课时1 细胞培养是动物细胞工程的基础
课时概念解析 本课时的概念为“动物细胞培养是从动物体获得相关组织，分散成单个细胞后，在适宜环境下让细胞生长和增殖的过程。动物细胞培养是动物细胞工程的基础”，该概念的建构需要以下概念或证据的支持：
(1)动物体细胞可在体外适宜条件下进行培养；(2)动物细胞培养包括原代培养和传代培养。
概念1 动物体细胞可在体外适宜条件下进行培养
1.动物细胞培养的概念
从动物体获得相关组织，分散成________细胞后，在适宜环境下让细胞________和________的过程。
2.动物细胞培养的3个条件
[辨正误]
(1)动物细胞培养时，培养液中加入抗生素，可以抑制细菌和真菌的生长。( )
(2)哺乳动物细胞培养的适宜温度一般为37±0.5 ℃，适宜pH一般为7.2～7.4。( )
(3)动物细胞培养时，CO2的作用是刺激动物细胞的细胞呼吸。( )
(生活、学习和实践情境)某科研团队开发了一种治疗抑郁的新药，需要研究确定这种药物对大脑神经元的影响。它们利用刚出生的小鼠，分离得到小鼠的神经元进行细胞培养，然后进行相关的离体实验。
请分析回答下列问题：
(1)利用刚出生的小鼠进行神经元培养，是因为刚出生小鼠的神经元________。
A. 容易产生各种变异
B. 具有更强的全能性
C. 取材十分方便
D. 具有更强的分裂能力
(2)该科研团队在对小鼠神经元进行细胞培养时，所用的培养基为固体培养基还是液体培养基？其主要成分是什么？_____________________________________
____________________________________________________________________
(3)在对小鼠神经元进行细胞培养时，该科研团队向所用的培养基中加入了一定量的抗生素，其目的是什么？__________________________________________
___________________________________________________________________
动物细胞培养所用的培养基
【典例应用】
例1 下列有关动物细胞培养时所提供的物质及其作用的描述错误的是( )
选项 提供物质 作用
A 抗生素 防止培养过程中被病毒感染
B 血清 补充培养基中缺乏的物质
C 氧气 满足细胞代谢的需要
D 二氧化碳 维持培养液的酸碱度
例2 动物细胞培养要处于无菌、无毒的环境中，下列操作与其无关的是( )
A.对培养液和培养用具进行无菌处理
B.在培养液中添加一定量的抗生素
C.定期更换培养液，防止代谢产物积累
D.向培养液中添加生长因子等成分
概念2 动物细胞培养包括原代培养和传代培养
1.动物细胞培养的过程
2.细胞系与细胞株
3.细胞克隆
4.动物细胞培养的应用
[辨正误]
(1)动物成纤维细胞的培养过程中，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理剪碎的组织块，其目的是消化组织中的胶原纤维和细胞外的其他成分，获得单个的成纤维细胞悬液。( )
(2)体外培养的动物细胞都有贴壁生长和接触抑制的特点。( )
(3)细胞克隆最基本的要求是必须保证分离出来的细胞是一个或多个同种细胞。( )
(生活、学习和实践情境)在治疗大面积烧伤病人时，通常取患者自身皮肤的成纤维细胞或皮肤干细胞，在体外培养获得大量的自体健康皮肤(大致过程如下面概念图所示)，再移植给患者进行恢复性治疗。
动物细胞培养构建的人造皮肤
(1)①和③过程都需要使用胰蛋白酶处理，两次处理的作用分别是什么？____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
(2)②和④过程中，细胞生长有什么特性？
____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
(3)有限细胞系和连续细胞系是否都有接触抑制？____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
(4)动物细胞培养的原理是细胞全能性还是细胞增殖？___________________________________________________________________
____________________________________________________________________
植物组织培养与动物细胞培养的比较
提醒：①通常认为，动物细胞培养的原理是细胞增殖，而植物组织培养的原理是细胞的全能性；②动物细胞培养和植物组织培养都要求无菌操作。
【典例应用】
例3 (2024·天域名校联考)下图为幼鼠肾脏上皮细胞培养过程示意图，已知肾脏上皮细胞属于需要贴附于某些基质表面才能生长增殖的细胞。下列叙述错误的是( )
A.甲→乙过程需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理
B.丙过程会出现细胞贴壁和接触抑制现象
C.丙、丁过程均要在无菌、无毒的环境下进行
D.丁过程为传代培养，细胞都能进行无限增殖
例4 (2024·丽水质检)动物细胞培养时，培养细胞的生命期如下图所示。下列叙述正确的是( )
A.可以使用稀释涂布平板法或显微镜计数法对细胞进行计数
B.传代培养前，常用胰蛋白酶处理使原培养瓶内细胞分散
C.随着细胞传代次数不断增加，传代间隔的时长越来越小
D.有限细胞系培养过程中会出现接触抑制现象，而无限细胞系不会
1.(2024·浙江1月选考，13)某动物细胞培养过程中，细胞贴壁生长至接触抑制时，需分装培养，实验操作过程如图。
下列叙述错误的是( )
A.①加消化液的目的是使细胞与瓶壁分离
B.②加培养液的目的是促进细胞增殖
C.③分装时需调整到合适的细胞密度
D.整个过程需要在无菌、无毒条件下进行
2.(2021·浙江1月选考，18)下图为动物成纤维细胞的培养过程示意图。下列叙述正确的是( )
A.步骤①的操作不需要在无菌环境中进行
B.步骤②中用盐酸溶解细胞间物质使细胞分离
C.步骤③到④的分瓶操作前常用胰蛋白酶处理
D.步骤④培养过程中不会发生细胞转化
3.(2022·湖北卷，7)某兴趣小组开展小鼠原代神经元培养的研究，结果发现其培养的原代神经元生长缓慢，其原因不可能是( )
A.实验材料取自小鼠胚胎的脑组织
