课时3 通过细胞融合可产生具有新特性的细胞
课时概念解析 本课时的概念为“细胞融合就是在一些融合因子的作用下，将两个或两个以上的细胞合并成一个细胞的技术”“细胞融合技术是制备单克隆抗体的基础”，这两个概念的建构需要以下基本概念或证据的支持：
(1)可通过一定手段诱导两个或多个动物细胞融合形成一个细胞；(2)利用细胞融合技术和细胞筛选可以制备单克隆抗体。
概念1 两个或多个动物细胞经诱导可融合形成一个细胞
动物细胞融合技术
[辨正误]
(1)促进动物细胞融合的方法与诱导植物原生质体融合的方法相同，有PEG处理、电流刺激和灭活病毒诱导等。( )
(2)1967年，科学家发现人鼠融合细胞中鼠的染色体优先丢失。( )
(3)仙台病毒被灭活后才可用于细胞融合，灭活的手段是经紫外线照射。( )
(生命科学史情境)1962年，科学家利用灭活的仙台病毒，使体外培养的腹水瘤细胞成功融合。后来，科学家又成功诱导了不同种动物的体细胞融合(如下图所示)，并且能将杂交细胞培养成活。
灭活的病毒诱导细胞融合的过程示意图
(1)动物细胞融合的结构基础是什么？_______________________________
_________________________________________________________________
__________________________________________________________________
(2)除了灭活的病毒外，诱导动物细胞融合还有哪些常用的技术手段？___________________________________________________________________
___________________________________________________________________
(3)经诱导后，是否所有细胞都能融合？只考虑两两融合，共能产生几种融合细胞？
___________________________________________________________________
___________________________________________________________________
1.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较
2.重组细胞、杂交细胞与杂种细胞
【典例应用】
例1 (2024·浙江温州高二期中)如图为细胞融合的示意图。下列叙述正确的是( )
A.若a细胞和b细胞是植物体细胞，二者融合成一个杂种细胞就是植物体细胞杂交
B.若a细胞和b细胞是植物细胞，需先脱分化再诱导融合
C.a细胞和b细胞之间的融合需要促融处理后才能实现
D.c细胞将同时表达a细胞和b细胞中的所有基因
例2 对比动物细胞融合和植物体细胞杂交技术，下列论述合理的是( )
A.均可使用PEG、电刺激或灭活病毒的方法诱导细胞融合
B.两者都可以跨越种属间的生殖隔离
C.两者都需要用到纤维素酶和果胶酶
D.在适宜的条件下，均可发育成完整个体
概念2 细胞融合技术是制备单克隆抗体的基础
1.抗体的早期生产
2.单克隆抗体的制备
(1)单克隆抗体的定义：是指由一个B淋巴细胞增殖形成的细胞群所产生的单一型抗体分子。
(2)单克隆抗体的制备过程
(3)单克隆抗体的优点
①纯度________；②可大量制备；③特异性________、灵敏度________。
(4)单克隆抗体的“三大”应用
[辨正误]
(1)血清中获取的抗体是由多种抗体混合在一起的多克隆抗体，能够识别多种抗原，导致其特异性较差。( )
(2)能产生特定抗体的B淋巴细胞不能增殖，能增殖的瘤细胞不能产生抗体，而杂交瘤细胞既能迅速大量增殖，又能产生抗体。( )
(3)B淋巴细胞和瘤细胞融合后需要用HAT培养基进行筛选，亲代细胞和同核体细胞不能在该培养基上生长，只有异核体细胞才能在该培养基上生长。( )
1.(生命科学史情境)1975年，英国科学家米尔斯坦和德国科学家科勒，将一种能产生特定抗体的B细胞与能在体外无限增殖的骨髓瘤细胞进行融合，形成了杂交瘤细胞，然后通过筛选和培养，获得了单克隆抗体，并因此荣获1984年的诺贝尔生理学或医学奖。
下图表示某种单克隆抗体的制备过程，据图回答下列问题：
(1)由图可知，单克隆抗体制备过程运用了哪些主要的动物细胞工程技术手段？__________________________________________________________________
___________________________________________________________________
___________________________________________________________________
(2)经第一次筛选，被淘汰的细胞有哪些类型？
___________________________________________________________________
____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
(3)经第一次筛选，筛选出的是何种细胞？有何特点？____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
(4)经第二次筛选，选出的细胞属于什么类型？
___________________________________________________________________
____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
2.(生活、学习与实践情境)使用高效的细胞毒素类药物进行化疗可以有效杀伤肿瘤细胞。但细胞毒素没有特异性，在杀伤肿瘤细胞的同时还会对健康细胞造成伤害，这限制了它在临床上的应用。抗体—药物偶联物(ADC)通过将细胞毒素与能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体结合，实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤。ADC通常由抗体、接头和药物(如细胞毒素)三部分组成，它的作用机制如图所示。
(1)据图分析，ADC进入肿瘤细胞的方式是什么？需不需要能量？___________________________________________________________________
____________________________________________________________________
(2)ADC的抗体和药物各具有什么作用？
__________________________________________________________________________________________________________________________________________
(3)ADC与传统的化疗相比较具有什么优势？
___________________________________________________________________
____________________________________________________________________
单克隆抗体制备过程中两次筛选的比较
【典例应用】
例3 (2024·舟山质检)下图表示单克隆抗体制备部分流程图，下列叙述正确的是( )
A.制备单克隆抗体的技术有动物细胞培养、动物细胞融合和胚胎移植技术
B.若要将HAT培养基中的细胞分开培养，一般不需要用胰蛋白酶处理
C.选育出产生高特异性抗体的细胞群体即为细胞系
D.该技术不能用于制作新冠病毒抗原检测试剂盒
例4 (2024·嘉兴高二期末)抗体—药物偶联物(ADC)通过将细胞毒素类药物与单克隆抗体结合，实现对肿瘤细胞的选择性杀伤，过程如图所示。相关叙述正确的是( )
A.ADC进入肿瘤细胞的过程体现了细胞膜的流动性
B.抗体进入细胞后激活溶酶体酶导致肿瘤细胞凋亡
