高中人教版生物选必3同步作业-第3章第2节 基因工程的基本操作程序（有解析）

选择性必修三第3章
第2节 基因工程的基本操作程序
一、单选题
1．基因工程的核心步骤是（ ）
A．获取目的基因
B．构建重组DNA分子
C．将重组DNA分子导入受体细胞
D．检测目的基因及其表达产物
2．下列关于PCR技术的叙述，正确的是（ ）
A．以脱氧核糖核苷酸为原料，以指数形式扩增
B．变性过程中破坏的是磷酸二酯键
C．该技术需要解旋酶和耐高温的DNA聚合酶
D．利用PCR技术扩增DNA时，设置的温度要逐步提高
3．索马甜是从非洲竹芋中提取的一种天然甜味蛋白，具有甜度高、能量低等优点。科研工作者利用基因工程技术，让索马甜基因在微生物、真菌和植物细胞中表达，取得了一定进展。下列叙述错误的是（ ）
A．欲在体外大量扩增索马甜基因可采用PCR技术
B．获取索马甜基因后需要构建基因表达载体这一步骤
C．启动子位于索马甜基因的上游，是RNA聚合酶识别和结合的部位
D．可通过核酸分子杂交的方法判断导入的索马甜基因是否成功表达
4．用限制酶Spe Ⅰ和Hind Ⅲ切割质粒，用限制酶Hind Ⅲ和Xba Ⅰ切割目的基因，之后连接，构建基因表达载体。下列叙述不正确的是（　　）
A．青霉素抗性基因可作为筛选标记
B．限制酶可使磷酸二酯键发生断裂
C．表中限制酶切割之后均会产生黏性末端
D．连接后的基因表达载体可被Spe I切开
5．绿叶海蜗牛是一种软体动物，它可以通过进食藻类并吸收其叶绿体化为己用。在绿叶海蜗牛的染色体中，还包含了一些特殊的藻类所特有的核基因，它们的功能是修复和保持叶绿体持续发挥作用，使余生无需进食。下列叙述错误的是（ ）
A．两种生物之间的关系是互利共生，且都以DNA作为遗传物质
B．绿叶海蜗牛不论是在光照条件还是黑暗条件都可以合成ATP
C．叶绿体要发挥正常功能需要细胞核和叶绿体共同编码蛋白质
D．采用PCR手段可以从海蜗牛的核DNA中克隆出藻类的核基因
6．SOD是一种广泛分布于各种细胞中的抗氧化酶，它能催化超氧阴离子自由基形成H2O2，增强植物的抗逆性。如图为培养能够产生SOD农作物新品种的一种方式，有关叙述错误的是（ ）
A．①过程中可以选择培养基筛选出含SOD基因的新细胞
B．②过程表示脱分化，通常需要避光培养
C．③过程所用培养基中激素的种类和含量与②中一致
D．该育种方式利用了细胞工程和基因工程相关技术，能体现细胞的全能性
7．不对称PCR是一种常见的单链DNA探针制备方法，其原理是反应体系中加入一对数量不相等的引物，数量较少的为限制性引物，数量较多的为非限制性引物。假设体系中模板DNA数量为a，在PCR反应的早期10个循环中，扩增产物是双链DNA，限制性引物耗尽，非限制性引物继续引导合成大量目标DNA单链。下列说法正确的是（ ）
A．若B链为所需的DNA探针，则非限制性引物应选用引物Ⅳ
B．两种引物与模板链结合时，需将温度控制在72℃左右
C．如果总共进行25次循环，最终获得的单链探针数为15×210a
D．因为双链DNA和单链DNA的长度相同，不能通过电泳方法将其分离
8．植物体表蜡质对耐干旱有重要作用，研究人员通过诱变获得一个大麦突变体Cer1（纯合体）。初步研究表明，突变表型是因为染色体上的C基因突变为c。在C基因两侧设计引物，PCR扩增，电泳检测PCR产物。如图泳道1和2分别是突变体Cer1与野生型（WT，纯合体）。将突变体Cerl与纯合野生型杂交。F1全为野生型，F1与突变体Cerl杂交，获得若干个后代F2，利用上述引物PCR扩增这些后代的基因组DNA，电泳检测PCR产物。下列叙述正确的是（ ）
A．突变体是C基因内部发生碱基对替换突变为c基因
B．设计引物时应尽可能让2个引物之间有较多的互补序列
C．F2中个体的DNA扩增后可得到泳道1和泳道3的带型
