2.2 .动物细胞融合技术与单克隆抗体 课件-高二下学期生物人教版选择性必修3(共24张PPT)
文档属性
| 名称 | 2.2 .动物细胞融合技术与单克隆抗体 课件-高二下学期生物人教版选择性必修3(共24张PPT) |  | |
| 格式 | pptx | ||
| 文件大小 | 8.2MB | ||
| 资源类型 | 试卷 | ||
| 版本资源 | 人教版（2019） | ||
| 科目 | 生物学 | ||
| 更新时间 | 2025-04-20 23:21:34 | ||
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文档简介
(共24张PPT)
第二节动物细胞工程
动物细胞融合技术与单克隆抗体
本节主要解决的困惑
1.动物细胞融合技术
★ 2. 设计单克隆抗体制备的实验方案
比较项目 植物体细胞杂交技术
动物细胞融合技术
原理 细胞膜的流动性 植物细胞的全能性
细胞膜的流动性 细胞增殖
融合前处理 去除细胞壁
使细胞分散
诱导融合的 方法 物理(离心、振荡、电 激)化学(PEG)
物理、化学方法(
PEG)、灭活的病毒
用途 杂种植株
制备单克隆抗体
意义 突破远缘杂交不亲和的障碍，打破生殖隔离
困惑点一：动物细胞融合技术
合作探究要求：
1.请对比植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术，尝试比较两者之间的异同点
2.先独立思考，然后小组合作，派代表分享，时间2min。
技术
过程
方法
原理
应用
灭活的病毒颗粒黏附于 细胞表面
病毒表面糖蛋白和细胞 膜上的糖蛋白发生作用
蛋白质、脂质分子重排， 细胞膜打开
细胞融合，形成杂交细胞
为什么植物体细胞杂交技术不能用灭活的病毒作诱导剂
点拨提升1
1、 下列关于动物细胞融合的说法，错误的是( D )
A.细胞融合前要用酶解法将组织分散成单个细胞
B.细胞融合的原理是细胞膜的流动性
C.融合后得到的杂交细胞具有两个或多个亲本细胞的遗传信息
D.融合后得到的杂交细胞具有两个细胞核
学以致用1
2. (2018江苏单科，22,3分)如图为细胞融合的示意图，下列叙述
正确的是(不定项) ( BC)
A. 若a细胞和b细胞是植物细胞，需先去分化再诱导融合 O )a
B.a细胞和b细胞之间的融合需要促融处理后才能实现
C.c细胞的形成与a、b细胞膜的流动性都有关
D.c细胞将同时表达a细胞和b细胞中的所有基因
◎b
)c
学以致用1
1.阅读以下资料，设计制备治疗新冠的单克隆抗体实验方案，可用简单文字和 箭头表示，完成后拍照上传，小组长上传即可。
2. 请先独立思考，然后小组合作交流，派代表展示成果，时间4min。
资料：人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多
达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异 性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即 克 隆 。
骨髓瘤细胞能无限增殖。
困惑点二：设计制备单克隆抗体的方案
合作探究要求：
获得产生抗新冠 病毒抗体的B淋 巴细胞
( 一 筛):利用 选择培养基获得
杂交瘤细胞
腹腔中有易于培 养杂交瘤细胞的
条件
7 筛选杂交细胞
人
8 克隆能产生抗体
的阳性细胞
10 再克隆
1 注射小鼠阳性细胞
BB 、B瘤 、瘤瘤
杂交细胞
(二筛):获得能产生所 需专一抗体的杂交瘤细胞
单克隆抗体的制备过程
杂交瘤细胞
抗体检验 9
11 体外培养
培养骨髓瘤细胞 灭活新冠病毒
融合
B淋巴细胞
单克隆抗体 单克隆抗体
骨髓瘤细胞
免疫小鼠
单克隆抗体
未融合 B-B融 B-骨髓瘤 骨髓瘤-骨髓 未融合的骨
的 B细 胞 合细胞 融合细胞 瘤融合细胞 髓瘤细胞
用HAT选择培养基 将其他类型细胞淘汰，只保留
进行第一次筛选 B细胞与骨髓瘤细胞的融合细胞
多孔板进行第二次筛选
性质不稳定，在培养过程中会有染色 体丢失现象，直到细胞呈现稳定状态
为止。因此在建立杂交瘤细胞系过程
给小鼠注射特定抗原的目的是获得能产生相应抗体白 中要经常检查抗体效价。
骨髓瘤细胞
物理方法
化学方法
生物方法
知识拓展：HAT 培养基原理
多种B淋巴细胞
诱导原生 质体融合
从小鼠腹
水中获取
体内培养。
不同类型的B细胞与骨髓瘤 细胞融合形成的融合细胞
只保留能产生特定抗体 的杂交瘤细胞
培养液 中获取
体外培养
杂交瘤细胞是异源四倍体细胞，遗传
能产生特定抗体 的杂交瘤细胞
图23 .5 单克隆抗体
须 知
酶解分散
第一次筛选的内容如下。
① 诱导融合后，融合体系中有多种细胞：B 细 胞 -B 细胞形成的融合细胞、〈 B 细胞一骨髓瘤细胞融合的杂交瘤细胞、骨髓瘤细胞一骨髓瘤细胞形成的融合细 胞。另外，还会有更多类型的三细胞融合细胞甚至四细胞融合细胞，这些细胞大 多不稳定，很快会死掉。当然，还有未融合的B 细胞和骨髓瘤细胞。
② 我们需要的只是B 细胞一骨髓瘤细胞融合的杂交瘤细胞，此时可以通过 HAT 选择培养基进行筛选。 DNA 合成时所需的脱氧核苷酸有两种来源：从头合 成途径和补救途径。从头合成途径又称D 途 径 ，D 是 de～novo 的缩写，指的 是细胞利用甘氨酸、甲酸、谷氨酰酸、天冬氨酸等合成嘌呤以及利用谷氨酰胺、 CO 、 天冬氨酸合成嘧啶。而补救途径又称S 途径，S 是 salvage 的缩写，即细 胞利用外源的或分解代谢产生的碱基和核苷重新合成核苷一磷酸，再形成核苷二 磷酸、核苷三磷酸的过程。在设计实验的时候就考虑到了筛选的稳态，选用的骨 髓瘤细胞是一种代谢缺陷型的株系：只有D 途径，没有S 途径。
