成分分析最合理的是( )
A.乳酸菌初期进行需氧呼吸产生CO2；气体为CO2
B.发酵初期活动强烈的是酵母菌，其利用氧气产生CO2；气体为CO2
C.因腌制过程中的盐进入蔬菜使蔬菜体积变小，气体被排出；气体为空气
D.乳酸菌在发酵过程中产生了热量，使坛内温度升高，空气受热膨胀排出；气体为空气
B
解析：乳酸菌是厌氧型微生物，只能进行厌氧呼吸产生乳酸，A错误；
泡菜发酵初期有气泡产生，可能是酵母菌进行需氧呼吸产生了CO2，B正确，C、D错误。
17.(2024·山东滨州高二期中改编)下列有关微生物的分离、培养及计数的相关说法，正确的是( )
A.培养霉菌时一般需要将培养基调至中性偏碱
B.用平板划线法分离菌种，划线5个区域，接种环需要灼烧灭菌6次
C.用稀释涂布平板法进行微生物计数时，结果往往比实际值多
D.接种、分离后使用过的器皿须先洗涤再彻底灭菌
B
解析：在培养霉菌时，需要将培养基pH调至中性偏酸，A错误；
用平板划线法分离菌种，划线5个区域，每次接种之前需要灼烧接种环灭菌，最后划线完成也需要灼烧灭菌，共6次，B正确；
用稀释涂布平板法进行微生物计数时，统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，C错误；
微生物实验完成后需先灭菌后再对相关工具进行洗涤，以免造成环境污染，D错误。
18.(2024·九省联考广西卷，10)渥堆是六堡茶生产的关键工艺，渥堆期间微生物分泌的多酚氧化酶可催化茶叶中的儿茶素(C15H14O6)形成黄红色的氧化聚合物。要从渥堆茶叶样品中筛选产多酚氧化酶的细菌，下表中培养基配方设计最合理的是(注：“－”表示不添加；“＋”表示添加。)( )
B
解析：甲培养基没有儿茶素，无法筛选，A错误；
乙培养基为固体培养基，且含有碳源、氮源、无机盐、水、儿茶素，B正确；
丙培养基没有氮源，产多酚氧化酶的细菌无法生存，C错误；
丁未加入琼脂，液体培养基无法筛选，D错误。
19.研究小组欲从土壤中筛选某种抗生素产生菌，进行如下实验：首先将土壤样品充分稀释涂布在培养基甲上，待长出单菌落后，再将单菌落取出并移至涂布有S菌的培养基乙上，一段时间后观察结果如图所示。下列说法正确的是( )
C
A.涂布前必须使用清水对土壤样品进
行充分稀释
B.只有采用稀释涂布平板法接种，才
能在培养基甲上获得单菌落
C.有抑菌圈的菌落产生的抗生素能抑制S菌的生长
D.抑菌圈的直径越大，说明菌落产生抗生素的能力就越强
解析：涂布前必须使用无菌水对土壤样品进行充分稀释，A错误；
稀释涂布平板法和平板划线法接种，都能在培养基甲上获得单菌落，B错误；
有抑菌圈说明该圈内S菌不生长，即有抑菌圈的菌落产生的抗生素能抑制S菌的生长，C正确；
抑菌圈直径与菌落直径的比值越大，说明该菌落产生抗生素的能力越强，不能只看抑菌圈直径的大小，D错误。
A.涂布前必须使用清水对土壤样品进行充分稀释
B.只有采用稀释涂布平板法接种，才能在培养基甲上获得单菌落
C.有抑菌圈的菌落产生的抗生素能抑制S菌的生长
D.抑菌圈的直径越大，说明菌落产生抗生素的能力就越强
二、非选择题(本题共5小题，共62分)
20.(12分)(2024·温州新力量联盟联考)下图甲、乙是微生物接种常用的两种方式，回答相关问题：
(1)图甲是利用__________法进行微生物接种的，图乙是利用______________法进行微生物接种的，这两种方法所用的接种工具分别是________和________。
平板划线
稀释涂布平板
接种环
涂布器
(2)平板划线时，为保证微生物的数目随划线次数的增加而逐步减少，除第一次划线，每次划线都要从____________________开始，平板划线结束后，最后一次划的线不能与第一次划的线______________________________。
上一次划线的末端
相连(或相接、相交、交叉等)
(3)接种操作一定要在酒精灯火焰附近进行，原因是___________________________________。