D．电泳后可加入溴酚蓝染色以便于观察电泳条带位置
9．嵌合抗原受体T细胞免疫疗法 (CAR-T疗法) 是一种治疗肿瘤的新型精准靶向疗法，基本原理是通过定向改造CAR基因，并导入患者自身的T细胞中构建CAR-T细胞。经体外扩增后的CAR-T细胞回输到患者体内后可识别特定肿瘤细胞并将其裂解，同时保留对该类癌细胞的记忆，主要过程如图所示。下列叙述正确的是（ ）
A．CAR-T细胞是将改造后的CAR 基因导入到辅助性T细胞中得到的重组细胞
B．可通过PCR 技术检测改造后的CAR 基因是否表达出 CAR 蛋白
C．CAR-T细胞裂解癌细胞的过程体现了免疫监视的功能
D．CAR 蛋白的胞内信号区可特异性识别癌细胞的表面抗原
10．研究人员利用农杆菌介导法和花粉管通道法培育出转抗寒基因PgLCBF1的月季石榴，主要过程示意图如图。下列说法正确的是（ ）
A．用限制酶XbaI分别切割质粒和抗寒基因产生平末端，便于目的基因插入到质粒
B．过程②筛选时，使用的液体培养基需加入新霉素、碳源、氮源和水等物质
C．实验中过程③主要目的是使转基因大肠杆菌快速增殖，获得更多的重组质粒
D．花粉管通道转化法不需要经过植物组织培养，并且获得的种子一定为转基因种子
二、多选题
11．蜘蛛丝（丝蛋白）被称为“生物钢”，有着超强的抗张强度。下图为蛛丝蛋白基因对应的DNA片段结构示意图，其中1~4表示DNA上引物可能结合的位置，下列叙述正确的是（ ）
A．若受体细胞为大肠杆菌，则蛛丝蛋白需要进一步加工才具有相应的功能
B．若从该DNA片段中直接获取蛛丝蛋白基因，会破坏2个磷酸二酯键
C．若用PCR技术获取目的基因，则图中的2、3分别是2种引物结合的位置
D．选择图中适宜引物进行PCR扩增，经过5次循环可获得32个等长的蛛丝蛋白基因
12．紫色西红柿经基因编辑后可产生比普通西红柿多9倍的花青素（紫色）。紫色花青素能降低人类患心脏病、糖尿病的风险。如图是花青素基因（S）的cDNA（某种生物发育某个时期的mRNA经逆转录产生的互补DNA）和Ti质粒图。下列叙述错误的是（ ）
A．由图可知，最好选用XbaⅠ、HindⅢ切割S基因的cDNA和Ti质粒
B．用农杆菌侵染时，常使用一些抗生素，其目的之一是筛选转化细胞
C．用于扩增S基因的引物需满足的条件是两种引物分别与两条模板链端的碱基序列互补配对
D．若检测出标记基因所表达的性状，则说明重组质粒已经成功导入西红柿细胞
三、非选择题
13．赖氨酸是人体细胞不能合成的必需氨基酸。科学家把某种必需氨基酸含量多的蛋白质编码基因（R）导入玉米中，使玉米中赖氨酸的含量提高30%。回答下列问题。
(1)利用PCR技术扩增R基因时，需要在一定的缓冲液中才能进行，其中需要加入 酶。为了特异性扩增R基因序列，需根据 设计特异性引物。
(2)在构建基因表达载体时，若为了避免R基因和质粒的自连或反向连接，提高重组效率，应该选择的限制酶是 。
(3)随着转化方法的突破，农杆菌侵染玉米这种单子叶植物也取得了成功。科研人员从新鲜的玉米叶片上取下的圆形小片与农杆菌共培养，当农杆菌侵染玉米细胞后，能将 上的T-DNA转移到被侵染的细胞，并且将其整合到 。
(4)检测R基因是否表达的方法是 。
(5)在基因工程中若要培养转基因小鼠，将基因表达载体导入受体细胞常用的方法是 ，常用的受体细胞是 。
14．人乳铁蛋白是一种重要的药用保健蛋白下图表示利用乳腺生物反应器生产人乳铁蛋白的部分过程，图中Tetr表示四环素抗性基因，Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，五种限制酶的识别序列及切割位点如表所示。回答下列问题：
限制酶 BamHⅠ BaeⅢ BclⅠ Sau3AⅠ NotⅠ
识别序列 及切割位点