B.为了防止污染将培养瓶瓶口密封
C.血清经过高温处理后加入培养基
D.所使用的培养基呈弱酸性
课时1 细胞培养是动物细胞工程的基础
概念1
自主建构
1．单个 生长 增殖
2．37 7.2～7.4 pH 氧气 培养环境 操作过程 抗生素 细菌和真菌 过滤 氨基酸 维生素 生长因子
辨正误
(1)√ (2)√
(3)× 提示：动物细胞培养时，CO2的作用是调节pH的相对稳定。
合作探究
(1)提示：D
(2)提示：液体培养基。主要成分包括水、无机盐、氨基酸、维生素、糖类、生长因子等。
(3)提示：抑制细菌和真菌的生长，预防污染。
典例应用
例1 A [抗生素抑制细菌和真菌的生长。]
例2 D [对培养液和培养用具进行无菌处理，可以为动物细胞培养提供无菌环境，A正确；在培养液中添加一定量的抗生素，可以抑制真菌和细菌的生长，为动物细胞培养提供无菌环境，B正确；定期更换培养液，防止代谢产物积累，可以为动物细胞培养提供无毒的环境，C正确；向培养液中添加生长因子等成分可以促进细胞生长、发育和增殖，但不能为动物细胞培养创造无菌、无毒的环境，D错误。]
概念2
自主建构
1．1 胰蛋白 胶原蛋白 80% 酶消化
2．首次传代 有限 选择 纯化 原代培养物 细胞系 染色体组型 抗性 连续 有限
3．单细胞 细胞群体 一 多 单个 基因型 遗传性状
4．正常或病变 损伤组织器官 动物疫苗 干扰素
辨正误
(1)√
(2)× 提示：来源于血液、淋巴组织的细胞以及某些肿瘤细胞不表现出贴壁生长的特点，而是呈悬浮生长状态。
(3)× 提示：细胞克隆最基本的要求是必须保证分离出来的细胞是一个而不是多个，即必须肯定所建成的克隆来源于单个细胞。
合作探究
(1)提示：①第一次：用胰蛋白酶处理剪碎的动物组织块，目的是把组织块分散为单个细胞后进行培养，即原代培养；②第二次：细胞培养过程中出现贴壁生长，用胰蛋白酶处理使其从瓶壁上脱离下来，分散成单个细胞，然后将其转移到多个培养瓶中继续进行培养，即传代培养。
(2)提示：贴壁生长和接触抑制。
(3)提示：有限细胞系存在接触抑制；连续细胞系中的恶性细胞系失去接触抑制，但良性无限细胞系保留接触抑制现象。
(4)提示：细胞增殖。
典例应用
例3 D [传代培养一定时间后，只有少数细胞能够无限增殖，D错误。]
例4 B [动物细胞不能用稀释涂布平板法计数，A错误；根据曲线图可知，随着细胞传代次数不断增加，传代间隔的时长基本不变，C错误；无限细胞系中的良性无限细胞系虽已获得了不死性，但仍保留接触抑制现象，D错误。]
感悟真题
1．B [因为动物细胞培养过程中会贴壁生长，所以加消化液的目的是使细胞和瓶壁分离，A正确；②加培养液是为了终止消化液的作用，并对细胞加以稀释，B错误；分装时要调整到合适的细胞密度，便于后续的细胞培养，C正确；动物细胞培养需要在无菌、无毒条件下进行，D正确。]
2．C [步骤①的操作也需要在无菌环境下进行，A错误；在制备动物细胞悬液过程中要经胶原蛋白酶或胰蛋白酶消化，使组织块分散成单个细胞，B错误；原代培养的贴壁细胞需经胰蛋白酶处理后制成细胞悬液才能传代，C正确；在传代培养过程中，培养的细胞可能转化为连续细胞系，D错误。]
3．A [小鼠胚胎脑组织中含有丰富的原代神经元，细胞增殖能力强，不会造成生长缓慢，A符合题意；培养瓶瓶口密封会使培养液中缺氧，影响细胞需氧呼吸，造成供能不足，可能使细胞生长缓慢，B不符合题意；血清经过高温处理后，其中大量活性成分变性，失去原有功能，细胞生存环境严重恶化，可能使细胞生长缓慢，C不符合题意；小鼠内环境为弱碱性，所使用的培养基呈弱酸性，使细胞生存环境恶劣，可能造成细胞生长缓慢，D不符合题意。](共37张PPT)
第三章 动物细胞工程
课时1
细胞培养是动物细胞工程的基础
本课时的概念为“动物细胞培养是从动物体获得相关组织，分散成单个细胞后，在适宜环境下让细胞生长和增殖的过程。动物细胞培养是动物细胞工程的基础”，该概念的建构需要以下概念或证据的支持：
(1)动物体细胞可在体外适宜条件下进行培养；(2)动物细胞培养包括原代培养和传代培养。
课时概念解析
目录 CONTENTS
1.动物体细胞可在体外适宜条件下进行培养
2.动物细胞培养包括原代培养和传代培养
3.感悟真题
自主建构
合作探究
合作探究
课时概念图
自主建构
1.动物细胞培养的概念
从动物体获得相关组织，分散成______细胞后，在适宜环境下让细胞______和______的过程。
单个
生长
增殖
2.动物细胞培养的3个条件
37
7.2～7.4
pH
氧气
2.动物细胞培养的3个条件
培养环
境
操作过程
抗生素
细菌和真菌
过滤
氨基酸
维生素
生长因子
√
[辨正误]
(1)动物细胞培养时，培养液中加入抗生素，可以抑制细菌和真菌的生长。( )
(2)哺乳动物细胞培养的适宜温度一般为37±0.5 ℃，适宜pH一般为7.2～7.4。( )
(3)动物细胞培养时，CO2的作用是刺激动物细胞的细胞呼吸。( )
提示：动物细胞培养时，CO2的作用是调节pH的相对稳定。
√
×
(生活、学习和实践情境)某科研团队开发了一种治疗抑郁的新药，需要研究确定这种药物对大脑神经元的影响。它们利用刚出生的小鼠，分离得到小鼠的神经元进行细胞培养，然后进行相关的离体实验。
请分析回答下列问题：
(1)利用刚出生的小鼠进行神经元培养，是因为刚出生小鼠的神经元________。
A. 容易产生各种变异 B. 具有更强的全能性
C. 取材十分方便 D. 具有更强的分裂能力
D
(2)该科研团队在对小鼠神经元进行细胞培养时，所用的培养基为固体培养基还是液体培养基？其主要成分是什么？
提示：液体培养基。主要成分包括水、无机盐、氨基酸、维生素、糖类、生长因子等。
(3)在对小鼠神经元进行细胞培养时，该科研团队向所用的培养基中加入了一定量的抗生素，其目的是什么？
提示：抑制细菌和真菌的生长，预防污染。
●动物细胞培养液中常含有在高温条件下变性失去功能的物质，如血清，对于这些成分应如何保证无菌？
提示：过滤除菌。
动物细胞培养所用的培养基
【典例应用 】
A
例1 下列有关动物细胞培养时所提供的物质及其作用的描述错误的是( )
选项 提供物质 作用
A 抗生素 防止培养过程中被病毒感染
B 血清 补充培养基中缺乏的物质
C 氧气 满足细胞代谢的需要
D 二氧化碳 维持培养液的酸碱度
解析：抗生素抑制细菌和真菌的生长。
D
例2 动物细胞培养要处于无菌、无毒的环境中，下列操作与其无关的是( )
A.对培养液和培养用具进行无菌处理