③ HAT 培养基中的H 表示次黄嘌呤，A 表示氨基蝶呤(aminopterin),T 表 示胸腺嘧啶脱氧核苷，即在正常动物细胞培养基中添加有这三种物质，其中氨基 蝶呤可以通过抑制D 途径抑制DNA 的合成，抑制细胞分裂，是常用的抑癌药物， 对应的药物称为癌得宁。而次黄嘌呤和胸腺嘧啶脱氧核苷是S 途径所需要的。
③ HAT 培养基中的H 表示次黄嘌呤， A 表示氨基蝶呤(aminopterin),T 表
示胸腺嘧啶脱氧核苷，即在正常动物细胞培养基中添加有这三种物质，其中氨基< 蝶呤可以通过抑制D 途径抑制DNA 的合成，抑制细胞分裂，是常用的抑癌药物，
对应的药物称为癌得宁。而次黄嘌呤和胸腺嘧啶脱氧核苷是S 途径所需要的。
④ 在 HAT 选择培养基上各细胞的生长情况如下。
·B 细胞、B 细胞—B 细胞融合细胞：理论上可以生长，但它们本身不能 增殖分化，因此无法生长。
·B 细胞—骨髓瘤细胞融合细胞：具有S 途径，又具有分裂能力，因此可 以分裂生长。
●骨髓瘤细胞、骨髓瘤细胞—骨髓瘤细胞融合细胞：仅有的D 途径被氨基 蝶呤抑制了，因此无法生长。
第二次筛选的内容如下。
① 小鼠在生活中还受到其他抗原的刺激，即B 细胞本身就是混杂的B 细胞， 因此，我们得到的杂交瘤细胞，有的能产生针对我们注射的特定抗原的抗体，有 的能产生针对其他抗原的抗体。我们需要进行第二次筛选，用多孔培养皿培养。
② 将第一次筛选得到的细胞培养物进行足够的稀释，稀释至7个/mL 以下。
③将稀释液分装在96孔板或384孔板(见图23.6)上，每个孔的体积为0.1mL;
图23.6 96孔板和384孔板
④ 理论上讲，每个孔中的细胞为0.7个，即每个孔要么没有细胞，要么只 有一个杂交瘤细胞。
⑤ 将这些多孔板进行培养，获得的细胞都是单个细胞的子细胞，即单克隆 培 养 。
⑥ 向生长有细胞的孔中添加最初的抗原，如果该孔中的细胞能够产生相应 的抗体，则可以观察到抗原—抗体聚集沉淀现象。
⑦ 经多次筛选得到能产生特异性抗体的细胞群。
1.细胞合成DNA 通常有2条途径：第1条途径是利用糖和氨基酸合成核苷酸，
进而合成DNA; 第2条途径是通过HGPRT 利用核苷酸的前体合成核苷酸，进
而合成DNA,HAT 培养基是基本培养基添加了次黄嘌呤(H) 、甲氨蝶呤(A)和 胸腺嘧啶核苷(T),A 可以阻断DNA合成的第1条途径，H和T则是第2条途径中 合成核苷酸的原料。HAT 培养基可以用于单克隆抗体制备杂交瘤细胞的选择， 小鼠骨髓瘤细胞是一类HGPRT 代谢缺陷型细胞。说法正确的是( )B
A.小鼠免疫B细胞和骨髓瘤细胞融合后，培养基上会有3种类型的细胞
B.HAT培养基中未融合的骨髓瘤细胞在A的阻遏下因不能合成DNA而死亡 C.HAT培养基中未融合的免疫B细胞仍具有增殖能力而持续进行细胞分裂 D.HAT培养基中选择出的杂交瘤细胞都能无限增殖和产生所需抗体
学以致用2
能正常合成DNA, 无法生长。下列叙述正确的是 ( C ) 免疫B 细胞 骨髓瘤细胞
HGPRT+ HGPRT
细胞融合
A.骨髓瘤细胞和免疫B细胞可用仙台病毒诱导融合 HAT 培养波
B. 骨髓瘤细胞在HAT筛选培养液中能正常增殖 融合的细胞 培 死亡
C. 免疫B细胞的种类不唯一，所以杂交瘤细胞仍需进一步筛选
D.筛选出的杂交瘤细胞体外培养时需添加抗生素防止真菌污染
养液中
在HAT
培养中死亡
体外长期
2. (2019 ·江苏卷)如图为杂交瘤细胞制备示意图。骨髓瘤细胞
由于缺乏次黄嘌呤磷酸核糖转移酶 (HGPRT-), 在HAT筛选培养液中不
学以致用2
3. (2021泰安期中)为了解决杂交瘤细胞在传代培养中出现来自B淋巴细胞染
色体丢失的问题，研究者在单克隆抗体的制备过程中增加了一个步骤，如下图 所示。除了抗原刺激之外，用EBV (一种病毒颗粒)感染动物B淋巴细胞，并使 之成为“染色体核型稳定”的细胞株。这样的细胞株能够在HAT培养基中存活 ,但对乌本苷 (Oua) 敏感。下列相关分析不合理的是 D )
A.杂交瘤细胞染色体丢失可能导致抗体产生能力下降
B. 杂交瘤细胞还需要经过克隆化培养和抗体检测， 经过多次筛选，才能获得所需细胞
C. 骨髓瘤细胞应该无法在HAT选择培养基中存活
D.杂交瘤细胞具有持续产生抗EBV抗体的能力
EBV转化细胞 PEG 融合
HAT培养基+Oua筛选
学以致用2
杂交
瘤细胞 骨髓瘤细胞 死亡
抗原 刺激 动物 B细胞
EBV 转化细胞 死亡
◎ EBV
骨髓瘤细胞
嵌合抗体：1984年，科学家将鼠抗体的可变区基因片段与人抗体的恒定区基因片段融
合，获得了人一鼠嵌合抗体。嵌合抗体保留了小鼠抗体的可变区，既保留了其与抗原结合 的亲和力和特异性，又降低了异源性，提高了使用的安全性。但嵌合抗体中仍存在鼠源性 成分，在人体内仍有诱发HAMA 反应的可能性，因此其不是我们的终极目标。
人源化单克隆抗体：抗体的可变区又可分为高变区和骨架区，高变区即互补决定区 compementrity detemining region,CDR),是抗体与抗原特异性结合的部位；可变区除
高变区之外的其他部位称为骨架区，主要起维持CDR 构象的作用。如果我们进一步把除
注射到病人体内后，病人体内的免疫系统产生了针对这
些抗体的抗体(抗抗体，或称为人抗鼠抗体， human
anti-mouse antibody,HAMA),迅速将这些单克隆抗体中 和掉了。
人源化单克隆抗体：抗体的可变区又可分为高变区和骨架区，高变区即互补决定区
(complementarity determining region,CDR), 是抗体与抗原特异性结合的部位;可变区除