(4)假设用图乙所示方法接种培养结束后，发现培养基上菌落连成一片，可能的原因是______________________________________________________________。
酒精灯火焰附近存在着无菌区域
稀释倍数不够，菌液的浓度太高
解析：(1)根据图甲接种后的结果可知，甲接种微生物采用的是平板划线法，这种方法的接种工具是接种环；图乙采用的接种工具是涂布器，可见其利用的是稀释涂布平板法。
(2)平板划线时，除第一次划线，每次划线前都要从上一次划线的末端开始，这是因为接种环需通过上一次的划线获得菌种后再进行下一次的划线分离，这样才能保证微生物的数目随划线次数的增加而逐步减少。平板划线结束后，最后一次的划线不能与第一次的划线相连(或相接、相交、交叉等)。
(3)由于火焰附近存在着无菌区域，因此为了防止杂菌污染，接种操作一定要在火焰附近进行。
(4)采用稀释涂布平板法进行菌种分离时，如果稀释倍数不够，菌液的浓度太高，就会导致微生物不能分散成单个细胞，在培养基上出现菌落连成一片的现象。
21.(12分)酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。如图所示为操作流程，请回答下列问题：
(1)配制培养基时，应及时对培养基进行分装，并进行__________灭菌。
(2)取步骤②中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中，在步骤③中将温度约50 ℃的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后________培养。
高压蒸汽
倒置
(3)挑取分离平板中长出的单菌落，按步骤④所示进行划线。下列叙述合理的有________(多选)。
a.为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌
b.划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落
c.挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量
d.可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受菌株
abd
(4)步骤⑤中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和________供应。为监测酵母的活细胞密度，经等体积台盼蓝染液染色，理论上应统计________色细胞的个数。
氧气
无
解析：(1)配制培养基时，分装到锥形瓶中进行高压蒸汽灭菌。
(2)平板应倒置培养，以避免冷凝水滴入培养基，造成污染。
(3)平板划线时，接种针、接种环使用前和每次划线后都需要进行灼烧灭菌，以免造成杂菌污染，a合理；划线时不能划破培养基表面，否则不能形成正常菌落，b合理；挑取菌落时，应挑取多个不同的菌落，分别测定酵母细胞中蛋白质含量，c不合理；逐步提高培养基中甲醇的浓度，能筛选出其中的耐受菌，获得甲醇高耐受菌株，d合理。
(4)台盼蓝只染死细胞。
22.(13分)酸奶是牛奶经过乳酸菌(主要是保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌)发酵制成的。乳酸菌可将牛奶中的乳糖转化为乳酸，从而减轻某些人群的乳糖不耐受症状。请回答问题：
(1)为鉴别市售酸奶中的菌种，应该采用平板划线法或_________________法，在________培养基上进行接种，观察所获单菌落的特征。还要对菌落中的菌种进行涂片，并用________进行进一步的观察和鉴定。
(2)实验前需要进行灭菌的是________。
a.培养基 b.培养皿 c.恒温培养箱 d.实验者的双手 e.酸奶
稀释涂布平板
固体
显微镜
ab
(3)某同学在配制平板时加入CaCO3，从而成功筛选出高效产生乳酸的菌株，其筛选依据的原理是________________________________________________