C.单克隆抗体携带的细胞毒素与肿瘤细胞特异结合
D.肿瘤细胞的溶酶体中含有能特异性水解药物的酶
1.(2023·北京卷，12)甲状旁腺激素(PTH)水平是人类多种疾病的重要诊断指标。研究者制备单克隆抗体用于快速检测PTH，有关制备过程的叙述错误的是( )
A.需要使用动物细胞培养技术
B.需要制备用PTH免疫的小鼠
C.利用抗原－抗体结合的原理筛选杂交瘤细胞
D.筛选能分泌多种抗体的单个杂交瘤细胞
2.(2023·湖北卷，22节选)某病毒对动物养殖业危害十分严重。我国学者拟以该病毒外壳蛋白A为抗原来制备单克隆抗体，以期快速检测该病毒，其主要技术路线如图所示。
回答下列问题：
(1)与小鼠骨髓瘤细胞融合前，已免疫脾细胞(含浆细胞)________(填“需要”或“不需要”)通过原代培养扩大细胞数量；添加脂溶性物质PEG可促进细胞融合，该过程中PEG对细胞膜的作用是_____________________________________________。
(2)在杂交瘤细胞筛选过程中，常使用特定的选择培养基(如HAT培养基)，该培养基对____________和____________生长具有抑制作用。
(3)单克隆抗体筛选中，将抗体与该病毒外壳蛋白进行杂交，其目的是___________________________________________________________________
___________________________________________________________________。
3.(2020·江苏卷，28改编)病毒可通过表面的刺突蛋白(S蛋白)与人呼吸道黏膜上皮细胞的ACE2受体结合，侵入人体，引起感染。图1为病毒侵入后，人体内发生的部分免疫反应示意图。单克隆抗体可阻断病毒的黏附或入侵，故抗体药物的研发已成为治疗新冠感染的研究热点之一。图2为筛选、制备抗S蛋白单克隆抗体的示意图。请据图回答下列问题：
(1)图1中人体内吞噬细胞吞噬病毒，并将病毒的抗原暴露在细胞表面，被________细胞表面的受体识别后激活该细胞。
(2)B细胞识别入侵的病毒后，在白细胞介素－2作用下，经过细胞的____________，形成____________细胞。
(3)为判断疑似患者是否为新型冠状病毒感染者，采集鼻咽拭子主要用于病原学检查，检测病毒的________；采集血液样本主要用于血清学检查，检测_________________________________________________________________。
(4)据图2所示，研制抗S蛋白单克隆抗体，需先注射________免疫小鼠以激活小鼠的免疫细胞，再提取激活的B细胞与骨髓瘤细胞融合，用HAT培养基筛选获得________细胞。因为同一种抗原可能激活________细胞，还需继续筛选才能获得分泌单克隆抗体的细胞株。
课时3 通过细胞融合可产生具有新特性的细胞
概念1
自主建构
融合因子 相同 不同 远 新特性 细胞膜的流动性 聚乙二醇 电流刺激 单克隆抗体
辨正误
(1)× 提示：诱导植物原生质体融合的方法不包括灭活病毒诱导。
(2)× 提示：人鼠融合细胞中人的染色体优先丢失。
(3)√
合作探究
(1)提示：细胞膜的流动性。
(2)提示：聚乙二醇(PEG)、电流刺激等。
(3)提示：否。3种。
典例应用
例1 C [若a细胞和b细胞是植物体细胞，二者融合成一个杂种细胞后，再培育成一个杂种植株才是植物体细胞杂交，A错误；若a细胞和b细胞是植物体细胞，要先去除细胞壁再诱导融合，B错误；c细胞包含a细胞和b细胞所有的基因，但不会同时表达所有基因，D错误。]
例2 B [灭活病毒是动物细胞融合特有的，A错误；动物细胞融合和植物体细胞杂交技术都可以打破生殖隔离，B正确；植物体细胞杂交技术需要用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，动物细胞融合不需要，C错误；目前，动物细胞融合不能发育成完整个体，D错误。]
概念2
自主建构
1．抗原 血清 低 低 差
2．(2)B淋巴细胞 杂交瘤细胞 (3)①高 ③强 高 (4)肿瘤 正常
辨正误
(1)√ (2)√ (3)√
合作探究
1．(1)提示：动物细胞融合技术、动物细胞培养技术等。
(2)提示：未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞。
(3)提示：杂交瘤细胞。既能迅速大量增殖，又能产生抗体。
(4)提示：能产生特定抗体的杂交瘤细胞。
2．(1)提示：胞吞。需要能量。
(2)提示：抗体具有靶向运输作用；药物具有杀死肿瘤细胞的作用。
(3)提示：ADC协同发挥了抗体特异性识别的靶向作用和细胞毒素对肿瘤细胞的杀伤作用，具有靶点清楚、毒副作用小的优点。
典例应用
例3 B [制备单克隆抗体的技术有动物细胞培养、动物细胞融合，A错误；HAT培养基中的细胞本来就处于游离状态，因此若要将HAT培养基中的细胞分开培养，一般不需要用胰蛋白酶处理，B正确；原代培养物经首次传代成功后即成细胞系，选育出产生高特异性抗体的细胞群体不是细胞系，C错误；该技术制备的单克隆抗体，能用于制作新冠病毒抗原检测试剂盒，D错误。]
例4 A [根据题图分析可知，ADC可通过胞吞的方式进入肿瘤细胞，体现了细胞膜的流动性，A正确；抗体进入细胞后被溶酶体裂解，释放的药物导致细胞凋亡，B错误；据图可知，携带细胞毒素的单克隆抗体与肿瘤细胞膜上的特异性受体结合，C错误；肿瘤细胞的溶酶体中含有能水解抗体—药物偶联物(ADC)的酶，从而将抗体—药物偶联物(ADC)水解，使药物被释放出来发挥作用，药物并没有被溶酶体内的酶水解，D错误。]
感悟真题
1．D [单克隆抗体制备过程中需要对骨髓瘤细胞等进行培养，即需要使用动物细胞培养技术，A正确；该操作的目的是制备单克隆抗体用于快速检测PTH，故应用PTH刺激小鼠，使其产生相应的B细胞，B正确；抗原与抗体的结合具有特异性，可利用抗原－抗体结合的原理筛选杂交瘤细胞，C正确；由于一种B细胞经分化形成浆细胞后通常只能产生一种抗体，故筛选出的单个杂交瘤细胞无法分泌多种抗体，D错误。]
2．(1)不需要 增加细胞膜的流动性
(2)未融合的亲本细胞 融合的具有同种核的细胞
(3)通过抗体检测呈阳性来获得分泌所需抗体的杂交瘤细胞
解析 (1)由于浆细胞的分裂能力比较差，与小鼠骨髓瘤细胞融合前，已免疫的脾细胞(含浆细胞)，不需要通过原代培养扩大细胞数量。脂溶性物质PEG可使细胞接触处的磷脂分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。(2)在杂交瘤细胞筛选过程中，用特定的选择培养基进行筛选，在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。(3)单克隆抗体筛选中，将抗体与该病毒外壳蛋白进行杂交，是运用了抗原－抗体杂交技术，抗体检测呈阳性的细胞，即为所需的杂交瘤细胞。
3．(1)辅助性T (2)增殖、分化 浆细胞和记忆B (3)核酸 抗新型冠状病毒抗体
(4)刺突蛋白(或S蛋白) 杂交瘤 多种B
解析 (1)图1中，吞噬细胞吞噬病毒，并将病毒抗原呈递给辅助性T细胞，后者识别抗原后被激活，分泌白细胞介素－2。(2)B细胞识别入侵的病毒后，在白细胞介素－2作用下，经过细胞的增殖、分化，形成浆细胞和记忆B细胞。(3)为判断疑似患者是否为新型冠状病毒感染者，采集鼻咽拭子用于病原学检查时，检测的是病毒的核酸；采集血液样本用于血清学检查时，检测的是抗新型冠状病毒抗体。(4)为了诱导小鼠产生能够分泌抗S蛋白抗体的B淋巴细胞，实验时需先给小鼠注射S蛋白，再提取激活的B细胞与骨髓瘤细胞融合，用HAT培养基筛选可获得杂交瘤细胞。因为同一种抗原可能激活多种B淋巴细胞，还需继续筛选才能获得分泌单克隆抗体的细胞株。(共41张PPT)
第三章 动物细胞工程
课时3
通过细胞融合可产生具有新特性的细胞
本课时的概念为“细胞融合就是在一些融合因子的作用下，将两个或两个以上的细胞合并成一个细胞的技术”“细胞融合技术是制备单克隆抗体的基础”，这两个概念的建构需要以下基本概念或证据的支持：
(1)可通过一定手段诱导两个或多个动物细胞融合形成一个细胞；(2)利用细胞融合技术和细胞筛选可以制备单克隆抗体。