高变区之外的其他部位称为骨架区，主要起维持CDR 构象的作用。如果我们进一步把除
CDR 之外的所有区域(包括骨架区和恒定区)都进行人源化(人源化程度最高可达97%), 就可以进一步降低HAMA 的程度，提高其使用安全性和有效性。目前已经广泛使用的人 源化单克隆抗体有pembrolizumab 、nivolumab 、trastuzumab 、bevacizumab 等。前两种的靶 标是PD-1,PD-1 在 T 细胞、NK 细胞、B 细胞、树突状细胞表面均有表达。正常细胞表面 表达有PD-L1;PD-LI 与 PD-1 特异性结合，可以抑制免疫细胞的活化，防止免疫反应过 强和自身免疫病的发生。在肿瘤细胞表面异常大量表达PD-L1, 极大降低了免疫应答强度， 实现肿瘤细胞免疫逃逸的目的。注射针对PD-1 的抗体，阻止了肿瘤细胞的PD-L1 与 免 疫 细胞的PD-1 的结合，也就阻止了肿瘤细胞的免疫逃逸，达到杀伤肿瘤细胞的目的。后两 种的靶标都是生长因子，通过与表皮细胞膜表面的受体或血管内皮细胞表面的受体结合， 阻止相应的生长因子与这些受体的结合，达到抑制肿瘤生长和转移的目的。
全人源化单克隆抗体：我们的终极目标是没有HAMA, 因此，只有与人的抗体序列完 全一致的全人源化抗体才是最好的。但是我们不能把抗原注射到一个人的体内，然后取出 他的脾脏，利用胰蛋白酶处理，再诱导融合，最后筛选，获得单克隆抗体。不过我们有其 他办法，目前获得全人源单克隆抗体的技术主要有噬菌体抗体库技术、核糖体展示技术、 转基因小鼠制备技术等。噬菌体抗体库技术就是将编码人抗体的基因转入丝状噬菌体中并
表达呈现在噬菌体的表面。核 糖体展示技术就是利用核糖体、 mRNA、 抗体蛋白及其他蛋白质 翻译必要成分，在非细胞体系(in vitro) 中完成翻译。转基因小鼠 制备技术是全人源化抗体生产的 主要方式，向抗体基因缺失的小 鼠中转入编码人类抗体的基因，
使其表达人的抗体。
单克隆抗体的发展如图23.7 所示。
另外，还有一种双特异性 抗体，原理很简单，它是含有两 种特异性抗原结合位点的人工抗 体，能在靶细胞和功能分子(细 胞)之间架起桥梁，激发具有导 向性的免疫反应，如图23.8所示。
知识拓展
实线表示恒定区C, 虚线表示高变区。蓝色表示鼠源 部分，红色表示人源部分，比例仅示意，不代表真实情况。
图23.7 单克隆抗体的发展
国238 双特异性拉体
是( D )
A.双抗可同时与2种抗原结合
B.利用双抗可以将蛋白类药物运送至靶细胞
1.(2022 · 山东卷，15)如图所示，将由2种不同的抗原分别制备的单克隆抗体分子，
在体外解偶联后重新偶联可制备双特异性抗体，简称双抗。下列说法错误的
C.筛选双抗时需使用制备单克隆抗体时所使用的2种抗原
D.同时注射2种抗原可刺激B 细胞分化为产双抗的浆细胞
学以致用3
抗体1 抗体2 抗体3
知识拓展——免疫偶联物(ADC)
4.单克隆抗体的应用
单克隆抗体可以作为诊断试剂，具有准确、高效、简易、快速的优点，还可以用于治
疗疾病和运载药物，如抗体药物耦联物(antibody-drug conjugates,ADC) 。ADC 又称免疫
耦联物，是通过一个接头，将单克隆抗体与小分子药物连接，形成的复合物，这种复合物 克服了单克隆抗体的靶向性强但药效较弱、小分子药物药效很强但靶向性低的缺陷，真正
实现了精准医疗。
根据所结合的小分子药物类型的不同， ADC 可以分为以下三大类。
(1)化学免疫耦联物：由单克隆抗体和治疗药物(如博安霉素、柔红霉素等)相连接。
(2)免疫毒素耦联物：由单克隆抗体和毒素蛋白(如白喉毒素等)共价耦联而成。
(3)放射性免疫耦联物：由单克隆抗体与放射性物质(如钇等)相耦联。
植物细胞杂交和动物细胞融合的比较如表23.2所示。
2.抗体—药物偶联物(ADC) 通过将细胞毒素与单克隆抗体结合，实现了对肿瘤细
胞的选择性杀伤，过程如图所示。下列表述正确的是( C )
A.ADC可通过主动运输进入肿瘤细胞 抗 体 、 ADC被细胞吞噬 ⑤
B.抗体进入细胞后激活溶酶体酶，导 头 ① ③
致细胞凋亡 释放药物 细胞凋亡
溶酶体裂解
C.单克隆抗体携带细胞毒素与肿瘤细胞特异性结合
D.肿瘤细胞凋亡是细胞主动死亡的过程，所以不会产生新的蛋白质
②
ADC
物
接
药
学以致用4
CAR-T技术将上述两个过程整合为一个。CAR 是一个跨膜蛋白，之所以称为嵌合抗
原受体，是因为它的结构来源于不同蛋白质的组合，结构上分为胞外段、跨膜区段和胞内 区 段 三 部 分 。
(1)胞外段包括两部分：一是用于引导CAR 进入内质网合成跨膜蛋白的信号肽；二是 由单克隆抗体的重链和轻链的可变区改造的单链肽，它负责与肿瘤细胞相关抗原结合。
(2)跨膜区段来源于CD28受体的跨膜区段。
(3)胞内段整合了多个T 细胞激活信号的胞内段，除了CD28的胞内段外，还有TCR 结合蛋白的Zeta 胞内段(含有三个免疫受体酪氨酸激活结构域(ITAM),一旦抗原与CAR 结合，ITAM可迅速磷酸化，传递信号)、4-1BB受体(又称为CD137受体，是肿瘤坏死因 子受体超家族的成员，介导的共刺激信号可增强T 细胞的功能)的胞内段等，这些胞内段 共同作用，提高T 细胞对靶细胞(肿瘤细胞)的杀伤。
显然，CAR-T技术成功的前提是找到肿瘤细胞表面特异性抗原。如目前最成功的 CAR-T 疗法是与B 细胞病变有关的白血病疗法，包括急性B 细胞白血病和B 细胞淋巴瘤 等，这是因为无论是正常B 细胞还是白血病或淋巴瘤B 细胞，在其细胞表面都稳定地表达 有 CD19 抗原，针对CDI9 抗原的CAR-T 技术，虽然在杀死癌变的B 细胞的同时，也杀死 了 正 常 的B 细 胞 ， 但 可 以 通 过 定 期 注 射 免 疫 球 蛋 白 的 方 式 来 弥 补 。