___________________________。
(4)抗生素在现代畜牧业中的广泛应用，不可避免地造成牛奶中抗生素残留。若长期饮用含有抗生素的牛奶，会对人体健康造成危害。利用嗜热链球菌对抗生素的高敏感性，该同学进行了如下实验：
将灭菌的滤纸圆片(直径8 mm)，分别浸润在不同处理的牛奶中一段时间后，放置在涂布了嗜热链球菌的平板上(如下图)，在37 ℃下培养24 h，测量结果如下表：
乳酸会与CaCO3反应形成透明圈，透明圈直径越大，
产生乳酸能力越强
组别 牛奶处理方法 抑菌圈直径/mm
1 含抗生素消毒鲜牛奶 4.5
2 不含抗生素消毒鲜牛奶 0
3 含抗生素鲜牛奶 4.6
4 不含抗生素鲜牛奶 0
5 待测奶样 5.8
通过3、4组实验可得出的结论为________________________________________；通过1、3组实验可得出的结论为：____________________________________；第5组的实验结果表明，此待测奶样是否适合用于制作酸奶？____________________________________________。
抗生素能够杀死嗜热链球菌，形成抑菌圈
消毒不会使牛奶中的抗生素减少或消除
不适合
解析：(1)为鉴别市售酸奶中的菌种，应该采用平板划线法或稀释涂布平板法，在固体培养基上进行接种，观察所获单菌落的特征。还要对菌落中的菌种进行涂片，并用显微镜进行进一步的观察和鉴定。
(2)消毒是指采用较温和的物理、化学方法仅杀死物体表面或内部一部分不需要的微生物。灭菌则是采用强烈的物理、化学方法杀灭物体表面以及内部的一切微生物的方法。培养基和培养皿需要灭菌；恒温培养箱和实验者的双手需要消毒；酸奶中含有菌种，不能进行消毒和灭菌。
(3)某同学在配制平板时加入CaCO3，从而成功筛选出高效产生乳酸的菌株，其筛选依据的原理是乳酸会与CaCO3反应形成透明圈，透明圈直径越大，产生乳酸能力越强。
(4)3、4组实验的自变量是有无抗生素，实验结果显示含抗生素鲜牛奶有抑菌圈，不含抗生素的鲜牛奶没有抑菌圈，说明抗生素能够杀死嗜热链球菌，形成抑菌圈。1、3组实验的自变量是鲜牛奶是否消毒，实验结果显示不管鲜牛奶是否消毒，其抑菌圈都存在且大小基本相同，说明消毒不会使牛奶中的抗生素减少或消除。第5组待测奶样抑菌圈直径为5.8 mm，说明该奶样含有抗生素，故不适合用于制作酸奶。
23.(12分)(2022·全国甲卷，37)某同学从被石油污染的土壤中分离得到A和B两株可以降解石油的细菌，在此基础上采用平板培养法比较二者降解石油的能力，并分析两个菌株的其他生理功能。
实验所用的培养基成分如下：
培养基Ⅰ：K2HPO4、MgSO4、NH4NO3、石油。
培养基Ⅱ：K2HPO4、MgSO4、石油。
操作步骤：
①将A、B菌株分别接种在两瓶液体培养基Ⅰ中培养，得到A、B菌液；
②液体培养基Ⅰ、Ⅱ中添加琼脂，分别制成平板Ⅰ、Ⅱ，并按图中所示在平板上打甲、乙两孔。
回答下列问题：
(1)实验所用培养基中作为碳源的成分是__________。培养基中NH4NO3的作用是为菌株的生长提供氮源，氮源在菌体内可以参与合成_____________________
(答出2种即可)等生物大分子。
石油
DNA、RNA、蛋白质
(2)步骤①中，在资源和空间不受限制的阶段，若最初接种N0个A细菌，繁殖n代后细菌的数量是__________。
(3)为了比较A、B降解石油的能力，某同学利用步骤②所得到的平板Ⅰ、Ⅱ进行实验，结果如表所示(“＋”表示有透明圈，“＋”越多表示透明圈越大，“－”表示无透明圈)，推测该同学的实验思路是__________________________________________
______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。
N0·2n
在无菌条件下，将等量等浓度的A菌液和B菌液分别接种到平板Ⅰ的甲和乙两孔处，平板Ⅱ也进行同样的操作，在相同且适宜条件下培养一段时间，比较两个平板的两孔处的透明圈大小并作记录，根据透明圈大降解能力强，透明圈小降解能力弱，进而比较A、B降解石油的能力