B.在培养液中添加一定量的抗生素
C.定期更换培养液，防止代谢产物积累
D.向培养液中添加生长因子等成分
解析：对培养液和培养用具进行无菌处理，可以为动物细胞培养提供无菌环境，A正确；
在培养液中添加一定量的抗生素，可以抑制真菌和细菌的生长，为动物细胞培养提供无菌环境，B正确；
定期更换培养液，防止代谢产物积累，可以为动物细胞培养提供无毒的环境，C正确；
向培养液中添加生长因子等成分可以促进细胞生长、发育和增殖，但不能为动物细胞培养创造无菌、无毒的环境，D错误。
蛋白质
1.动物细胞培养的过程
1
胰蛋白
胶原蛋白
80%
酶消化
2.细胞系与细胞株
首次传代
有限
选择
纯化
原代培养物
细胞系
染色体组型
抗性
连续
有限
3.细胞克隆
单细胞
细胞群体
一
多
单个
基因型
遗传性状
4.动物细胞培养的应用
正常或病变
损伤组织
器官
动物疫苗
干扰素
√
[辨正误]
(1)动物成纤维细胞的培养过程中，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理剪碎的组织块，其目的是消化组织中的胶原纤维和细胞外的其他成分，获得单个的成纤维细胞悬液。( )
(2)体外培养的动物细胞都有贴壁生长和接触抑制的特点。( )
提示：来源于血液、淋巴组织的细胞以及某些肿瘤细胞不表现出贴壁生长的特点，而是呈悬浮生长状态。
(3)细胞克隆最基本的要求是必须保证分离出来的细胞是一个或多个同种细胞。( )
提示：细胞克隆最基本的要求是必须保证分离出来的细胞是一个而不是多个，即必须肯定所建成的克隆来源于单个细胞。
×
×
(生活、学习和实践情境)在治疗大面积烧伤病人时，通常取患者自身皮肤的成纤维细胞或皮肤干细胞，在体外培养获得大量的自体健康皮肤(大致过程如下面概念图所示)，再移植给患者进行恢复性治疗。
动物细胞培养构建的人造皮肤
(1)①和③过程都需要使用胰蛋白酶处理，两次处理的作用分别是什么？
提示：①第一次：用胰蛋白酶处理剪碎的动物组织块，目的是把组织块分散为单个细胞后进行培养，即原代培养；②第二次：细胞培养过程中出现贴壁生长，用胰蛋白酶处理使其从瓶壁上脱离下来，分散成单个细胞，然后将其转移到多个培养瓶中继续进行培养，即传代培养。
(2)②和④过程中，细胞生长有什么特性？
提示：贴壁生长和接触抑制。
(3)有限细胞系和连续细胞系是否都有接触抑制？
提示：有限细胞系存在接触抑制；连续细胞系中的恶性细胞系失去接触抑制，但良性无限细胞系保留接触抑制现象。
(4)动物细胞培养的原理是细胞全能性还是细胞增殖？
提示：细胞增殖。
植物组织培养与动物细胞培养的比较
植物组织培养与动物细胞培养的比较
提醒：①通常认为，动物细胞培养的原理是细胞增殖，而植物组织培养的原理是细胞的全能性；②动物细胞培养和植物组织培养都要求无菌操作。
D
例3 (2024·天域名校联考)下图为幼鼠肾脏上皮细胞培养过程示意图，已知肾脏上皮细胞属于需要贴附于某些基质表面才能生长增殖的细胞。下列叙述错误的是( )
【典例应用 】
A.甲→乙过程需要用胰蛋白酶或
胶原蛋白酶处理
B.丙过程会出现细胞贴壁和接触抑制现象
C.丙、丁过程均要在无菌、无毒的环境下进行
D.丁过程为传代培养，细胞都能进行无限增殖
解析：传代培养一定时间后，只有少数细胞能够无限增殖，D错误。
B
例4 (2024·丽水质检)动物细胞培养时，培养细胞的生命期如下图所示。下列叙述正确的是( )
A.可以使用稀释涂布平板法或显微镜计数法对细胞进行计数
B.传代培养前，常用胰蛋白酶处理使原培养瓶内细胞分散
C.随着细胞传代次数不断增加，传代间隔的时长越来越小
D.有限细胞系培养过程中会出现接触抑制现象，而无限细胞系不会
解析：动物细胞不能用稀释涂布平板法计数，A错误；
根据曲线图可知，随着细胞传代次数不断增加，传代间隔的时长基本不变，C错误；
无限细胞系中的良性无限细胞系虽已获得了不死性，但仍保留接触抑制现象，D错误。
A.可以使用稀释涂布平板法或显微镜计数法对细胞进行计数
B.传代培养前，常用胰蛋白酶处理使原培养瓶内细胞分散
C.随着细胞传代次数不断增加，传代间隔的时长越来越小
D.有限细胞系培养过程中会出现接触抑制现象，而无限细胞系不会
B
1.(2024·浙江1月选考，13)某动物细胞培养过程中，细胞贴壁生长至接触抑制时，需分装培养，实验操作过程如图。
下列叙述错误的是( )
A.①加消化液的目的是使细胞
与瓶壁分离
B.②加培养液的目的是促进细胞增殖
C.③分装时需调整到合适的细胞密度
D.整个过程需要在无菌、无毒条件下进行
解析：因为动物细胞培养过程中会贴壁生长，所以加消化液的目的是使细胞和瓶壁分离，A正确；
②加培养液是为了终止消化液的作用，并对细胞加以稀释，B错误；
分装时要调整到合适的细胞密度，便于后续的细胞培养，C正确；
动物细胞培养需要在无菌、无毒条件下进行，D正确。
下列叙述错误的是( )
A.①加消化液的目的是使细胞与瓶壁分离
B.②加培养液的目的是促进细胞增殖
C.③分装时需调整到合适的细胞密度
D.整个过程需要在无菌、无毒条件下进行
C
2.(2021·浙江1月选考，18)下图为动物成纤维细胞的培养过程示意图。下列叙述正确的是( )
A.步骤①的操作不需要在无菌环境中进行
B.步骤②中用盐酸溶解细胞间物质使细胞分离
C.步骤③到④的分瓶操作前常用胰蛋白酶处理
D.步骤④培养过程中不会发生细胞转化
解析：步骤①的操作也需要在无菌环境下进行，A错误；
在制备动物细胞悬液过程中要经胶原蛋白酶或胰蛋白酶消化，使组织块分散成单个细胞，B错误；
原代培养的贴壁细胞需经胰蛋白酶处理后制成细胞悬液才能传代，C正确；
在传代培养过程中，培养的细胞可能转化为连续细胞系，D错误。
A.步骤①的操作不需要在无菌环境中进行
B.步骤②中用盐酸溶解细胞间物质使细胞分离
C.步骤③到④的分瓶操作前常用胰蛋白酶处理
D.步骤④培养过程中不会发生细胞转化
A
3.(2022·湖北卷，7)某兴趣小组开展小鼠原代神经元培养的研究，结果发现其培养的原代神经元生长缓慢，其原因不可能是( )
A.实验材料取自小鼠胚胎的脑组织
B.为了防止污染将培养瓶瓶口密封
C.血清经过高温处理后加入培养基
D.所使用的培养基呈弱酸性
解析：小鼠胚胎脑组织中含有丰富的原代神经元，细胞增殖能力强，不会造成生长缓慢，A符合题意；
培养瓶瓶口密封会使培养液中缺氧，影响细胞需氧呼吸，造成供能不足，可能使细胞生长缓慢，B不符合题意；