5.CAR-T 技 术
2021年9月， 一 则题为“‘顶级奢侈品'— — 120万 一针，2个月癌细胞‘清零’ 中国首例患者出院”的新闻在网上发布，随之而来， CAR-T 疗法也引起了人们的广泛关 注 。CAR-T 疗法，全称是chimeric antigen receptor T-cell immunotherapy, 意思是嵌合抗原 受 体 —T 细胞免疫疗法。其基本原理是在体外对患者自身的T 细胞进行改造，使它能识别 自身的癌细胞，大量培养这些改造的T 细胞，将其输回患者体内，用于特异性清除体内的 癌细胞，如图23.9所示。
众所周知， T 细胞有多种类型。例如，细胞毒性T 细 胞(cytotoxic T cell) 表 面 含 有 CD8, 能识别诸如被病原体感染的体细胞或癌细胞表面的特异性抗原并诱导这些靶细胞裂 解死亡；辅助性T 细 胞(helper T cell)表面含有CD4, 能分泌多种细胞因子，促进其他淋巴 细胞(如致敏B 细胞和细胞毒性T 细胞等)的增殖分化；调节性/抑制性T 细 胞(regulatory/ suppressor T cell)负责调节机体免疫应答强度，避免自身免疫反应和过敏反应；记忆T 细 胞 (memory T cell)参与二次免疫。
(a)T 细胞激活的 (b)CAR-T 细胞与 (c)CAR 蛋白结构示意
图23.9 CAR-T技术
正常情况下， T 细胞不能识别抗原，需要两个激活信号激活后才能识别抗原，称为双 信号系统。首先，树突状细胞等抗原呈递细胞将处理好的抗原肽以抗原—MHC 复合物的 形式呈递在细胞表面并被T 细胞表面的T 细胞受体(TCR) 结合，这是激活T 细胞的第一个 信号。其次，树突状细胞表面的B7 蛋白与T 细胞表面的CD28 受体结合，产生共刺激信号， 这是激活T 细胞的第二个信号。
[ 信 号 肽 - 跑外段连按肽段-
L 区一
间隔肽段一
CD28— 4-1BB—
Zeta —
树突状细胞
抗 原 -MHC复合物
T细胞受体←
T细胞
知识拓展——CAR-T技术
两个主要信号通路 肿瘤细胞表面抗原结合
细胞外 细胞填
细胞内
2B
→CD28
ITAM
(3)CAR-T细胞免疫疗法是指将嵌合抗原受体(CAR) 导入细胞毒性T细胞中，从而产生特异性识别肿瘤的T细胞。研究人员尝试用CAR-T 免疫
疗法治疗某种B 细胞淋巴瘤 (MCL), 从而实现靶向治疗，其中的原理是 。
细胞毒性T细胞表面的抗原受体(CAR) 与B细胞淋巴瘤(MCL) 细胞表面的抗原
特异性结合
CAR 能够特异性地识别并结合肿瘤细胞表面的特定抗原
3)嵌台抗原受体工细胞疗法(CAR.T) 的基本原理是通过基因工程技术，将患者的工淋巴细胞分离出来，并在体外进行基因改造，使其表面表
达嵌合抗原受体(CAR)。 这种CAR 能引导工细胞对肿瘤细胞进行精准攻击，原理是 。
学以致用5
(不定项) CD19是一种抗原，广泛表达于B细胞系时细胞膜上，包括属要的B细 胞。CD19 与B淋已细胞的增殖、分化、活化以及抗体的产生有关，也是诊浙B 细 胞系肿瘤的重要统志物。CARI 疗法是对B细胞系肿瘤的一种免疫疗法，其操作 是从患者血液提取T细胞并对其进行基因改造，使其表面产生能够识别CD19 的 讓嵌抗原受体(CAR), 将改造后的T 细胞大量扩增后输回患者体内可以清除瘟细 胞。下列说法正确的是( BCD
A.CD19基因突变患者存在严重的体液免疫和细胞免缺陷
B.CAR-T疗法可能会使患者出现细胞因子风暴的不良反应
C, 输回患者体内的CAR-T 细胞一般不会引发免疫排斥反应
D, 肿瘤细胞的CD19表达量减少会导致CAR-T疗法的治疗效果降低
学以致用5
(B细胞与骨髓瘤细胞)
(选杂交瘤细胞、选产生特定抗 体的杂交瘤细胞)
(骨髓瘤细胞、杂交瘤细胞、产生特 定抗体的杂交瘤细胞)
灭活病毒
一个新优势- - 特异性强、灵敏度高、大量制备
单克隆抗体
一种诱导细胞融合的新方法-—
一种新细胞- - 杂交瘤细胞
单克隆抗体制备过程的“123”
1次融合
2次筛选
3次培养
点拨提升2
三个“新”
2.治疗疾病和运载药物
如：单克隆抗体+药物=“生
物导弹”可用于治疗癌症
与生活的联系
抗人绒毛促性腺激素 单克隆抗体
1.诊断试剂
艾滋病检测试剂
乙肝测定试剂
线一定要显色，若该线显色，则表明待测样品从样品垫顺利到达吸水垫。若使用该试纸检
测时结果表明妊娠，则图中 ( 填“C”或“T” 或“C 和T”) 线显色，且发生了 种抗原 — 抗体杂交。
(2)试纸中用到的抗体一 般采用单克隆抗体技术制备，如抗鼠IgG 抗体的制备过程为：先将 注入到小鼠体内，从小鼠的 _ 中获取B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，并
筛选出杂交瘤细胞，再进行_ ,即可获得产生特定抗体的杂交瘤细胞。
【答案】(1) c C和T 3
(2) 鼠IgG 脾 克隆化培养和抗体检测
注：胶体金：可与蛋白质牢固结合， 大量聚集时肉眼可见红色
样品垫：滴加样品的位置
结合垫：含有可移动的胶体金标记的 HCG抗体1、胶体金标记的鼠IgG
T线：固定了HCG抗体2
C线：固定了抗鼠IgG抗体
(填 “C” 或 “T” 或 “C 和T”)
3. 目前市售的“早早孕试纸”是通过孕妇妊娠早期尿液检验HCG (人绒毛膜促性腺激素) 其原理如下图：
待测样品
4」
样品垫 结合垫 T线 C线吸水垫
▲ HCG
● 胶体金
YHCG 抗体1 丫 鼠IgG
丫 抗 鼠IgG抗体
HCG 抗体2
(1)若“早早孕试纸”产品质量合格，使用时