课时概念解析
目录 CONTENTS
1. 两个或多个动物细胞经诱导可融合形成一个细胞
2.细胞融合技术是制备单克隆抗体的基础
3.感悟真题
自主建构
合作探究
合作探究
课时概念图
自主建构
动物细胞融合技术
融合因子
相同
不同
远
新特性
细胞膜的流动性
聚乙二醇
电流刺激
单克隆抗体
×
[辨正误]
(1)促进动物细胞融合的方法与诱导植物原生质体融合的方法相同，有PEG处理、电流刺激和灭活病毒诱导等。( )
提示：诱导植物原生质体融合的方法不包括灭活病毒诱导。
(2)1967年，科学家发现人鼠融合细胞中鼠的染色体优先丢失。( )
提示：人鼠融合细胞中人的染色体优先丢失。
(3)仙台病毒被灭活后才可用于细胞融合，灭活的手段是经紫外线照射。( )
×
√
(生命科学史情境)1962年，科学家利用灭活的仙台病毒，使体外培养的腹水瘤细胞成功融合。后来，科学家又成功诱导了不同种动物的体细胞融合(如下图所示)，并且能将杂交细胞培养成活。
灭活的病毒诱导细胞融合的过程示意图
(1)动物细胞融合的结构基础是什么？
提示：细胞膜的流动性。
(2)除了灭活的病毒外，诱导动物细胞融合还有哪些常用的技术手段？
提示：聚乙二醇(PEG)、电流刺激等。
(3)经诱导后，是否所有细胞都能融合？只考虑两两融合，共能产生几种融合细胞？
提示：否。3种。
1.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较
2.重组细胞、杂交细胞与杂种细胞
【典例应用 】
C
例1 (2024·浙江温州高二期中)如图为细胞融合的示意图。下列叙述正确的是( )
A.若a细胞和b细胞是植物体细胞，二者融合成一个杂种细胞就是植物体细胞杂交
B.若a细胞和b细胞是植物细胞，需先脱分化再诱导融合
C.a细胞和b细胞之间的融合需要促融处理后才能实现
D.c细胞将同时表达a细胞和b细胞中的所有基因
解析：若a细胞和b细胞是植物体细胞，二者融合成一个杂种细胞后，再培育成一个杂种植株才是植物体细胞杂交，A错误；
若a细胞和b细胞是植物体细胞，要先去除细胞壁再诱导融合，B错误；
c细胞包含a细胞和b细胞所有的基因，但不会同时表达所有基因，D错误。
A.若a细胞和b细胞是植物体细胞，二者融合成一个杂种细胞就是植物体细胞杂交
B.若a细胞和b细胞是植物细胞，需先脱分化再诱导融合
C.a细胞和b细胞之间的融合需要促融处理后才能实现
D.c细胞将同时表达a细胞和b细胞中的所有基因
B
例2 对比动物细胞融合和植物体细胞杂交技术，下列论述合理的是( )
A.均可使用PEG、电刺激或灭活病毒的方法诱导细胞融合
B.两者都可以跨越种属间的生殖隔离
C.两者都需要用到纤维素酶和果胶酶
D.在适宜的条件下，均可发育成完整个体
解析：灭活病毒是动物细胞融合特有的，A错误；
动物细胞融合和植物体细胞杂交技术都可以打破生殖隔离，B正确；
植物体细胞杂交技术需要用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，动物细胞融合不需要，C错误；
目前，动物细胞融合不能发育成完整个体，D错误。
抗原
1.抗体的早期生产
血清
低
低
差
2.单克隆抗体的制备
(1)单克隆抗体的定义：是指由一个B淋巴细胞增殖形成的细胞群所产生的单一型抗体分子。
(2)单克隆抗体的制备过程
B淋巴细胞
杂交瘤细胞
(3)单克隆抗体的优点
①纯度____；②可大量制备；③特异性____、灵敏度____。
(4)单克隆抗体的“三大”应用
强
高
肿瘤
正常
高
√
[辨正误]
(1)血清中获取的抗体是由多种抗体混合在一起的多克隆抗体，能够识别多种抗原，导致其特异性较差。( )
(2)能产生特定抗体的B淋巴细胞不能增殖，能增殖的瘤细胞不能产生抗体，而杂交瘤细胞既能迅速大量增殖，又能产生抗体。( )
(3)B淋巴细胞和瘤细胞融合后需要用HAT培养基进行筛选，亲代细胞和同核体细胞不能在该培养基上生长，只有异核体细胞才能在该培养基上生长。( )
√
√
1.(生命科学史情境)1975年，英国科学家米尔斯坦和德国科学家科勒，将一种能产生特定抗体的B细胞与能在体外无限增殖的骨髓瘤细胞进行融合，形成了杂交瘤细胞，然后通过筛选和培养，获得了单克隆抗体，并因此荣获1984年的诺贝尔生理学或医学奖。
下图表示某种单克隆抗体的制备过程，据图回答下列问题：
(1)由图可知，单克隆抗体制备过程运用了哪些主要的动物细胞工程技术手段？
提示：动物细胞融合技术、动物细胞培养技术等。
(2)经第一次筛选，被淘汰的细胞有哪些类型？
提示：未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞。
(3)经第一次筛选，筛选出的是何种细胞？有何特点？
提示：杂交瘤细胞。既能迅速大量增殖，又能产生抗体。
(4)经第二次筛选，选出的细胞属于什么类型？
提示：能产生特定抗体的杂交瘤细胞。
2.(生活、学习与实践情境)使用高效的细胞毒素类药物进行化疗可以有效杀伤肿瘤细胞。但细胞毒素没有特异性，在杀伤肿瘤细胞的同时还会对健康细胞造成伤害，这限制了它在临床上的应用。抗体—药物偶联物(ADC)通过将细胞毒素与能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体结合，实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤。ADC通常由抗体、接头和药物(如细胞毒素)三部分组成，它的作用机制如图所示。
(1)据图分析，ADC进入肿瘤细胞的方式是什么？需不需要能量？
提示：胞吞。需要能量。
(2)ADC的抗体和药物各具有什么作用？
提示：抗体具有靶向运输作用；药物具有杀死肿瘤细胞的作用。
(3)ADC与传统的化疗相比较具有什么优势？
提示：ADC协同发挥了抗体特异性识别的靶向作用和细胞毒素对肿瘤细胞的杀伤作用，具有靶点清楚、毒副作用小的优点。
单克隆抗体制备过程中
两次筛选的比较
B
例3 (2024·舟山质检)下图表示单克隆抗体制备部分流程图，下列叙述正确的是( )
【典例应用 】
A.制备单克隆抗体的技术有动物细胞培养、
动物细胞融合和胚胎移植技术
B.若要将HAT培养基中的细胞分开培养，
一般不需要用胰蛋白酶处理
C.选育出产生高特异性抗体的细胞群体即为细胞系
D.该技术不能用于制作新冠病毒抗原检测试剂盒
解析：制备单克隆抗体的技术有动物细胞培养、动物细胞融合，A错误；
HAT培养基中的细胞本来就处于游离状态，因此若要将HAT培养基中的细胞分开培养，一般不需要用胰蛋白酶处理，B正确；
原代培养物经首次传代成功后即成细胞系，选育出产生高特异性抗体的细胞群体不是细胞系，C错误；
该技术制备的单克隆抗体，能用于制作新冠病毒抗原检测试剂盒，D错误。
A.制备单克隆抗体的技术有动物细胞培养、动物细胞融合和胚胎移植技术
B.若要将HAT培养基中的细胞分开培养，一般不需要用胰蛋白酶处理
C.选育出产生高特异性抗体的细胞群体即为细胞系
D.该技术不能用于制作新冠病毒抗原检测试剂盒
A
例4 (2024·嘉兴高二期末)抗体—药物偶联物(ADC)通过将细胞毒素类药物与单克隆抗体结合，实现对肿瘤细胞的选择性杀伤，过程如图所示。相关叙述正确的是( )
A.ADC进入肿瘤细胞的过程
体现了细胞膜的流动性
B.抗体进入细胞后激活溶酶
体酶导致肿瘤细胞凋亡
C.单克隆抗体携带的细胞毒素与肿瘤细胞特异结合
D.肿瘤细胞的溶酶体中含有能特异性水解药物的酶
解析：根据题图分析可知，ADC可通过胞吞的方式进入肿瘤细胞，体现了细胞膜的流动性，A正确；
抗体进入细胞后被溶酶体裂解，释放的药物导致细胞凋亡，B错误；
据图可知，携带细胞毒素的单克隆抗体与肿瘤细胞膜上的特异性受体结合，C错误；
肿瘤细胞的溶酶体中含有能水解抗体—药物偶联物(ADC)的酶，从而将抗体—药物偶联物(ADC)水解，使药物被释放出来发挥作用，药物并没有被溶酶体内的酶水解，D错误。
A.ADC进入肿瘤细胞的过程体现了细胞膜的流动性
B.抗体进入细胞后激活溶酶体酶导致肿瘤细胞凋亡
C.单克隆抗体携带的细胞毒素与肿瘤细胞特异结合
D.肿瘤细胞的溶酶体中含有能特异性水解药物的酶
D