血清经过高温处理后，其中大量活性成分变性，失去原有功能，细胞生存环境严重恶化，可能使细胞生长缓慢，C不符合题意；
小鼠内环境为弱碱性，所使用的培养基呈弱酸性，使细胞生存环境恶劣，可能造成细胞生长缓慢，D不符合题意。课时精练9 细胞培养是动物细胞工程的基础
(时间：30分钟分值：50分)
选择题：第1～12题，每小题3分，共36分。
【基础对点】
题型1 动物细胞培养的条件
1.治疗大面积烧伤，常常从患者身上获取少量皮肤样本，并将皮肤细胞在体外培养，逐渐形成的“皮肤”组织用于移植、覆盖在伤口上，实现愈合。下列相关叙述错误的是( )
从患者身上获取皮肤样本的优点是移植后不会产生免疫排斥反应
往CO2恒温培养箱中通入5%的CO2是为了调节pH相对稳定
为了防止污染，实现无菌培养，可以在培养基中加入抗生素
培养过程往往在固体培养基上进行，以便于分离出“皮肤”组织
2.(2024·湖州质检)一般来说，动物细胞体外培养需要满足的条件是( )
①无毒的环境 ②无菌的环境 ③使用合成培养基，但通常需要加血清等天然成分 ④温度与动物的体温相近 ⑤因在CO2培养箱中培养，故不需要O2 ⑥适宜的pH
①②③④⑤⑥ ①②③④
①②④⑤⑥ ①②③④⑥
3.植物组织培养、动物细胞培养和微生物培养都需要用到灭菌和无菌操作。下列操作和叙述正确的是( )
倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖
培养动物细胞的培养基中加入动物血清可抑制细菌和真菌的生长
用于植物组织培养的外植体，可在普通房间的酒精灯火焰旁接种
微生物培养结束后，所有使用过的器皿、废弃物等都必须先经过高压蒸汽灭菌后再处理
题型2 动物细胞培养的过程
4.如图表示动物细胞培养的过程，下列有关该过程的说法，正确的是( )
乙中进行动物细胞培养时应通入适量的CO2以调节pH
宜用胃蛋白酶将甲中的动物组织块分散为单个的细胞
甲中用于培养的动物细胞宜取自成年动物
丙中细胞大量繁殖后，细胞之间相互接触能促进细胞的分裂
5.(2024·绍兴诊断)如图是动物细胞培养过程中可能出现的接触抑制现象，下列有关叙述错误的是( )
正常动物细胞培养过程中均会出现接触抑制现象
癌细胞无接触抑制因而培养时可形成多层细胞
出现接触抑制时细胞将停止分裂活动
出现接触抑制后需要利用胰蛋白酶处理后才可进行传代培养
6.如图为实验小鼠皮肤组织进行细胞培养的过程，下列叙述正确的是( )
动物细胞培养体现了动物细胞的全能性
乙过程对皮肤组织可用胃蛋白酶处理
丙过程为原代培养，遗传物质一定不变
丁过程中某些细胞可能会无限增殖
7.如图为动物成纤维细胞的培养过程示意图。下列叙述正确的是( )
通过步骤③得到的是细胞系，步骤④得到的是细胞株
步骤②和步骤④的分瓶操作前常用胰蛋白酶处理细胞
动物细胞培养需要无菌条件，步骤①需对相应组织进行灭菌
若步骤④中细胞发生了转化，则细胞一定失去了接触抑制的特性
题型3 动物细胞培养的应用
8.(2024·海淀区高二期末)敲除大鼠心肌细胞H的T基因，对照组与敲除组的H细胞在培养瓶中贴壁生长，检测两组细胞的数量变化，结果如图所示。下列相关叙述不合理的是( )
体外培养H细胞需要添加动物血清
可用胰蛋白酶处理H细胞便于计数
敲除T基因的H细胞失去了分裂能力
提高T基因表达可能促进心脏损伤修复
9.动物细胞培养技术也可用于病毒的培养，因为这一技术( )
能实现病毒的独立代谢
需要在无菌的条件下进行
能为动物病毒提供足量的宿主
培养的细胞具有全能性
10.下列关于动物细胞培养技术应用的叙述，错误的是( )
可用于检测某种物质的毒性
可通过培养各种病变细胞，用于药理等方面的研究
可通过动物细胞的大规模培养来生产病毒疫苗、干扰素等
经过脱分化、再分化，可构建人造皮肤
【综合提升】
11.(2024·石景山区高二检测)为检测某药物X的抗癌活性，在细胞培养板的每个孔中加入相同数量的肝癌细胞，使其贴壁生长，实验组加入溶于二甲基亚矾的药物X，培养72小时后进行计数，比较实验组和对照组每个孔中细胞数目。下列有关叙述错误的是( )
细胞培养液中通常需要加入血清等天然成分
可用胰蛋白酶处理使肝癌细胞脱落下来并进行计数
对照组中应加入等体积的无菌蒸馏水，其他条件一致
若实验组细胞数远低于对照组，可初步判断此药物有抗癌效果
12.(2024·九省联考黑、吉卷，9)为探究H基因对肿瘤细胞M增殖能力的影响，分别将H基因和突变h基因过量表达的细胞M在含琼脂的半固体培养基中培养，检测细胞克隆(由单个细胞分裂形成的肉眼可见的细胞群)数量如下表，作为判断肿瘤细胞恶性程度的指标之一。下列叙述错误的是( )
组别 条件及结果 ① ② ③ ④
10%血清 － ＋ ＋ ＋
H基因 － － ＋ －
突变h基因 － － － ＋
细胞克隆数量/个 5 9 15 27
注：“＋”表示加入或过量表达；“－”表示未加入或无表达。
血清为细胞M的生长增殖提供了营养物质等天然成分
克隆间相互离散，能有效避免克隆内细胞的接触抑制
H基因的过量表达导致克隆数增加，说明其不是抑癌基因
突变h基因过量表达，容易引起细胞M在体内分散和转移
13.(14分)2019年11月18日上午，中国诞生了第一块“人造肉”，即“细胞培养肉”。下图是“细胞培养肉”生物制造流程图，请结合所学知识回答下列问题：
(1) (3分)“细胞培养肉”生物制造的关键技术是动物细胞培养技术。进行动物细胞培养时，需要用________酶将从动物体内取出的组织块分散成单个细胞以制备细胞悬液。贴壁是有机体细胞在体内生存和生长发育的基本方式，包括细胞与________间的相互接触和细胞与____________之间的相互接触。
(2)(3分)当细胞由于移动而相互靠近发生接触时，细胞不再移动，接触区域的细胞膜皱褶样活动停止，最终细胞分裂停止，这种现象称为___________________________________________________________________，
它是体外细胞培养时_________________________________型细胞生长的特性。
(3)(4分)一般的动物细胞培养需要向培养基中添加一定量的________，以保证细胞顺利地生长增殖；还需要添加一定量的抗生素，以抑制________的生长，从而预防污染。但从食品安全的角度考虑，在生物制造“细胞培养肉”时，这两种成分均不能添加。
(4)(4分)“细胞培养肉”生物制造过程中，肌肉细胞培养需要利用合适的支架体系，请推测其原因_____________________________________________________