(4)现有一贫氮且被石油污染的土壤，根据上表所示实验结果，治理石油污染应选用的菌株是__________，理由是________________________________________________________________________________。
A
A菌株降解石油的能力高于B菌株，并且在没有添加氮源的培养基中也能生长
解析：(1)培养基的成分有碳源、氮源、无机盐和水等，从组成培养基的物质所含化学元素可知，作为碳源的成分是石油。生物大分子DNA、RNA、蛋白质都含有N元素，故氮源在菌体内可以参与合成这些物质。
(2)由题意“资源和空间不受限制”可知，细菌数量的增长呈“J”形增长，细菌每繁殖一代就是上一代的2倍，根据公式Nt＝N0·λt，λ＝2，繁殖n代后细菌的数量是N0·2n。
(3)分析表格数据可知，实验的结果是：在平板Ⅰ上，A菌株降解石油的能力高于B菌株；在平板Ⅱ上，A菌株仍然能降解石油，而B菌株不能降解，根据实验的单一变量和对照原则，推测该同学的思路是：在无菌条件下，将等量等浓度的A菌液和B菌液分别接种到平板Ⅰ的甲和乙两孔处，平板Ⅱ也进行同样的操作，在相同且适宜条件下培养一段时间，比较两个平板的两孔处的透明圈大小并作记录，根据透明圈大降解能力强，透明圈小降解能力弱，进而比较A、B降解石油的能力。
(4)由表格数据可知，因为A菌株降解石油的能力高于B菌株，并且在没有添加氮源的培养基中也能生长，所以要治理贫氮且被石油污染的土壤，应该选用A菌株。
24.(13分)待测药物在琼脂平板中扩散使其周围的细菌生长受到抑制而形成的透明圈叫作抑菌圈。抑菌圈研究法中经常使用牛津杯法和打孔法，牛津杯法是将已灭菌的牛津杯置于平板中，打孔法是用已灭菌的打孔器在平板上打孔。某研究小组的实验流程如图1，回答下列问题：
(1)蛋白胨可为微生物的生长提供__________________等营养物质。为了使培养基呈固态，需要加入______________。为了防止外来杂菌污染，常常采取____________法对培养基进行灭菌。
碳源、氮源
凝固剂(琼脂)
高压蒸汽灭菌
(2)预加菌液倾注倒平板是向已冷却至50 ℃左右的培养基中注入一定量的菌液，混合均匀后倒平板。倒平板的温度过高，容易烫伤操作者和___________________________________________________， 温度过低又会导致____________________________________________。
杀死培养基中的微生物
培养基快速凝固
(3)将一定的待测药物接种于牛津杯或小孔中，置于4 ℃条件下处理2 h，目的是______________________________。
两种方法的示意图如图2，通过比较抑菌圈，发现打孔法误差较小，原因是牛津杯法药物从表面向四周呈球形扩散，培养基越厚，培养基表面和底部药物的浓度差异越明显，导致________________________________，对测量造成一定的影响。
使药物在培养基上扩散
培养基不同深度的抑菌圈大小不同
解析：(1)蛋白胨来源于动植物蛋白，富含有机氮化合物，也含一些维生素和糖类，可以为微生物的生长提供碳源、氮源等营养物质。为了使培养基呈固态，需要加入凝固剂，常用的是琼脂。常采取高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。
(2)待培养基冷却到50 ℃左右时倒平板，温度过高，容易烫伤操作者和杀死培养基中的微生物，温度过低时，培养基容易凝固。
(3)将一定的待测药物接种于牛津杯或小孔中，置于4 ℃条件下处理2 h，目的是使药物在培养基上扩散。两种方法的示意图如图2，通过比较抑菌圈，发现打孔法误差较小，原因是牛津杯法药物从表面向四周呈球形扩散，培养基越厚，培养基表面和底部药物的浓度差异越明显，导致培养基不同深度的抑菌圈大小不同，对测量造成一定的影响。