1.(2023·北京卷，12)甲状旁腺激素(PTH)水平是人类多种疾病的重要诊断指标。研究者制备单克隆抗体用于快速检测PTH，有关制备过程的叙述错误的是( )
A.需要使用动物细胞培养技术
B.需要制备用PTH免疫的小鼠
C.利用抗原－抗体结合的原理筛选杂交瘤细胞
D.筛选能分泌多种抗体的单个杂交瘤细胞
解析：单克隆抗体制备过程中需要对骨髓瘤细胞等进行培养，即需要使用动物细胞培养技术，A正确；
该操作的目的是制备单克隆抗体用于快速检测PTH，故应用PTH刺激小鼠，使其产生相应的B细胞，B正确；
抗原与抗体的结合具有特异性，可利用抗原－抗体结合的原理筛选杂交瘤细胞，C正确；
由于一种B细胞经分化形成浆细胞后通常只能产生一种抗体，故筛选出的单个杂交瘤细胞无法分泌多种抗体，D错误。
2.(2023·湖北卷，22节选)某病毒对动物养殖业危害十分严重。我国学者拟以该病毒外壳蛋白A为抗原来制备单克隆抗体，以期快速检测该病毒，其主要技术路线如图所示。
回答下列问题：
(1)与小鼠骨髓瘤细胞融合前，已免疫脾细胞(含浆细胞)__________(填“需要”或“不需要”)通过原代培养扩大细胞数量；添加脂溶性物质PEG可促进细胞融合，该过程中PEG对细胞膜的作用是___________________________________。
不需要
增加细胞膜的流动性
(2)在杂交瘤细胞筛选过程中，常使用特定的选择培养基(如HAT培养基)，该培养基对____________________和____________________________生长具有抑制作用。
(3)单克隆抗体筛选中，将抗体与该病毒外壳蛋白进行杂交，其目的是___________________________________________________________________。
未融合的亲本细胞
融合的具有同种核的细胞
通过抗体检测呈阳性来获得分泌所需抗体的杂交瘤细胞
解析：(1)由于浆细胞的分裂能力比较差，与小鼠骨髓瘤细胞融合前，已免疫的脾细胞(含浆细胞)，不需要通过原代培养扩大细胞数量。脂溶性物质PEG可使细胞接触处的磷脂分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。
(2)在杂交瘤细胞筛选过程中，用特定的选择培养基进行筛选，在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。
(3)单克隆抗体筛选中，将抗体与该病毒外壳蛋白进行杂交，是运用了抗原－抗体杂交技术，抗体检测呈阳性的细胞，即为所需的杂交瘤细胞。
3.(2020·江苏卷，28改编)病毒可通过表面的刺突蛋白(S蛋白)与人呼吸道黏膜上皮细胞的ACE2受体结合，侵入人体，引起感染。图1为病毒侵入后，人体内发生的部分免疫反应示意图。单克隆抗体可阻断病毒的黏附或入侵，故抗体药物的研发已成为治疗新冠感染的研究热点之一。图2为筛选、制备抗S蛋白单克隆抗体的示意图。请据图回答下列问题：
(1)图1中人体内吞噬细胞吞噬病毒，并将病毒的抗原暴露在细胞表面，被________细胞表面的受体识别后激活该细胞。
(2)B细胞识别入侵的病毒后，在白细胞介素－2作用下，经过细胞的____________，形成_______________细胞。
辅助性T
增殖、分化
浆细胞和记忆B
(3)为判断疑似患者是否为新型冠状病毒感染者，采集鼻咽拭子主要用于病原学检查，检测病毒的________；采集血液样本主要用于血清学检查，检测___________________________________________________________________。
核酸
抗新型冠状病毒抗体
(4)据图2所示，研制抗S蛋白单克隆抗体，需先注射____________________免疫小鼠以激活小鼠的免疫细胞，再提取激活的B细胞与骨髓瘤细胞融合，用HAT培养基筛选获得________细胞。因为同一种抗原可能激活________细胞，还需继续筛选才能获得分泌单克隆抗体的细胞株。
刺突蛋白(或S蛋白)
杂交瘤
多种B
解析：(1)图1中，吞噬细胞吞噬病毒，并将病毒抗原呈递给辅助性T细胞，后者识别抗原后被激活，分泌白细胞介素－2。
(2)B细胞识别入侵的病毒后，在白细胞介素－2作用下，经过细胞的增殖、分化，形成浆细胞和记忆B细胞。
(3)为判断疑似患者是否为新型冠状病毒感染者，采集鼻咽拭子用于病原学检查时，检测的是病毒的核酸；采集血液样本用于血清学检查时，检测的是抗新型冠状病毒抗体。
(4)为了诱导小鼠产生能够分泌抗S蛋白抗体的B淋巴细胞，实验时需先给小鼠注射S蛋白，再提取激活的B细胞与骨髓瘤细胞融合，用HAT培养基筛选可获得杂交瘤细胞。因为同一种抗原可能激活多种B淋巴细胞，还需继续筛选才能获得分泌单克隆抗体的细胞株。课时精练11 通过细胞融合可产生具有新特性的细胞
(时间：30分钟分值：50分)
选择题：第1～10题，每小题3分，共30分。答案P172
【基础对点】
题型1 动物细胞融合
1.有关动物细胞融合的叙述，正确的是( )
动物细胞融合的原理是细胞的全能性
只有两个动物细胞结合成一个细胞的过程才叫动物细胞融合
灭活的仙台病毒是动物细胞融合和植物体细胞杂交常用的促融剂
细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能
2.关于动物细胞融合的说法错误的是( )
常用于诱导动物细胞融合的方法有PEG法、电流刺激、紫外线照射法和灭活病毒诱导法等
动物细胞融合后形成的具有原来两个或多个动物细胞遗传信息的单核细胞称为杂交细胞
动物细胞融合是指两个或多个动物细胞融合形成一个细胞的过程
细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能
3.如图表示仙台病毒诱导动物细胞融合的部分过程，下列叙述正确的是( )
细胞A和细胞B必须为同种细胞才能融合
细胞C同时有细胞A和细胞B的遗传物质
该融合过程体现了细胞膜具有选择透过性
此过程的原理是动物细胞具有全能性
题型2 单克隆抗体的制备
4.利用杂交瘤技术制备针对特定抗原的单克隆抗体过程如图所示。下列叙述正确的是( )
用于融合的B淋巴细胞应从未受抗原刺激的动物中提取
单克隆抗体的制备与植物体细胞杂交技术均依据细胞全能性原理
筛选2过程需要用到抗原抗体特异性结合的特性
选出的杂交瘤细胞只能通过体外培养获得大量单克隆抗体
5.(2024·海淀区高二期末)利用动物细胞融合方法，以SARS病毒刺突蛋白作为抗原制备出单克隆抗体(抗体D)。如图为使用不同抗体抑制病毒感染细胞的检测结果。下列相关叙述错误的是( )
对照抗体应不与SARS病毒特异性结合
将抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔内，可获得大量抗体D
检测抗体效果时需将SARS病毒与细胞混合一段时间后再加入抗体
抗体D需达到一定浓度才有明显抑制效果
6.(2024·强基联盟联考)如图为杂交瘤细胞制备示意图。骨髓瘤细胞由于缺乏次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT－)，在HAT选择培养基中不能正常合成DNA，无法生长。下列叙述错误的是( )
可用灭活的仙台病毒诱导细胞融合
两两融合的细胞都能在HAT培养基中生长
杂交瘤细胞需进一步筛选才能用于生产
细胞膜的流动性是细胞融合的基础
7.犬细小病毒(CPV)单克隆抗体(Cpv McAb)可抑制病毒对宿主细胞的侵染及病毒的复制，进而杀灭幼犬体内病毒。下列相关叙述，错误的是( )
在获得能分泌Cpv McAb的杂交瘤细胞的过程中需进行一次筛选
给幼犬注射CPV后，CPV的抗体检测呈阳性，说明发生了体液免疫反应
在Cpv McAb的制备过程中用到了动物细胞培养和动物细胞融合技术
对杂交瘤细胞培养时，需要无菌无毒环境，且温度、气体环境等条件要适宜
8.如图，核苷酸合成有两个途径，物质A可以阻断其中的全合成途径。正常细胞内含有补救合成途径所必需的转化酶和激酶。制备单克隆抗体时选用的骨髓瘤细胞缺乏转化酶。现用加入H、A、T三种物质的“HAT培养基”来筛选特定的杂交瘤细胞。关于筛选原理的叙述正确的是( )
免疫的B细胞及其相互融合细胞因全合成途径被A阻断，在HAT培养基上不能增殖