___________________________________________________________________。
课时精练9 细胞培养是动物细胞工程的基础
1．D [动物细胞培养常用液体培养基，为了调节pH相对稳定，通常往CO2恒温培养箱中通入5%的CO2，B正确，D错误；抗生素能抑制细菌和真菌的生长，可以防止动物培养基被污染，C正确。]
2．D [动物细胞培养需要无菌、无毒的环境，①②正确；用于动物细胞培养的合成培养基需要加入糖类、氨基酸、无机盐、维生素等，通常还需要加入一定比例的血清等天然成分，③正确；动物细胞培养需要适宜的温度和pH，其中温度要与动物体温相近，④⑥正确；动物细胞培养需要一定的气体环境，为95%的空气和5%的CO2的混合气体，⑤错误。]
3．D [倒平板过程中不能完全打开培养皿的皿盖，以防止杂菌污染，A错误；为了防止动物细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的抗生素，动物血清不能抑制细菌和真菌的生长，B错误；用于植物组织培养的外植体，应在消毒的实验室的超净工作台酒精灯火焰旁接种，C错误；微生物培养结束后，所有使用过的器皿、废弃物等都必须先经过高压蒸汽灭菌后再处理，防止菌体污染环境和实验者，D正确。]
4．A [动物细胞培养过程中，需要加入一定浓度的CO2以维持培养液的pH，A正确；将甲中的动物组织块分散为单个的细胞应该用胰蛋白酶或胶原蛋白酶，不能用胃蛋白酶，B错误；甲中用于培养的动物细胞宜取自动物胚胎或幼龄动物的器官或组织，C错误；丙中细胞大量繁殖后，细胞之间相互接触能抑制细胞的分裂，D错误。]
5．A [接触抑制是体外细胞培养时贴附型细胞生长的特性，故正常动物细胞培养过程中不都会出现接触抑制现象，如来源于血液、淋巴组织的细胞，A错误。]
6．D [动物细胞培养没有体现动物细胞的全能性，A错误；乙过程对皮肤组织可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，使细胞分散开，B错误；丙过程属于原代培养，有些细胞的遗传物质可能发生改变，C错误；丁过程属于传代培养，某些细胞可能会无限增殖，D正确。]
7．B [步骤④得到的是细胞系，从步骤③或步骤④中获得的具有特殊性质的细胞为细胞株，A错误；步骤①需对相应组织进行消毒，C错误；连续细胞系被认为是发生转化了的细胞系(遗传物质发生改变)，有的连续细胞系是恶性细胞系，有的连续细胞系虽已获得了不死性，但保留了接触抑制现象，不致癌，是良性无限细胞系，D错误。]
8．C [体外培养心肌细胞所需的合成培养基中通常需要添加血清等一些天然成分，以补充对未知成分的需要，A合理；为便于细胞计数，可用胰蛋白酶处理H细胞，使其分散成单个细胞，B合理；由图示曲线可知，与对照组相比，敲除T基因的H细胞分裂能力减弱，但并未失去分裂能力，C不合理；由C选项信息可知，T基因的表达产物能促进H细胞分裂，因此提高T基因表达可能促进心脏损伤修复，D合理。]
9．C
10．D [动物细胞培养没有脱分化与再分化过程，D错误。]
11．C [培养动物细胞时，细胞培养液中通常需要加入血清等天然成分，A正确；对于已经贴壁生长的动物细胞，可用胰蛋白酶处理，使肝癌细胞脱落下来并进行计数，B正确；实验组加入溶于二甲基亚矾(溶剂)的药物X，故对照组中应加入等体积的二甲基亚矾(溶剂)，C错误；若添加药物X的实验组肝癌细胞数目远低于对照组，可以初步判断药物X有抗癌效果，D正确。]
12．B [在进行动物细胞培养时，培养液中通常需加入血清等一些天然成分，以补充对未知成分的需要，A正确；细胞M是肿瘤细胞，进行细胞克隆时不会出现接触抑制现象，B错误；抑癌基因编码的蛋白质是正常细胞增殖过程中的负调控因子，抑癌基因突变丧失其细胞增殖的负调控作用，则导致细胞周期失控而发生癌变，因此H基因的过量表达导致克隆数增加，说明其不是抑癌基因，C正确；②、④组相比，④组中突变h基因过量表达，导致细胞克隆数量增多，容易引起细胞M在体内分散和转移，D正确。]
13．(1)胰蛋白(或胶原蛋白) 细胞 细胞外基质
(2)接触抑制 贴壁
(3)血清 细菌和真菌
(4)模拟体内肌肉生长环境，辅助形成细胞组织的三维结构
解析 (1)进行动物细胞培养时，需要用胰蛋白酶(或胶原蛋白酶)将从动物体内取出的组织块分散成单个细胞以制备细胞悬液。贴壁是有机体细胞在体内生存和生长发育的基本方式，包括细胞与细胞间的相互接触和细胞与细胞外基质之间的相互接触。(2)当细胞由于移动而相互靠近发生接触时，细胞不再移动，接触区域的细胞膜皱褶样活动停止，最终细胞分裂停止，这种现象称为接触抑制，它是体外细胞培养时贴壁型细胞生长的特性。(3)一般的动物细胞培养需要向培养基中添加一定量的血清，以保证细胞顺利地生长增殖；还需要添加一定量的抗生素，以抑制细菌和真菌的生长，从而预防污染。(4)“细胞培养肉”最终目标是要得到类似于从动物组织中取得的“肌肉”，这就要求细胞生长的环境也跟体内肌肉生长环境类似，所以采用支架体系主要就是模拟体内肌肉生长环境，辅助形成细胞组织的三维结构。(共38张PPT)
课时精练9
细胞培养是动物细胞工程的基础
(时间：30分钟 满分：50分)
D
题型1 动物细胞培养的条件
1.治疗大面积烧伤，常常从患者身上获取少量皮肤样本，并将皮肤细胞在体外培养，逐渐形成的“皮肤”组织用于移植、覆盖在伤口上，实现愈合。下列相关叙述错误的是( )
A.从患者身上获取皮肤样本的优点是移植后不会产生免疫排斥反应
B.往CO2恒温培养箱中通入5%的CO2是为了调节pH相对稳定
C.为了防止污染，实现无菌培养，可以在培养基中加入抗生素
D.培养过程往往在固体培养基上进行，以便于分离出“皮肤”组织
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类题
解析：动物细胞培养常用液体培养基，为了调节pH相对稳定，通常往CO2恒温培养箱中通入5%的CO2，B正确，D错误；
抗生素能抑制细菌和真菌的生长，可以防止动物培养基被污染，C正确。
基础对点
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类题
2.(2024·湖州质检)一般来说，动物细胞体外培养需要满足的条件是( )