获取已免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细
胞→融合、筛选→杂交瘤细胞→动物
细胞培养→提取单克隆抗体
诊断试剂、治疗疾病
动物细胞 融合技术
单克隆抗体
细胞膜的流动性
物理法、化学法、生物法
【整体建构】
制备
应用
原理
方法
第二节动物细胞工程
动物细胞融合技术与单克隆抗体
本节主要解决的困惑
1.动物细胞融合技术
★ 2. 设计单克隆抗体制备的实验方案
比较项目 植物体细胞杂交技术
动物细胞融合技术
原理 细胞膜的流动性 植物细胞的全能性
细胞膜的流动性 细胞增殖
融合前处理 去除细胞壁
使细胞分散
诱导融合的 方法 物理(离心、振荡、电 激)化学(PEG)
物理、化学方法(
PEG)、灭活的病毒
用途 杂种植株
制备单克隆抗体
意义 突破远缘杂交不亲和的障碍，打破生殖隔离
困惑点一：动物细胞融合技术
合作探究要求：
1.请对比植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术，尝试比较两者之间的异同点
2.先独立思考，然后小组合作，派代表分享，时间2min。
技术
过程
方法
原理
应用
灭活的病毒颗粒黏附于 细胞表面
病毒表面糖蛋白和细胞 膜上的糖蛋白发生作用
蛋白质、脂质分子重排， 细胞膜打开
细胞融合，形成杂交细胞
为什么植物体细胞杂交技术不能用灭活的病毒作诱导剂
点拨提升1
1、 下列关于动物细胞融合的说法，错误的是( D )
A.细胞融合前要用酶解法将组织分散成单个细胞
B.细胞融合的原理是细胞膜的流动性
C.融合后得到的杂交细胞具有两个或多个亲本细胞的遗传信息
D.融合后得到的杂交细胞具有两个细胞核
学以致用1
2. (2018江苏单科，22,3分)如图为细胞融合的示意图，下列叙述
正确的是(不定项) ( BC)
A. 若a细胞和b细胞是植物细胞，需先去分化再诱导融合 O )a
B.a细胞和b细胞之间的融合需要促融处理后才能实现
C.c细胞的形成与a、b细胞膜的流动性都有关
D.c细胞将同时表达a细胞和b细胞中的所有基因
◎b
)c
学以致用1
1.阅读以下资料，设计制备治疗新冠的单克隆抗体实验方案，可用简单文字和 箭头表示，完成后拍照上传，小组长上传即可。
2. 请先独立思考，然后小组合作交流，派代表展示成果，时间4min。
资料：人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多
达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异 性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即 克 隆 。
骨髓瘤细胞能无限增殖。
困惑点二：设计制备单克隆抗体的方案
合作探究要求：
获得产生抗新冠 病毒抗体的B淋 巴细胞
( 一 筛):利用 选择培养基获得
杂交瘤细胞
腹腔中有易于培 养杂交瘤细胞的
条件
7 筛选杂交细胞
人
8 克隆能产生抗体
的阳性细胞
10 再克隆
1 注射小鼠阳性细胞
BB 、B瘤 、瘤瘤
杂交细胞
(二筛):获得能产生所 需专一抗体的杂交瘤细胞
单克隆抗体的制备过程
杂交瘤细胞
抗体检验 9
11 体外培养
培养骨髓瘤细胞 灭活新冠病毒
融合
B淋巴细胞
单克隆抗体 单克隆抗体
骨髓瘤细胞
免疫小鼠
单克隆抗体
未融合 B-B融 B-骨髓瘤 骨髓瘤-骨髓 未融合的骨
的 B细 胞 合细胞 融合细胞 瘤融合细胞 髓瘤细胞
用HAT选择培养基 将其他类型细胞淘汰，只保留
进行第一次筛选 B细胞与骨髓瘤细胞的融合细胞
多孔板进行第二次筛选
性质不稳定，在培养过程中会有染色 体丢失现象，直到细胞呈现稳定状态
为止。因此在建立杂交瘤细胞系过程
给小鼠注射特定抗原的目的是获得能产生相应抗体白 中要经常检查抗体效价。
骨髓瘤细胞
物理方法
化学方法
生物方法
知识拓展：HAT 培养基原理
多种B淋巴细胞
诱导原生 质体融合
从小鼠腹
水中获取
体内培养。
不同类型的B细胞与骨髓瘤 细胞融合形成的融合细胞
只保留能产生特定抗体 的杂交瘤细胞
培养液 中获取
体外培养
杂交瘤细胞是异源四倍体细胞，遗传
能产生特定抗体 的杂交瘤细胞
图23 .5 单克隆抗体
须 知
酶解分散
第一次筛选的内容如下。
① 诱导融合后，融合体系中有多种细胞：B 细 胞 -B 细胞形成的融合细胞、〈 B 细胞一骨髓瘤细胞融合的杂交瘤细胞、骨髓瘤细胞一骨髓瘤细胞形成的融合细 胞。另外，还会有更多类型的三细胞融合细胞甚至四细胞融合细胞，这些细胞大 多不稳定，很快会死掉。当然，还有未融合的B 细胞和骨髓瘤细胞。
② 我们需要的只是B 细胞一骨髓瘤细胞融合的杂交瘤细胞，此时可以通过 HAT 选择培养基进行筛选。 DNA 合成时所需的脱氧核苷酸有两种来源：从头合 成途径和补救途径。从头合成途径又称D 途 径 ，D 是 de～novo 的缩写，指的 是细胞利用甘氨酸、甲酸、谷氨酰酸、天冬氨酸等合成嘌呤以及利用谷氨酰胺、 CO 、 天冬氨酸合成嘧啶。而补救途径又称S 途径，S 是 salvage 的缩写，即细 胞利用外源的或分解代谢产生的碱基和核苷重新合成核苷一磷酸，再形成核苷二 磷酸、核苷三磷酸的过程。在设计实验的时候就考虑到了筛选的稳态，选用的骨 髓瘤细胞是一种代谢缺陷型的株系：只有D 途径，没有S 途径。
③ HAT 培养基中的H 表示次黄嘌呤，A 表示氨基蝶呤(aminopterin),T 表 示胸腺嘧啶脱氧核苷，即在正常动物细胞培养基中添加有这三种物质，其中氨基 蝶呤可以通过抑制D 途径抑制DNA 的合成，抑制细胞分裂，是常用的抑癌药物， 对应的药物称为癌得宁。而次黄嘌呤和胸腺嘧啶脱氧核苷是S 途径所需要的。