骨髓瘤细胞及其相互融合细胞因无法进行上述两个途径，而在HAT培养基上不能增殖
杂交瘤细胞因为可进行上述两个途径，能在HAT培养基上大量增殖
HAT培养基上筛选出的所有杂交瘤细胞，既能大量增殖又能产生较高纯度的目标抗体
题型3 单克隆抗体的应用
9.下列关于单克隆抗体的说法，错误的是( )
单克隆抗体可以治疗各种疾病
单克隆抗体的制备原理是细胞膜具有一定的流动性
单克隆抗体能准确地识别各种抗原物质的细微差别，并跟一定抗原发生特异性结合
单克隆抗体可以制成抗体—药物偶联物(ADC)
10.机体发生炎症反应时，血浆中CD14水平会升高。利用小鼠制备抗CD14单克隆抗体，能够用于CD14的检测。下列相关叙述正确的是( )
反复将CD14注射到小鼠体内，产生的血清抗体为单克隆抗体
灭活的病毒是唯一能诱导骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合的因素
利用杂交瘤技术获得的杂交瘤细胞都可以产生抗CD14抗体
杂交瘤细胞体外培养过程中需要提供CO2以调节培养液pH的相对稳定
【综合提升】
11.(10分)人绒毛膜促性腺激素(HCG)是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，制备抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。下面是抗HCG单克隆抗体制备流程示意图，请分析回答问题：
(1)(2分)制备单克隆抗体过程中要用到__________________和__________技术。
(2)(3分)制备单克隆抗体过程中，给小鼠注射的HCG相当于____________，使小鼠产生分泌相应________的B淋巴细胞，此过程属于特异性免疫中的________免疫。
(3)(3分)在细胞内DNA的合成一般有两条途径，主要途径是在细胞内由糖和氨基酸合成核苷酸，进而合成DNA，而氨基蝶呤可以阻断此途径。另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下，经酶的催化作用合成DNA，而骨髓瘤细胞的DNA合成没有此辅助途径。
①利用DNA合成途径不同的特点配制的HAT培养基含有多种成分，其中添加的________具有筛选杂交瘤细胞的作用。
②最终筛选获得的杂交瘤细胞的特点是______________________________
___________________________________________________________________。
(4)(2分)此过程生产的单克隆抗体可以与________________________________
__________________________________________特异性结合，从而诊断早孕。
12.(10分)科研人员在杂交瘤细胞的基础上，获得了双杂交瘤细胞，能够产生双特异性抗体，该抗体可以同时结合两种抗原。
(1)(4分)科研人员将抗原α、β分别注射到小鼠体内，引起机体的________免疫，________分泌相应抗体。
(2)(6分)科研人员获得上述小鼠的脾脏细胞，制备两种杂交瘤细胞。每种杂交瘤细胞产生的抗体结构、与抗原结合的情况如图1所示。
制备杂交瘤细胞时，需将上述小鼠的脾脏组织，用________________处理获得单细胞后，再与小鼠的骨髓瘤细胞融合，筛选得到两种杂交瘤细胞。将两种杂交瘤细胞用________试剂处理促进其融合，在培养基中加入________(天然成分)培养。如果两种细胞成功融合，则会同时表达出抗体的重链A、B和轻链a、b，这种细胞称作双杂交瘤细胞。
课时精练11 通过细胞融合可产生具有新特性的细胞
1．D [动物细胞融合的原理是细胞膜的流动性，A错误；动物细胞融合是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程，一般多数为两个细胞的融合，B错误；灭活的病毒只能用于诱导动物细胞融合，不能用于植物体细胞杂交，植物体细胞杂交常用聚乙二醇，C错误。]
2．A [常用于诱导动物细胞融合的方法有PEG法、电流刺激和灭活病毒诱导法等，A错误；动物细胞融合是指两个或多个动物细胞融合形成一个细胞的过程，细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能，C、D正确。]
3．B [不同种的细胞也能融合，如人鼠细胞融合，A错误；由题图可知，细胞A、B融合成一个细胞，细胞C同时有细胞A和细胞B的遗传物质，B正确；该融合过程体现了细胞膜具有流动性，C错误；此过程的原理是动物细胞膜具有流动性，D错误。]
4．C [用于融合的B淋巴细胞应从受特定抗原刺激的动物中提取，A错误；单克隆抗体的制备是利用细胞膜的流动性将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，形成的杂交细胞具有两种细胞的遗传信息，植物体细胞杂交技术依据的是细胞全能性，B错误；为获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞，可以通过抗原－抗体特异性结合进行筛选，C正确；选出的杂交瘤细胞可通过植入小鼠腹腔中增殖或体外培养获得大量单克隆抗体，D错误。]
5．C [检测抗体效果时可将SARS病毒与抗体混合，C错误。]
6．B [动物细胞融合可以用灭活的仙台病毒进行诱导，或用PEG、电流刺激等进行诱导，A正确；B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行两两融合产生的融合细胞有：B淋巴细胞自身融合细胞、骨髓瘤细胞自身融合细胞、杂交瘤细胞，据题干信息骨髓瘤细胞在HAT培养基上无法生长，因此骨髓瘤细胞自身融合细胞在HAT培养基上无法生长，而B淋巴细胞不能在体外长期培养，故只有杂交瘤细胞可以在HAT培养基上生长，B错误；融合后产生的杂交瘤细胞并不是都能产生所需的单克隆抗体，需要进一步筛选，C正确；动物细胞融合依据的原理是细胞膜的流动性，D正确。]
7．A [单克隆抗体制备过程至少要经过两次筛选，第一次是利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，第二次是利用抗原－抗体杂交筛选出能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞，A错误；抗原侵入机体后，发生体液免疫，体内产生抗犬细小病毒的抗体，B正确；在单克隆抗体的制备过程中使用的细胞工程技术有动物细胞融合和动物细胞培养，C正确；对杂交瘤细胞进行培养时，需要无菌无毒的环境，及营养、温度、pH和气体环境适宜的条件，D正确。]
8．B [免疫的B细胞及其相互融合细胞是有补救合成途径的，但是因为这两种细胞本身不增殖，所以在HAT培养基上不会有这两种细胞的增殖，A错误；骨髓瘤细胞及其相互融合细胞因无法进行上述两个途径，在HAT培养基上不能增殖，B正确；杂交瘤细胞因为可以进行补救合成途径，所以能在HAT培养基上大量增殖，C错误；HAT培养基上筛选出的杂交瘤细胞，并不都能产生较高纯度的目标抗体，D错误。]
9．A
10．D [单克隆抗体是利用细胞融合的手段产生的，A错误；诱导动物细胞融合可以用聚乙二醇、电流刺激、灭活病毒等方法，B错误；每个B淋巴细胞分泌一种特异性抗体，故需筛选才能获得产生抗CD14抗体的杂交瘤细胞，C错误。]
11．(1)动物细胞培养 动物细胞融合
(2)抗原 抗体 体液
(3)①氨基蝶呤 ②能无限增殖并分泌所需抗体
(4)人绒毛膜促性腺激素(或HCG)
解析 (1)制备单克隆抗体过程中要用到动物细胞培养技术培养骨髓瘤细胞和杂交瘤细胞，动物细胞融合技术将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞。(2)制备单克隆抗体过程中，给小鼠注射的HCG相当于抗原，使小鼠产生能分泌相应抗体的B淋巴细胞，此过程属于特异性免疫中的体液免疫。(3)①利用DNA合成途径不同的特点：氨基蝶呤可以阻断合成DNA的主要途径；次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下可合成DNA，而骨髓瘤细胞的DNA合成没有此辅助途径。可知在配制的HAT培养基中添加的氨基蝶呤具有筛选杂交瘤细胞的作用。②最终筛选获得的杂交瘤细胞具有能无限增殖并分泌所需抗体的特点。(4)人绒毛膜促性腺激素(HCG) 是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，此过程产生的单克隆抗体可以与它特异性结合，从而诊断早孕。