①无毒的环境 ②无菌的环境 ③使用合成培养基，但通常需要加血清等天然成分 ④温度与动物的体温相近 ⑤因在CO2培养箱中培养，故不需要O2 ⑥适宜的pH
A.①②③④⑤⑥ B.①②③④ C.①②④⑤⑥ D.①②③④⑥
解析：动物细胞培养需要无菌、无毒的环境，①②正确；用于动物细胞培养的合成培养基需要加入糖类、氨基酸、无机盐、维生素等，通常还需要加入一定比例的血清等天然成分，③正确；动物细胞培养需要适宜的温度和pH，其中温度要与动物体温相近，④⑥正确；动物细胞培养需要一定的气体环境，为95%的空气和5%的CO2的混合气体，⑤错误。
D
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3.植物组织培养、动物细胞培养和微生物培养都需要用到灭菌和无菌操作。下列操作和叙述正确的是( )
A.倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖
B.培养动物细胞的培养基中加入动物血清可抑制细菌和真菌的生长
C.用于植物组织培养的外植体，可在普通房间的酒精灯火焰旁接种
D.微生物培养结束后，所有使用过的器皿、废弃物等都必须先经过高压蒸汽灭菌后再处理
D
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解析：倒平板过程中不能完全打开培养皿的皿盖，以防止杂菌污染，A错误；
为了防止动物细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的抗生素，动物血清不能抑制细菌和真菌的生长，B错误；
用于植物组织培养的外植体，应在消毒的实验室的超净工作台酒精灯火焰旁接种，C错误；
微生物培养结束后，所有使用过的器皿、废弃物等都必须先经过高压蒸汽灭菌后再处理，防止菌体污染环境和实验者，D正确。
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类题
题型2 动物细胞培养的过程
4.如图表示动物细胞培养的过程，下列有关该过程的说法，正确的是( )
A
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类题
A.乙中进行动物细胞培养时应通入适量的CO2以调节pH
B.宜用胃蛋白酶将甲中的动物组织块分散为单个的细胞
C.甲中用于培养的动物细胞宜取自成年动物
D.丙中细胞大量繁殖后，细胞之间相互接触能促进细胞的分裂
解析：动物细胞培养过程中，需要加入一定浓度的CO2以维持培养液的pH，A正确；
将甲中的动物组织块分散为单个的细胞应该用胰蛋白酶或胶原蛋白酶，不能用胃蛋白酶，B错误；
甲中用于培养的动物细胞宜取自动物胚胎或幼龄动物的器官或组织，C错误；
丙中细胞大量繁殖后，细胞之间相互接触能抑制细胞的分裂，D错误。
A.乙中进行动物细胞培养时应通入适量的CO2以调节pH
B.宜用胃蛋白酶将甲中的动物组织块分散为单个的细胞
C.甲中用于培养的动物细胞宜取自成年动物
D.丙中细胞大量繁殖后，细胞之间相互接触能促进细胞的分裂
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类题
●动物细胞培养是动物细胞工程的基础，其培养过程的顺序是( )
①胰蛋白酶处理动物组织，形成分散的悬浮细胞 ②传代培养 ③定期用酶消化贴附生长的细胞，制成细胞悬液 ④原代培养
A.①②③④ B.①③④②
C.①④②③ D.①④③②
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解析：动物细胞培养技术是其他动物工程技术的基础，其培养过程为：取动物组织块——剪碎组织——用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞——制成细胞悬液——转入培养液中(原代培养)——放入二氧化碳培养箱培养——贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液——转入培养液(传代培养)——放入二氧化碳培养箱培养，由以上分析可知，动物细胞培养的顺序为①④③②。
基础对点
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5.(2024·绍兴诊断)如图是动物细胞培养过程中可能出现的接触抑制现象，下列有关叙述错误的是( )
A
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类题
A.正常动物细胞培养过程中均会出现接触抑制现象
B.癌细胞无接触抑制因而培养时可形成多层细胞
C.出现接触抑制时细胞将停止分裂活动
D.出现接触抑制后需要利用胰蛋白酶处理后才可进行传代培养
解析：接触抑制是体外细胞培养时贴附型细胞生长的特性，故正常动物细胞培养过程中不都会出现接触抑制现象，如来源于血液、淋巴组织的细胞，A错误。
●他莫昔芬(Tam)是一种治疗乳腺癌的药物，长期使用Tam的患者的癌细胞系R相比初次使用Tam的患者的癌细胞系C，死亡率明显下降，氧气消耗速率降低，葡萄糖摄取速率显著提高，有关细胞系R的推断不合理的是( )
A.线粒体数量减少
B.乳酸产生量降低
C.可能对Tam产生了耐药性
D.加快葡萄糖摄取以获取足够的物质和能量
B
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类题
解析：线粒体是进行需氧呼吸的主要场所，据题可知该细胞氧气消耗速率降低，说明需氧呼吸减弱，则线粒体数量减少，A不符合题意；
人体细胞进行厌氧呼吸产生乳酸，据题可知该细胞氧气消耗速率降低，葡萄糖摄取速率显著提高，说明该细胞厌氧呼吸增强，乳酸的产生量应该增多，B符合题意；
长期使用Tam的患者癌细胞的死亡率下降，说明癌细胞对Tam产生了耐药性，C不符合题意；
葡萄糖是主要的能源物质，该细胞葡萄糖摄取速率显著提高，可以为癌细胞获取足够的物质和能量，D不符合题意。
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6.如图为实验小鼠皮肤组织进行细胞培养的过程，下列叙述正确的是( )
D
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类题
A.动物细胞培养体现了动物细胞的全能性
B.乙过程对皮肤组织可用胃蛋白酶处理