（1）一个基因表达载体的组成必须有启动子、终止子、 等。若选用牛作为转基因动物可将人乳铁蛋白基因与 的启动子等调控组件重组在一起，可通过 方法将基因表达载体导入受精卵中，然后使其发育成转基因动物。
（2）据图分析，筛选含有重组质粒的受体细胞首先需要在含 （填“四环素”“氨苄青霉素”或“四环素或氨苄青霉素”）的培养基上进行，原因是 。
（3）要将人乳铁蛋白基因插入质粒，若只允许使用一种限制酶，应选择的限制酶是 ，若BamHⅠ酶切的DNA末端与BclⅠ酶切的DNA末端连接起来，连接部位的6个碱基对序列为 ，对于该部位，这两种酶 （填“都不能”或“只有一种能”）切开。若要检测转基因动物DNA上是否插入了目的基因，检测方法是采用DNA分子杂交技术，即用 标记的 作探针，如果显示出杂交带，则表明目的基因已插入染色体DNA中。
（4）利用转基因大肠杆菌（工程菌）不能生产有活性的人乳铁蛋白，这是因为 。
15．瘦素是一种由脂肪组织分泌的肽类激素，参与脂肪代谢的调节。科研人员在P 载体上插入了绿色荧光蛋白（GFP）基因，并进一步构建瘦素基因真核表达载体，检测瘦素基因在小鼠成纤维细胞中的表达情况，为肥胖患者的治疗提供新思路。瘦素基因及P载体的结构如下图所示，在P 载体上瘦素基因与GFP基因共用启动子和终止子，GFP基因能在真核细胞中表达，且能根据荧光的强弱来判断瘦素基因在细胞内的表达强度。HindⅢ、BamHI、XhoI表示3种限制酶且切割DNA 产生的黏性末端不同。据此回答下列问题：
运用PCR 技术扩增瘦素基因时，需要的原料是 。若瘦素基因两端没有合适的限制酶酶切位点，为使瘦素基因能正确插入P载体中，应在图中引物1和2的 （填“3'”或“5'”）端分别添加 （填“HindⅢ”或“BamHⅠ”或“XhoⅠ”）的识别序列。
(2)启动子可以被 酶识别和结合，从而启动转录。结合上图分析，瘦素基因真核表达载体进行表达时, 先合成 （填“瘦素“或“GFP”）。
(3)Kanr/NeOr是一种抗性基因，在真核细胞中的表达具有新霉素抗性，而在原核细胞中的表达则具有卡那霉素抗性。同种基因在真核、原核细胞中表达结果不同，可能的原因是
（答一点即可）。
(4)为检测瘦素基因是否在受体细胞中成功表达出瘦素，除了根据荧光的强度来进行判断之外，还可用的鉴定方法是 （从分子水平作答）。
一、单选题
1．【答案】B【解析】构建基因表达载体也就是构建重组DNA分子，获取了足够量的目的基因后，就要让基因在受体细胞中稳定存在，并且遗传给下一代；同时，使目的基因能够表达和发挥作用，这就需要构建基因表达载体，所以这一步是培育转基因抗虫棉的核心工作，B正确。
2．【答案】A【解析】A、PCR是一项体外扩增DNA分子的技术，该过程中以脱氧核糖核苷酸为原料，以指数形式扩增，A正确；
B、变性过程中破坏的是氢键，使DNA分子解旋， B错误；
C、该技术不需要解旋酶，DNA分子解旋时通过高温实现的，C错误；
D、PCR过程分三步，第一步变性，升高温度至90℃左右，将DNA双链解聚为单链；第二步复性，降低温度至50℃左右，引物通过碱基互补配对结合在模板链上；第三步延伸，升高温度至72℃左右，通过耐高温的DNA聚合酶，将脱氧核苷酸通过碱基互补配对延伸形成子链DNA，D错误。
3．【答案】D【解析】A、PCR技术可在体外进行目的基因的大量扩增，A正确；
B、基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤，B正确；
C、启动子位于索马甜基因的上游，是RNA聚合酶识别和结合的部位，RNA与启动子结合后启动转录，C正确；
D、通过抗原-抗体杂交技术检查基因是否表达成功，D错误。
4．【答案】D【解析】A、青霉素抗性基因是质粒中的标记基因，表达产物能抵抗青霉素，故青霉素抗性基因可作为筛选标记，A正确；