12．(1)体液 效应B(浆)细胞
(2)胰蛋白酶或胶原蛋白酶 PEG(或聚乙二醇) 血清
解析 (1)抗原进入小鼠体内能够引起机体的体液免疫，使效应B(浆)细胞分泌抗体。(2)制备杂交瘤细胞，将小鼠的脾脏组织用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理获得单细胞。动物细胞的融合需要使用PEG进行诱导，再加入血清进行培养。(共42张PPT)
课时精练11
通过细胞融合可产生具有新特性的细胞
(时间：30分钟 满分：50分)
D
题型1 动物细胞融合
1.有关动物细胞融合的叙述，正确的是( )
A.动物细胞融合的原理是细胞的全能性
B.只有两个动物细胞结合成一个细胞的过程才叫动物细胞融合
C.灭活的仙台病毒是动物细胞融合和植物体细胞杂交常用的促融剂
D.细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能
基础对点
01
类题
02
03
类题
04
05
类题
06
07
08
09
类题
10
类题
11
12
解析：动物细胞融合的原理是细胞膜的流动性，A错误；
动物细胞融合是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程，一般多数为两个细胞的融合，B错误；
灭活的病毒只能用于诱导动物细胞融合，不能用于植物体细胞杂交，植物体细胞杂交常用聚乙二醇，C错误。
基础对点
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类题
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11
12
●将人细胞与小鼠细胞融合，培养出的杂种细胞可能会随机丢失来自人细胞的染色体。在丢失人的1号染色体的融合细胞中，不能合成人的尿苷单磷酸激酶。下列有关叙述中不合理的是( )
A.与人和小鼠细胞相比，融合细胞发生了遗传物质的改变
B.研究方法中需要选择适当的培养基和细胞融合诱导技术
C.融合细胞经过培养，产生了新的动物个体
D.尿苷单磷酸激酶的基因很可能在1号染色体上
C
基础对点
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解析：融合细胞会随机丢失来自人细胞的染色体，即发生了遗传物质的改变，A正确；
选择适当的培养基用来培养和筛选细胞，细胞融合时常用PEG、灭活病毒和电流刺激来诱导融合，B正确；
该过程没有将杂交细胞培养成个体，C错误；
在丢失人的1号染色体的融合细胞中，不能合成人的尿苷单磷酸激酶，说明尿苷单磷酸激酶的基因很可能在1号染色体上，D正确。
基础对点
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2.关于动物细胞融合的说法错误的是( )
A.常用于诱导动物细胞融合的方法有PEG法、电流刺激、紫外线照射法和灭活病毒诱导法等
B.动物细胞融合后形成的具有原来两个或多个动物细胞遗传信息的单核细胞称为杂交细胞
C.动物细胞融合是指两个或多个动物细胞融合形成一个细胞的过程
D.细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能
A
基础对点
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解析：常用于诱导动物细胞融合的方法有PEG法、电流刺激和灭活病毒诱导法等，A错误；
动物细胞融合是指两个或多个动物细胞融合形成一个细胞的过程，细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能，C、D正确。
基础对点
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3.如图表示仙台病毒诱导动物细胞融合的部分过程，下列叙述正确的是( )
B
基础对点
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A.细胞A和细胞B必须为同种细胞才能融合
B.细胞C同时有细胞A和细胞B的遗传物质
C.该融合过程体现了细胞膜具有选择透过性
D.此过程的原理是动物细胞具有全能性
解析：不同种的细胞也能融合，如人鼠细胞融合，A错误；
由题图可知，细胞A、B融合成一个细胞，细胞C同时有细胞A和细胞B的遗传物质，B正确；
该融合过程体现了细胞膜具有流动性，C错误；
此过程的原理是动物细胞膜具有流动性，D错误。
基础对点
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A.细胞A和细胞B必须为同种细胞才能融合
B.细胞C同时有细胞A和细胞B的遗传物质
C.该融合过程体现了细胞膜具有选择透过性
D.此过程的原理是动物细胞具有全能性
题型2 单克隆抗体的制备
●下列有关制备单克隆抗体的叙述，错误的是( )
A.采用的细胞工程技术包括动物细胞培养和动物细胞融合
B.两次筛选的目的分别是筛选出杂交瘤细胞和筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞
C.要先用胃蛋白酶处理得到单个细胞，然后用诱导剂处理得到杂交瘤细胞
D.运用的生物学原理包括细胞增殖和细胞膜具有一定的流动性
C
基础对点
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解析：制备单克隆抗体采用的细胞工程技术包括动物细胞培养和动物细胞融合技术，A正确；
单克隆抗体的制备过程需要两次筛选，第一次是用选择培养基筛选获得杂交瘤细胞，去除未融合的细胞和自身融合细胞；第二次筛选是从杂交瘤细胞中筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞，B正确；
分散细胞获得单个细胞，需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，C错误。
基础对点
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4.利用杂交瘤技术制备针对特定抗原的单克隆抗体过程如图所示。下列叙述正确的是( )
C
基础对点
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A.用于融合的B淋巴细胞应从未受抗原刺激的动物中提取
B.单克隆抗体的制备与植物体细胞杂交技术均依据细胞全能性原理
C.筛选2过程需要用到抗原－抗体特异性结合的特性
D.选出的杂交瘤细胞只能通过体外培养获得大量单克隆抗体
解析：用于融合的B淋巴细胞应从受特定抗原刺激的动物中提取，A错误；
单克隆抗体的制备是利用细胞膜的流动性将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，形成的杂交细胞具有两种细胞的遗传信息，植物体细胞杂交技术依据的是细胞全能性，B错误；
为获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞，可以通过抗原－抗体特异性结合进行筛选，C正确；
选出的杂交瘤细胞可通过植入小鼠腹腔中增殖或体外培养获得大量单克隆抗体，D错误。
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A.用于融合的B淋巴细胞应从未受抗原刺激的动物中提取
B.单克隆抗体的制备与植物体细胞杂交技术均依据细胞全能性原理
C.筛选2过程需要用到抗原－抗体特异性结合的特性
D.选出的杂交瘤细胞只能通过体外培养获得大量单克隆抗体