C.丙过程为原代培养，遗传物质一定不变
D.丁过程中某些细胞可能会无限增殖
解析：动物细胞培养没有体现动物细胞的全能性，A错误；
乙过程对皮肤组织可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，使细胞分散开，B错误；
丙过程属于原代培养，有些细胞的遗传物质可能发生改变，C错误；
丁过程属于传代培养，某些细胞可能会无限增殖，D正确。
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A.动物细胞培养体现了动物细胞的全能性
B.乙过程对皮肤组织可用胃蛋白酶处理
C.丙过程为原代培养，遗传物质一定不变
D.丁过程中某些细胞可能会无限增殖
7.如图为动物成纤维细胞的培养过程示意图。下列叙述正确的是( )
B
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类题
A.通过步骤③得到的是细胞系，步骤④得到的是细胞株
B.步骤②和步骤④的分瓶操作前常用胰蛋白酶处理细胞
C.动物细胞培养需要无菌条件，步骤①需对相应组织进行灭菌
D.若步骤④中细胞发生了转化，则细胞一定失去了接触抑制的特性
解析：步骤④得到的是细胞系，从步骤③或步骤④中获得的具有特殊性质的细胞为细胞株，A错误；
步骤①需对相应组织进行消毒，C错误；
连续细胞系被认为是发生转化了的细胞系(遗传物质发生改变)，有的连续细胞系是恶性细胞系，有的连续细胞系虽已获得了不死性，但保留了接触抑制现象，不致癌，是良性无限细胞系，D错误。
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A.通过步骤③得到的是细胞系，步骤④得到的是细胞株
B.步骤②和步骤④的分瓶操作前常用胰蛋白酶处理细胞
C.动物细胞培养需要无菌条件，步骤①需对相应组织进行灭菌
D.若步骤④中细胞发生了转化，则细胞一定失去了接触抑制的特性
题型3 动物细胞培养的应用
8.(2024·海淀区高二期末)敲除大鼠心肌细胞H的T基因，对照组与敲除组的H细胞在培养瓶中贴壁生长，检测两组细胞的数量变化，结果如图所示。下列相关叙述不合理的是( )
C
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类题
A.体外培养H细胞需要添加动物血清
B.可用胰蛋白酶处理H细胞便于计数
C.敲除T基因的H细胞失去了分裂能力
D.提高T基因表达可能促进心脏损伤修复
解析：体外培养心肌细胞所需的合成培养基中通常需要添加血清等一些天然成分，以补充对未知成分的需要，A合理；
为便于细胞计数，可用胰蛋白酶处理H细胞，使其分散成单个细胞，B合理；
由图示曲线可知，与对照组相比，敲除T基因的H细胞分裂能力减弱，但并未失去分裂能力，C不合理；
由C选项信息可知，T基因的表达产物能促进H细胞分裂，因此提高T基因表达可能促进心脏损伤修复，D合理。
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A.体外培养H细胞需要添加动物血清
B.可用胰蛋白酶处理H细胞便于计数
C.敲除T基因的H细胞失去了分裂能力
D.提高T基因表达可能促进心脏损伤修复
9.动物细胞培养技术也可用于病毒的培养，因为这一技术( )
A.能实现病毒的独立代谢
B.需要在无菌的条件下进行
C.能为动物病毒提供足量的宿主
D.培养的细胞具有全能性
C
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10.下列关于动物细胞培养技术应用的叙述，错误的是( )
A.可用于检测某种物质的毒性
B.可通过培养各种病变细胞，用于药理等方面的研究
C.可通过动物细胞的大规模培养来生产病毒疫苗、干扰素等
D.经过脱分化、再分化，可构建人造皮肤
解析：动物细胞培养没有脱分化与再分化过程，D错误。
D
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11.(2024·石景山区高二检测)为检测某药物X的抗癌活性，在细胞培养板的每个孔中加入相同数量的肝癌细胞，使其贴壁生长，实验组加入溶于二甲基亚矾的药物X，培养72小时后进行计数，比较实验组和对照组每个孔中细胞数目。下列有关叙述错误的是( )
A.细胞培养液中通常需要加入血清等天然成分
B.可用胰蛋白酶处理使肝癌细胞脱落下来并进行计数
C.对照组中应加入等体积的无菌蒸馏水，其他条件一致
D.若实验组细胞数远低于对照组，可初步判断此药物有抗癌效果
C
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解析：培养动物细胞时，细胞培养液中通常需要加入血清等天然成分，A正确；
对于已经贴壁生长的动物细胞，可用胰蛋白酶处理，使肝癌细胞脱落下来并进行计数，B正确；
实验组加入溶于二甲基亚矾(溶剂)的药物X，故对照组中应加入等体积的二甲基亚矾(溶剂)，C错误；
若添加药物X的实验组肝癌细胞数目远低于对照组，可以初步判断药物X有抗癌效果，D正确。
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12.(2024·九省联考黑、吉卷，9)为探究H基因对肿瘤细胞M增殖能力的影响，分别将H基因和突变h基因过量表达的细胞M在含琼脂的半固体培养基中培养，检测细胞克隆(由单个细胞分裂形成的肉眼可见的细胞群)数量如下表，作为判断肿瘤细胞恶性程度的指标之一。下列叙述错误的是( )
B
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组别 条件及结果 ① ② ③ ④
10%血清 － ＋ ＋ ＋
H基因 － － ＋ －
突变h基因 － － － ＋
细胞克隆数量/个 5 9 15 27
注：“＋”表示加入或过量表达；“－”表示未加入或无表达。
A.血清为细胞M的生长增殖提供了营养物质等天然成分
B.克隆间相互离散，能有效避免克隆内细胞的接触抑制
C.H基因的过量表达导致克隆数增加，说明其不是抑癌基因
D.突变h基因过量表达，容易引起细胞M在体内分散和转移
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解析：在进行动物细胞培养时，培养液中通常需加入血清等一些天然成分，以补充对未知成分的需要，A正确；