③ HAT 培养基中的H 表示次黄嘌呤， A 表示氨基蝶呤(aminopterin),T 表
示胸腺嘧啶脱氧核苷，即在正常动物细胞培养基中添加有这三种物质，其中氨基< 蝶呤可以通过抑制D 途径抑制DNA 的合成，抑制细胞分裂，是常用的抑癌药物，
对应的药物称为癌得宁。而次黄嘌呤和胸腺嘧啶脱氧核苷是S 途径所需要的。
④ 在 HAT 选择培养基上各细胞的生长情况如下。
·B 细胞、B 细胞—B 细胞融合细胞：理论上可以生长，但它们本身不能 增殖分化，因此无法生长。
·B 细胞—骨髓瘤细胞融合细胞：具有S 途径，又具有分裂能力，因此可 以分裂生长。
●骨髓瘤细胞、骨髓瘤细胞—骨髓瘤细胞融合细胞：仅有的D 途径被氨基 蝶呤抑制了，因此无法生长。
第二次筛选的内容如下。
① 小鼠在生活中还受到其他抗原的刺激，即B 细胞本身就是混杂的B 细胞， 因此，我们得到的杂交瘤细胞，有的能产生针对我们注射的特定抗原的抗体，有 的能产生针对其他抗原的抗体。我们需要进行第二次筛选，用多孔培养皿培养。
② 将第一次筛选得到的细胞培养物进行足够的稀释，稀释至7个/mL 以下。
③将稀释液分装在96孔板或384孔板(见图23.6)上，每个孔的体积为0.1mL;
图23.6 96孔板和384孔板
④ 理论上讲，每个孔中的细胞为0.7个，即每个孔要么没有细胞，要么只 有一个杂交瘤细胞。
⑤ 将这些多孔板进行培养，获得的细胞都是单个细胞的子细胞，即单克隆 培 养 。
⑥ 向生长有细胞的孔中添加最初的抗原，如果该孔中的细胞能够产生相应 的抗体，则可以观察到抗原—抗体聚集沉淀现象。
⑦ 经多次筛选得到能产生特异性抗体的细胞群。
1.细胞合成DNA 通常有2条途径：第1条途径是利用糖和氨基酸合成核苷酸，
进而合成DNA; 第2条途径是通过HGPRT 利用核苷酸的前体合成核苷酸，进
而合成DNA,HAT 培养基是基本培养基添加了次黄嘌呤(H) 、甲氨蝶呤(A)和 胸腺嘧啶核苷(T),A 可以阻断DNA合成的第1条途径，H和T则是第2条途径中 合成核苷酸的原料。HAT 培养基可以用于单克隆抗体制备杂交瘤细胞的选择， 小鼠骨髓瘤细胞是一类HGPRT 代谢缺陷型细胞。说法正确的是( )B
A.小鼠免疫B细胞和骨髓瘤细胞融合后，培养基上会有3种类型的细胞
B.HAT培养基中未融合的骨髓瘤细胞在A的阻遏下因不能合成DNA而死亡 C.HAT培养基中未融合的免疫B细胞仍具有增殖能力而持续进行细胞分裂 D.HAT培养基中选择出的杂交瘤细胞都能无限增殖和产生所需抗体
学以致用2
能正常合成DNA, 无法生长。下列叙述正确的是 ( C ) 免疫B 细胞 骨髓瘤细胞
HGPRT+ HGPRT
细胞融合
A.骨髓瘤细胞和免疫B细胞可用仙台病毒诱导融合 HAT 培养波
B. 骨髓瘤细胞在HAT筛选培养液中能正常增殖 融合的细胞 培 死亡
C. 免疫B细胞的种类不唯一，所以杂交瘤细胞仍需进一步筛选
D.筛选出的杂交瘤细胞体外培养时需添加抗生素防止真菌污染
养液中
在HAT
培养中死亡
体外长期
2. (2019 ·江苏卷)如图为杂交瘤细胞制备示意图。骨髓瘤细胞
由于缺乏次黄嘌呤磷酸核糖转移酶 (HGPRT-), 在HAT筛选培养液中不
学以致用2
3. (2021泰安期中)为了解决杂交瘤细胞在传代培养中出现来自B淋巴细胞染
色体丢失的问题，研究者在单克隆抗体的制备过程中增加了一个步骤，如下图 所示。除了抗原刺激之外，用EBV (一种病毒颗粒)感染动物B淋巴细胞，并使 之成为“染色体核型稳定”的细胞株。这样的细胞株能够在HAT培养基中存活 ,但对乌本苷 (Oua) 敏感。下列相关分析不合理的是 D )
A.杂交瘤细胞染色体丢失可能导致抗体产生能力下降
B. 杂交瘤细胞还需要经过克隆化培养和抗体检测， 经过多次筛选，才能获得所需细胞
C. 骨髓瘤细胞应该无法在HAT选择培养基中存活
D.杂交瘤细胞具有持续产生抗EBV抗体的能力
EBV转化细胞 PEG 融合
HAT培养基+Oua筛选
学以致用2
杂交
瘤细胞 骨髓瘤细胞 死亡
抗原 刺激 动物 B细胞
EBV 转化细胞 死亡
◎ EBV
骨髓瘤细胞
嵌合抗体：1984年，科学家将鼠抗体的可变区基因片段与人抗体的恒定区基因片段融
合，获得了人一鼠嵌合抗体。嵌合抗体保留了小鼠抗体的可变区，既保留了其与抗原结合 的亲和力和特异性，又降低了异源性，提高了使用的安全性。但嵌合抗体中仍存在鼠源性 成分，在人体内仍有诱发HAMA 反应的可能性，因此其不是我们的终极目标。
人源化单克隆抗体：抗体的可变区又可分为高变区和骨架区，高变区即互补决定区 compementrity detemining region,CDR),是抗体与抗原特异性结合的部位；可变区除
高变区之外的其他部位称为骨架区，主要起维持CDR 构象的作用。如果我们进一步把除
注射到病人体内后，病人体内的免疫系统产生了针对这
些抗体的抗体(抗抗体，或称为人抗鼠抗体， human
anti-mouse antibody,HAMA),迅速将这些单克隆抗体中 和掉了。
人源化单克隆抗体：抗体的可变区又可分为高变区和骨架区，高变区即互补决定区
(complementarity determining region,CDR), 是抗体与抗原特异性结合的部位;可变区除
高变区之外的其他部位称为骨架区，主要起维持CDR 构象的作用。如果我们进一步把除