5.(2024·海淀区高二期末)利用动物细胞融合方法，以SARS病毒刺突蛋白作为抗原制备出单克隆抗体(抗体D)。如图为使用不同抗体抑制病毒感染细胞的检测结果。下列相关叙述错误的是( )
C
基础对点
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A.对照抗体应不与SARS病毒特异性结合
B.将抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞注射到
小鼠腹腔内，可获得大量抗体D
C.检测抗体效果时需将SARS病毒与细胞混合
一段时间后再加入抗体
D.抗体D需达到一定浓度才有明显抑制效果
解析：检测抗体效果时可将SARS病毒与抗体混合，C错误。
●(2024·朝阳区高二期末)科学家将某些诱导基因转入小鼠成纤维细胞中成功获取诱导多能干细胞，这类细胞可用于一系列的研究，具体过程如下图所示。
D
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以下说法错误的是( )
A.过程②实质是基因的选择性表达
B.过程③可用聚乙二醇诱导细胞融合
C.培养诱导多能干细胞时，需要定期更换培养液
D.可将丁细胞注射到小鼠脾脏中提取单克隆抗体
解析：可以将能产生特定抗体的杂交瘤细胞(丁)注射入小鼠腹腔内进行培养，最后从腹水中分离出单克隆抗体；也可以采用体外培养的方法，最后从培养液中分离得到单克隆抗体；但不能将丁细胞注射到小鼠脾脏中提取单克隆抗体，D错误。
基础对点
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A.过程②实质是基因的选择性表达
B.过程③可用聚乙二醇诱导细胞融合
C.培养诱导多能干细胞时，需要定期更换培养液
D.可将丁细胞注射到小鼠脾脏中提取单克隆抗体
6.(2024·强基联盟联考)如图为杂交瘤细胞制备示意图。骨髓瘤细胞由于缺乏次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT－)，在HAT选择培养基中不能正常合成DNA，无法生长。下列叙述错误的是( )
B
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A.可用灭活的仙台病毒诱导细胞融合
B.两两融合的细胞都能在HAT培养基中生长
C.杂交瘤细胞需进一步筛选才能用于生产
D.细胞膜的流动性是细胞融合的基础
解析：动物细胞融合可以用灭活的仙台病毒进行诱导，或用PEG、电流刺激等进行诱导，A正确；
B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行两两融合产生的融合细胞有：B淋巴细胞自身融合细胞、骨髓瘤细胞自身融合细胞、杂交瘤细胞，据题干信息骨髓瘤细胞在HAT培养基上无法生长，因此骨髓瘤细胞自身融合细胞在HAT培养基上无法生长，而B淋巴细胞不能在体外长期培养，故只有杂交瘤细胞可以在HAT培养基上生长，B错误；
融合后产生的杂交瘤细胞并不是都能产生所需的单克隆抗体，需要进一步筛选，C正确；
动物细胞融合依据的原理是细胞膜的流动性，D正确。
A.可用灭活的仙台病毒诱导细胞融合
B.两两融合的细胞都能在HAT培养基中生长
C.杂交瘤细胞需进一步筛选才能用于生产
D.细胞膜的流动性是细胞融合的基础
基础对点
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7.犬细小病毒(CPV)单克隆抗体(Cpv McAb)可抑制病毒对宿主细胞的侵染及病毒的复制，进而杀灭幼犬体内病毒。下列相关叙述，错误的是( )
A.在获得能分泌Cpv McAb的杂交瘤细胞的过程中需进行一次筛选
B.给幼犬注射CPV后，CPV的抗体检测呈阳性，说明发生了体液免疫反应
C.在Cpv McAb的制备过程中用到了动物细胞培养和动物细胞融合技术
D.对杂交瘤细胞培养时，需要无菌无毒环境，且温度、气体环境等条件要适宜
A
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解析：单克隆抗体制备过程至少要经过两次筛选，第一次是利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，第二次是利用抗原－抗体杂交筛选出能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞，A错误；
抗原侵入机体后，发生体液免疫，体内产生抗犬细小病毒的抗体，B正确；
在单克隆抗体的制备过程中使用的细胞工程技术有动物细胞融合和动物细胞培养，C正确；
对杂交瘤细胞进行培养时，需要无菌无毒的环境，及营养、温度、pH和气体环境适宜的条件，D正确。
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8.如图，核苷酸合成有两个途径，物质A可以阻断其中的全合成途径。正常细胞内含有补救合成途径所必需的转化酶和激酶。制备单克隆抗体时选用的骨髓瘤细胞缺乏转化酶。现用加入H、A、T三种物质的“HAT培养基”来筛选特定的杂交瘤细胞。关于筛选原理的叙述正确的是( )
B
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A.免疫的B细胞及其相互融合细胞因全合成
途径被A阻断，在HAT培养基上不能增殖
B.骨髓瘤细胞及其相互融合细胞因无法进行
上述两个途径，而在HAT培养基上不能增殖
C.杂交瘤细胞因为可进行上述两个途径，能在HAT培养基上大量增殖
D.HAT培养基上筛选出的所有杂交瘤细胞，既能大量增殖又能产生较高纯度的目标抗体
解析：免疫的B细胞及其相互融合细胞是有补救合成途径的，但是因为这两种细胞本身不增殖，所以在HAT培养基上不会有这两种细胞的增殖，A错误；
骨髓瘤细胞及其相互融合细胞因无法进行上述两个途径，在HAT培养基上不能增殖，B正确；
杂交瘤细胞因为可以进行补救合成途径，所以能在HAT培养基上大量增殖，C错误；
HAT培养基上筛选出的杂交瘤细胞，并不都能产生较高纯度的目标抗体，D错误。
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A.免疫的B细胞及其相互融合细胞因全合成途径被A阻断，在HAT培养基上不能增殖
B.骨髓瘤细胞及其相互融合细胞因无法进行上述两个途径，而在HAT培养基上不能增殖
C.杂交瘤细胞因为可进行上述两个途径，能在HAT培养基上大量增殖
D.HAT培养基上筛选出的所有杂交瘤细胞，既能大量增殖又能产生较高纯度的目标抗体
题型3 单克隆抗体的应用
9.下列关于单克隆抗体的说法，错误的是( )
A.单克隆抗体可以治疗各种疾病
B.单克隆抗体的制备原理是细胞膜具有一定的流动性
C.单克隆抗体能准确地识别各种抗原物质的细微差别，并跟一定抗原发生特异性结合
D.单克隆抗体可以制成抗体—药物偶联物(ADC)
A
基础对点
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●将人、鼠细胞悬液混合并诱导细胞融合(只考虑细胞两两融合)后，在HAT培养基上，同时含有T、H基因(独立遗传)的细胞才能存活和增殖，增殖过程中，细胞内人染色体随机丢失，只残留一条或几条，对处于分裂中期细胞的镜检结果如表。下列叙述正确的是( )
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细胞 融合细胞 人 鼠 细胞样编号 残留人染色体
ttHH TThh ① 17
② 10、10、17
③ 17、X
B
A.在HAT培养基上，融合细胞均能存活和增殖
B.可以确定①的基因组成为TTTTHHhhhh
C.可以确定①②③的相关基因组成相同
D.可以将T(t)基因定位于人第17号染色体
基础对点
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解析：由题意知，在HAT培养基上，同时含有T、H基因(独立遗传)的细胞才能存活和增殖，A错误；