细胞M是肿瘤细胞，进行细胞克隆时不会出现接触抑制现象，B错误；
抑癌基因编码的蛋白质是正常细胞增殖过程中的负调控因子，抑癌基因突变丧失其细胞增殖的负调控作用，则导致细胞周期失控而发生癌变，因此H基因的过量表达导致克隆数增加，说明其不是抑癌基因，C正确；
②、④组相比，④组中突变h基因过量表达，导致细胞克隆数量增多，容易引起细胞M在体内分散和转移，D正确。
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类题
13.2019年11月18日上午，中国诞生了第一块“人造肉”，即“细胞培养肉”。下图是“细胞培养肉”生物制造流程图，请结合所学知识回答下列问题：
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(1) “细胞培养肉”生物制造的关键技术是动物细胞培养技术。进行动物细胞培养时，需要用____________________酶将从动物体内取出的组织块分散成单个细胞以制备细胞悬液。贴壁是有机体细胞在体内生存和生长发育的基本方式，包括细胞与________间的相互接触和细胞与__________之间的相互接触。
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胰蛋白(或胶原蛋白)
细胞
细胞外基质
(2)当细胞由于移动而相互靠近发生接触时，细胞不再移动，接触区域的细胞膜皱褶样活动停止，最终细胞分裂停止，这种现象称为_____________，
它是体外细胞培养时____________型细胞生长的特性。
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接触抑制
贴壁
(3)一般的动物细胞培养需要向培养基中添加一定量的________，以保证细胞顺利地生长增殖；还需要添加一定量的抗生素，以抑制____________的生长，从而预防污染。但从食品安全的角度考虑，在生物制造“细胞培养肉”时，这两种成分均不能添加。
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血清
细菌和真菌
(4)“细胞培养肉”生物制造过程中，肌肉细胞培养需要利用合适的支架体系，请推测其原因____________________________________________________________________。
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模拟体内肌肉生长环境，辅助形成细胞组织的
三维结构
解析：(1)进行动物细胞培养时，需要用胰蛋白酶(或胶原蛋白酶)将从动物体内取出的组织块分散成单个细胞以制备细胞悬液。贴壁是有机体细胞在体内生存和生长发育的基本方式，包括细胞与细胞间的相互接触和细胞与细胞外基质之间的相互接触。
(2)当细胞由于移动而相互靠近发生接触时，细胞不再移动，接触区域的细胞膜皱褶样活动停止，最终细胞分裂停止，这种现象称为接触抑制，它是体外细胞培养时贴壁型细胞生长的特性。
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(3)一般的动物细胞培养需要向培养基中添加一定量的血清，以保证细胞顺利地生长增殖；还需要添加一定量的抗生素，以抑制细菌和真菌的生长，从而预防污染。
(4)“细胞培养肉”最终目标是要得到类似于从动物组织中取得的“肌肉”，这就要求细胞生长的环境也跟体内肌肉生长环境类似，所以采用支架体系主要就是模拟体内肌肉生长环境，辅助形成细胞组织的三维结构。
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●吴茱萸是一种中药，其主要成分为吴茱萸碱(EVO)。为研究EVO对人胃癌细胞增殖的影响及作用机制，科研人员做了以下实验。请回答下列问题：
(1)检测EVO对胃癌细胞BGC－823增殖的影响。
①用含动物血清的DME/F－12培养基置于恒温培养箱中培养BGC－823，动物血清的作用是_________________________________________________________。
②取出上述培养的细胞，加入胰蛋白酶制成___________，置于加入不同浓度EVO的多孔板中进行培养。
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类题
补充培养基中动物细胞生长需要的未知营养物质
单细胞悬液
③EVO对BGC－823细胞增殖影响的实验结果如图。
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类题
实验结果表明_______________________________________________________
___________________________________________________________________。
吴茱萸碱抑制BGC－823细胞增殖；作用效果与作用时间和
浓度呈正相关
(2)检测EVO对BGC－823细胞周期的影响，实验结果如表。
细胞周期中各期的细胞比例
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组别 G0/G1期/% S期/% G2/M期/%
对照组 42.62 17.65 23.37
EVO组 8.57 19.30 54.13
据表可知，EVO能诱导细胞周期阻滞于________期。
G2/M
解析：(1)①由于人们并没有完全了解动物细胞所需要的全部物质，故在动物细胞培养时常加入一定比例的动物血清以补充培养基中动物细胞生长需要的未知营养物质。②胰蛋白酶或胶原蛋白酶的作用是将细胞分散开而制成单细胞悬液。③由题图实验结果可知，随EVO浓度升高和作用时间的延长，细胞增殖活性的相对值降低，即表明EVO可抑制BGC－823细胞增殖，且作用效果与作用时间和浓度呈正相关。
(2)由题表中数据可知，EVO组与对照组相比，G2/M期比例明显升高，且G0/G1期比例明显下降，故推测EVO能诱导细胞周期阻滞于G2/M期，导致细胞无法进入下一个时期，从而使G0/G1期比例下降。
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