CDR 之外的所有区域(包括骨架区和恒定区)都进行人源化(人源化程度最高可达97%), 就可以进一步降低HAMA 的程度，提高其使用安全性和有效性。目前已经广泛使用的人 源化单克隆抗体有pembrolizumab 、nivolumab 、trastuzumab 、bevacizumab 等。前两种的靶 标是PD-1,PD-1 在 T 细胞、NK 细胞、B 细胞、树突状细胞表面均有表达。正常细胞表面 表达有PD-L1;PD-LI 与 PD-1 特异性结合，可以抑制免疫细胞的活化，防止免疫反应过 强和自身免疫病的发生。在肿瘤细胞表面异常大量表达PD-L1, 极大降低了免疫应答强度， 实现肿瘤细胞免疫逃逸的目的。注射针对PD-1 的抗体，阻止了肿瘤细胞的PD-L1 与 免 疫 细胞的PD-1 的结合，也就阻止了肿瘤细胞的免疫逃逸，达到杀伤肿瘤细胞的目的。后两 种的靶标都是生长因子，通过与表皮细胞膜表面的受体或血管内皮细胞表面的受体结合， 阻止相应的生长因子与这些受体的结合，达到抑制肿瘤生长和转移的目的。
全人源化单克隆抗体：我们的终极目标是没有HAMA, 因此，只有与人的抗体序列完 全一致的全人源化抗体才是最好的。但是我们不能把抗原注射到一个人的体内，然后取出 他的脾脏，利用胰蛋白酶处理，再诱导融合，最后筛选，获得单克隆抗体。不过我们有其 他办法，目前获得全人源单克隆抗体的技术主要有噬菌体抗体库技术、核糖体展示技术、 转基因小鼠制备技术等。噬菌体抗体库技术就是将编码人抗体的基因转入丝状噬菌体中并
表达呈现在噬菌体的表面。核 糖体展示技术就是利用核糖体、 mRNA、 抗体蛋白及其他蛋白质 翻译必要成分，在非细胞体系(in vitro) 中完成翻译。转基因小鼠 制备技术是全人源化抗体生产的 主要方式，向抗体基因缺失的小 鼠中转入编码人类抗体的基因，
使其表达人的抗体。
单克隆抗体的发展如图23.7 所示。
另外，还有一种双特异性 抗体，原理很简单，它是含有两 种特异性抗原结合位点的人工抗 体，能在靶细胞和功能分子(细 胞)之间架起桥梁，激发具有导 向性的免疫反应，如图23.8所示。
知识拓展
实线表示恒定区C, 虚线表示高变区。蓝色表示鼠源 部分，红色表示人源部分，比例仅示意，不代表真实情况。
图23.7 单克隆抗体的发展
国238 双特异性拉体
是( D )
A.双抗可同时与2种抗原结合
B.利用双抗可以将蛋白类药物运送至靶细胞
1.(2022 · 山东卷，15)如图所示，将由2种不同的抗原分别制备的单克隆抗体分子，
在体外解偶联后重新偶联可制备双特异性抗体，简称双抗。下列说法错误的
C.筛选双抗时需使用制备单克隆抗体时所使用的2种抗原
D.同时注射2种抗原可刺激B 细胞分化为产双抗的浆细胞
学以致用3
抗体1 抗体2 抗体3
知识拓展——免疫偶联物(ADC)
4.单克隆抗体的应用
单克隆抗体可以作为诊断试剂，具有准确、高效、简易、快速的优点，还可以用于治
疗疾病和运载药物，如抗体药物耦联物(antibody-drug conjugates,ADC) 。ADC 又称免疫
耦联物，是通过一个接头，将单克隆抗体与小分子药物连接，形成的复合物，这种复合物 克服了单克隆抗体的靶向性强但药效较弱、小分子药物药效很强但靶向性低的缺陷，真正
实现了精准医疗。
根据所结合的小分子药物类型的不同， ADC 可以分为以下三大类。
(1)化学免疫耦联物：由单克隆抗体和治疗药物(如博安霉素、柔红霉素等)相连接。
(2)免疫毒素耦联物：由单克隆抗体和毒素蛋白(如白喉毒素等)共价耦联而成。
(3)放射性免疫耦联物：由单克隆抗体与放射性物质(如钇等)相耦联。
植物细胞杂交和动物细胞融合的比较如表23.2所示。
2.抗体—药物偶联物(ADC) 通过将细胞毒素与单克隆抗体结合，实现了对肿瘤细
胞的选择性杀伤，过程如图所示。下列表述正确的是( C )
A.ADC可通过主动运输进入肿瘤细胞 抗 体 、 ADC被细胞吞噬 ⑤
B.抗体进入细胞后激活溶酶体酶，导 头 ① ③
致细胞凋亡 释放药物 细胞凋亡
溶酶体裂解
C.单克隆抗体携带细胞毒素与肿瘤细胞特异性结合
D.肿瘤细胞凋亡是细胞主动死亡的过程，所以不会产生新的蛋白质
②
ADC
物
接
药
学以致用4
CAR-T技术将上述两个过程整合为一个。CAR 是一个跨膜蛋白，之所以称为嵌合抗
原受体，是因为它的结构来源于不同蛋白质的组合，结构上分为胞外段、跨膜区段和胞内 区 段 三 部 分 。
(1)胞外段包括两部分：一是用于引导CAR 进入内质网合成跨膜蛋白的信号肽；二是 由单克隆抗体的重链和轻链的可变区改造的单链肽，它负责与肿瘤细胞相关抗原结合。
(2)跨膜区段来源于CD28受体的跨膜区段。
(3)胞内段整合了多个T 细胞激活信号的胞内段，除了CD28的胞内段外，还有TCR 结合蛋白的Zeta 胞内段(含有三个免疫受体酪氨酸激活结构域(ITAM),一旦抗原与CAR 结合，ITAM可迅速磷酸化，传递信号)、4-1BB受体(又称为CD137受体，是肿瘤坏死因 子受体超家族的成员，介导的共刺激信号可增强T 细胞的功能)的胞内段等，这些胞内段 共同作用，提高T 细胞对靶细胞(肿瘤细胞)的杀伤。
显然，CAR-T技术成功的前提是找到肿瘤细胞表面特异性抗原。如目前最成功的 CAR-T 疗法是与B 细胞病变有关的白血病疗法，包括急性B 细胞白血病和B 细胞淋巴瘤 等，这是因为无论是正常B 细胞还是白血病或淋巴瘤B 细胞，在其细胞表面都稳定地表达 有 CD19 抗原，针对CDI9 抗原的CAR-T 技术，虽然在杀死癌变的B 细胞的同时，也杀死 了 正 常 的B 细 胞 ， 但 可 以 通 过 定 期 注 射 免 疫 球 蛋 白 的 方 式 来 弥 补 。
5.CAR-T 技 术