由表格信息可知，①细胞含有一条人体染色体，由细胞同时具有T、H基因在HAT培养基上才能存活，因此该染色体上含有H基因，由于有丝分裂中期一条染色体上含有2个染色单体，因此此时细胞中含有HH基因，鼠染色体上的基因型是TTTThhhh，所以融合细胞①的基因型是TTTTHHhhhh，B正确；
①②③相关基因组成可能不同，C错误；
由B项分析可知，H(h)基因位于人第17号染色体，D错误。
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10.机体发生炎症反应时，血浆中CD14水平会升高。利用小鼠制备抗CD14单克隆抗体，能够用于CD14的检测。下列相关叙述正确的是( )
A.反复将CD14注射到小鼠体内，产生的血清抗体为单克隆抗体
B.灭活的病毒是唯一能诱导骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合的因素
C.利用杂交瘤技术获得的杂交瘤细胞都可以产生抗CD14抗体
D.杂交瘤细胞体外培养过程中需要提供CO2以调节培养液pH的相对稳定
D
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解析：单克隆抗体是利用细胞融合的手段产生的，A错误；
诱导动物细胞融合可以用聚乙二醇、电流刺激、灭活病毒等方法，B错误；
每个B淋巴细胞分泌一种特异性抗体，故需筛选才能获得产生抗CD14抗体的杂交瘤细胞，C错误。
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●如图所示，将由2种不同的抗原分别制备的单克隆抗体分子，在体外解偶联后重新偶联可制备双特异性抗体，简称双抗。下列说法错误的是( )
D
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A.双抗可同时与2种抗原结合
B.利用双抗可以将蛋白类药物运送至靶细胞
C.筛选双抗时需使用制备单克隆抗体时所使用的2种抗原
D.同时注射2种抗原可刺激B细胞分化为产双抗的浆细胞
解析：根据抗原和抗体发生特异性结合的原理推测，双抗可同时与2种抗原结合，A正确；
根据抗原与抗体能够发生特异性结合的特性，利用双抗可以将蛋白类药物运送至靶细胞，从而使药物发挥相应的作用，B正确；
由于双抗是2种不同的单克隆抗体分子在体外解偶联后重新偶联制备的，因此，筛选双抗时需使用制备单克隆抗体时所使用的2种抗原来进行抗原－抗体检测，从而实现对双抗的筛选，C正确；
同时注射2种抗原可刺激B细胞分化形成产生不同抗体的浆细胞，而不是分化成产双抗的浆细胞，D错误。
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A.双抗可同时与2种抗原结合
B.利用双抗可以将蛋白类药物运送至靶细胞
C.筛选双抗时需使用制备单克隆抗体时所使用的2种抗原
D.同时注射2种抗原可刺激B细胞分化为产双抗的浆细胞
11.人绒毛膜促性腺激素(HCG)是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，制备抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。下面是抗HCG单克隆抗体制备流程示意图，请分析回答问题：
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(1)制备单克隆抗体过程中要用到_______________和__________________技术。
(2)制备单克隆抗体过程中，给小鼠注射的HCG相当于________，使小鼠产生分泌相应________的B淋巴细胞，此过程属于特异性免疫中的________免疫。
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动物细胞培养
动物细胞融合
抗原
抗体
体液
(3)在细胞内DNA的合成一般有两条途径，主要途径是在细胞内由糖和氨基酸合成核苷酸，进而合成DNA，而氨基蝶呤可以阻断此途径。另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下，经酶的催化作用合成DNA，而骨髓瘤细胞的DNA合成没有此辅助途径。
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①利用DNA合成途径不同的特点配制的HAT培养基含有多种成分，其中添加的________具有筛选杂交瘤细胞的作用。
②最终筛选获得的杂交瘤细胞的特点是_________________________________。
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氨基蝶呤
能无限增殖并分泌所需抗体
(4)此过程生产的单克隆抗体可以与____________________________________
特异性结合，从而诊断早孕。
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人绒毛膜促性腺激素(或HCG)
解析：(1)制备单克隆抗体过程中要用到动物细胞培养技术培养骨髓瘤细胞和杂交瘤细胞，动物细胞融合技术将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞。
(2)制备单克隆抗体过程中，给小鼠注射的HCG相当于抗原，使小鼠产生能分泌相应抗体的B淋巴细胞，此过程属于特异性免疫中的体液免疫。
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(3)①利用DNA合成途径不同的特点：氨基蝶呤可以阻断合成DNA的主要途径；次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下可合成DNA，而骨髓瘤细胞的DNA合成没有此辅助途径。可知在配制的HAT培养基中添加的氨基蝶呤具有筛选杂交瘤细胞的作用。②最终筛选获得的杂交瘤细胞具有能无限增殖并分泌所需抗体的特点。
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(4)人绒毛膜促性腺激素(HCG) 是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，此过程产生的单克隆抗体可以与它特异性结合，从而诊断早孕。
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12.科研人员在杂交瘤细胞的基础上，获得了双杂交瘤细胞，能够产生双特异性抗体，该抗体可以同时结合两种抗原。
(1)科研人员将抗原α、β分别注射到小鼠体内，引起机体的________免疫，________________分泌相应抗体。
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体液
效应B(浆)细胞
(2)科研人员获得上述小鼠的脾脏细胞，制备两种杂交瘤细胞。每种杂交瘤细胞产生的抗体结构、与抗原结合的情况如图1所示。
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制备杂交瘤细胞时，需将上述小鼠的脾脏组织，用________________________处理获得单细胞后，再与小鼠的骨髓瘤细胞融合，筛选得到两种杂交瘤细胞。将两种杂交瘤细胞用____________________试剂处理促进其融合，在培养基中加入________(天然成分)培养。如果两种细胞成功融合，则会同时表达出抗体的重链A、B和轻链a、b，这种细胞称作双杂交瘤细胞。
胰蛋白酶或胶原蛋白酶
PEG(或聚乙二醇)
血清
解析：(1)抗原进入小鼠体内能够引起机体的体液免疫，使效应B(浆)细胞分泌抗体。
(2)制备杂交瘤细胞，将小鼠的脾脏组织用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理获得单细胞。动物细胞的融合需要使用PEG进行诱导，再加入血清进行培养。
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