2021年9月， 一 则题为“‘顶级奢侈品'— — 120万 一针，2个月癌细胞‘清零’ 中国首例患者出院”的新闻在网上发布，随之而来， CAR-T 疗法也引起了人们的广泛关 注 。CAR-T 疗法，全称是chimeric antigen receptor T-cell immunotherapy, 意思是嵌合抗原 受 体 —T 细胞免疫疗法。其基本原理是在体外对患者自身的T 细胞进行改造，使它能识别 自身的癌细胞，大量培养这些改造的T 细胞，将其输回患者体内，用于特异性清除体内的 癌细胞，如图23.9所示。
众所周知， T 细胞有多种类型。例如，细胞毒性T 细 胞(cytotoxic T cell) 表 面 含 有 CD8, 能识别诸如被病原体感染的体细胞或癌细胞表面的特异性抗原并诱导这些靶细胞裂 解死亡；辅助性T 细 胞(helper T cell)表面含有CD4, 能分泌多种细胞因子，促进其他淋巴 细胞(如致敏B 细胞和细胞毒性T 细胞等)的增殖分化；调节性/抑制性T 细 胞(regulatory/ suppressor T cell)负责调节机体免疫应答强度，避免自身免疫反应和过敏反应；记忆T 细 胞 (memory T cell)参与二次免疫。
(a)T 细胞激活的 (b)CAR-T 细胞与 (c)CAR 蛋白结构示意
图23.9 CAR-T技术
正常情况下， T 细胞不能识别抗原，需要两个激活信号激活后才能识别抗原，称为双 信号系统。首先，树突状细胞等抗原呈递细胞将处理好的抗原肽以抗原—MHC 复合物的 形式呈递在细胞表面并被T 细胞表面的T 细胞受体(TCR) 结合，这是激活T 细胞的第一个 信号。其次，树突状细胞表面的B7 蛋白与T 细胞表面的CD28 受体结合，产生共刺激信号， 这是激活T 细胞的第二个信号。
[ 信 号 肽 - 跑外段连按肽段-
L 区一
间隔肽段一
CD28— 4-1BB—
Zeta —
树突状细胞
抗 原 -MHC复合物
T细胞受体←
T细胞
知识拓展——CAR-T技术
两个主要信号通路 肿瘤细胞表面抗原结合
细胞外 细胞填
细胞内
2B
→CD28
ITAM
(3)CAR-T细胞免疫疗法是指将嵌合抗原受体(CAR) 导入细胞毒性T细胞中，从而产生特异性识别肿瘤的T细胞。研究人员尝试用CAR-T 免疫
疗法治疗某种B 细胞淋巴瘤 (MCL), 从而实现靶向治疗，其中的原理是 。
细胞毒性T细胞表面的抗原受体(CAR) 与B细胞淋巴瘤(MCL) 细胞表面的抗原
特异性结合
CAR 能够特异性地识别并结合肿瘤细胞表面的特定抗原
3)嵌台抗原受体工细胞疗法(CAR.T) 的基本原理是通过基因工程技术，将患者的工淋巴细胞分离出来，并在体外进行基因改造，使其表面表
达嵌合抗原受体(CAR)。 这种CAR 能引导工细胞对肿瘤细胞进行精准攻击，原理是 。
学以致用5
(不定项) CD19是一种抗原，广泛表达于B细胞系时细胞膜上，包括属要的B细 胞。CD19 与B淋已细胞的增殖、分化、活化以及抗体的产生有关，也是诊浙B 细 胞系肿瘤的重要统志物。CARI 疗法是对B细胞系肿瘤的一种免疫疗法，其操作 是从患者血液提取T细胞并对其进行基因改造，使其表面产生能够识别CD19 的 讓嵌抗原受体(CAR), 将改造后的T 细胞大量扩增后输回患者体内可以清除瘟细 胞。下列说法正确的是( BCD
A.CD19基因突变患者存在严重的体液免疫和细胞免缺陷
B.CAR-T疗法可能会使患者出现细胞因子风暴的不良反应
C, 输回患者体内的CAR-T 细胞一般不会引发免疫排斥反应
D, 肿瘤细胞的CD19表达量减少会导致CAR-T疗法的治疗效果降低
学以致用5
(B细胞与骨髓瘤细胞)
(选杂交瘤细胞、选产生特定抗 体的杂交瘤细胞)
(骨髓瘤细胞、杂交瘤细胞、产生特 定抗体的杂交瘤细胞)
灭活病毒
一个新优势- - 特异性强、灵敏度高、大量制备
单克隆抗体
一种诱导细胞融合的新方法-—
一种新细胞- - 杂交瘤细胞
单克隆抗体制备过程的“123”
1次融合
2次筛选
3次培养
点拨提升2
三个“新”
2.治疗疾病和运载药物
如：单克隆抗体+药物=“生
物导弹”可用于治疗癌症
与生活的联系
抗人绒毛促性腺激素 单克隆抗体
1.诊断试剂
艾滋病检测试剂
乙肝测定试剂
线一定要显色，若该线显色，则表明待测样品从样品垫顺利到达吸水垫。若使用该试纸检
测时结果表明妊娠，则图中 ( 填“C”或“T” 或“C 和T”) 线显色，且发生了 种抗原 — 抗体杂交。
(2)试纸中用到的抗体一 般采用单克隆抗体技术制备，如抗鼠IgG 抗体的制备过程为：先将 注入到小鼠体内，从小鼠的 _ 中获取B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，并
筛选出杂交瘤细胞，再进行_ ,即可获得产生特定抗体的杂交瘤细胞。
【答案】(1) c C和T 3
(2) 鼠IgG 脾 克隆化培养和抗体检测
注：胶体金：可与蛋白质牢固结合， 大量聚集时肉眼可见红色
样品垫：滴加样品的位置
结合垫：含有可移动的胶体金标记的 HCG抗体1、胶体金标记的鼠IgG
T线：固定了HCG抗体2
C线：固定了抗鼠IgG抗体
(填 “C” 或 “T” 或 “C 和T”)
3. 目前市售的“早早孕试纸”是通过孕妇妊娠早期尿液检验HCG (人绒毛膜促性腺激素) 其原理如下图：
待测样品
4」
样品垫 结合垫 T线 C线吸水垫
▲ HCG
● 胶体金
YHCG 抗体1 丫 鼠IgG
丫 抗 鼠IgG抗体
HCG 抗体2
(1)若“早早孕试纸”产品质量合格，使用时
获取已免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细
胞→融合、筛选→杂交瘤细胞→动物
细胞培养→提取单克隆抗体
诊断试剂、治疗疾病
动物细胞 融合技术
单克隆抗体
细胞膜的流动性
物理法、化学法、生物法
【整体建构】
制备
应用
原理
方法