B、限制酶能够识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开，B正确；
C、由表格可知，这3种限制酶都是在它识别序列的中心轴线两侧将DNA分子的两条链分别切开，产生黏性末端，C正确；
D、题干中用限制酶Spe Ⅰ切割质粒产生的黏性末端和用限制酶Xba Ⅰ切割目的基因产生的黏性末端遵循碱基互补配对，在DNA连接酶的作用下拼接起来，拼接起来的部分碱基序列为ACTAGA，而限制酶Spe Ⅰ识别的碱基序列为ACTAGT，所以连接后的基因表达载体不能被Spe I切开，D错误。
5．【答案】A【解析】A、绿叶海蜗进食藻类并吸收其叶绿体化为己用，两种生物属于捕食关系，不属于互利共生关系，A错误；
B、绿叶海蜗牛在光照条件可以进行光合作用和呼吸作用，黑暗条件可以进行呼吸作用，都可以合成ATP，B正确；
C、由题干信息“在绿叶海蜗牛的染色体中，还包含了一些特殊的藻类所特有的核基因，它们的功能是修复和保持叶绿体持续发挥作用”可知叶绿体要发挥正常功能需要细胞核和叶绿体共同编码蛋白质，C正确；
D、绿叶海蜗牛的染色体中含有藻类所特有的核基因，因此采用PCR手段可以从海蜗牛的核DNA中克隆出藻类的核基因，D正确。
6．【答案】C【解析】A、在基因工程中将目的基因导入受体细胞后，可以通过相应的选择培养基或其他方式进行初步的筛选出含SOD基因的新细胞， A正确；
B、②过程形成愈伤组织，因此表示脱分化，脱分化需要避光培养，B正确；
C、③过程是再分化，所用激素的比例与脱分化时所用的比例不一样，C错误；
D、该过程既有细胞工程也有基因工程， 最后培养得到的是完整植株，能体现细胞的全能性，D正确。
7．【答案】C【解析】A、由于DNA聚合酶只能从3'端延伸DNA链，引物Ⅱ和Ⅲ不能作为扩增探针序列的引物，据题干信息“数量较多的非限制性引物将引导合成大量目标DNA 单链”可知，若B链为所需的DNA分子探针，即目标DNA单链，则则非限制性引物应选用引物Ⅰ，A错误；
B、两种引物与模板链结合即复性过程，该过程中温度下降到50℃左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合，B错误；
C、如果体系中原模板DNA的数量为a，最初10次循环产物为双链DNA分子为210×a个，其中有B链为210×a个，以这些链为模板，利用引物又进行了15次循环，每次循环生成的都是A链，不改变B链的数目，即B每次循环开始都是210×a个，15次循环每次生成A也是210×a个，故最终获得的单链探针数共为15×210×a个，C正确；
D、单链DNA和双链DNA的分子量不同，电泳可以将其分离，D错误。
8．【答案】C【解析】A、由图可见，突变体电泳结果DNA长度为1100bp，比野生型1960bp短，由此推测突变体是C基因内部发生碱基对缺失突变为c基因，A错误；
B、若2个引物之间有较多的互补序列，则引物会相互结合，从而影响引物与模板DNA结合，B错误；
C、将突变体Cer1与纯合野生型杂交，F1全为野生型，说明野生型为显性，用C/c基因表示，则F1基因型为Cc，电泳结果为泳道3，F1与突变体Cerl杂交，获得若干个后代F2，F2基因型为Cc：cc=1：1，故F2中个体的DNA扩增后可得到泳道1和泳道3中的带型，C正确；
D、电泳后可加入亚甲基蓝染色以便于观察电泳条带位置，D错误。
9．【答案】C【解析】A、改造CAR基因导入导入患者自身的T细胞中构建的CAR-T细胞回输到患者体内后可识别特定肿瘤细胞并将其裂解，具有裂解作用的T细胞是细胞毒性T细胞，A错误；
B、检测CAR 基因是否表达出 CAR 蛋白应使用抗原—抗体杂交法，B错误；
C、免疫监视是指机体识别和清除突变的细胞，防止肿瘤发生的功能，CAR-T细胞裂解癌细胞体现了免疫监视功能，C正确；
D、由图可知，CAR-T细胞识别癌细胞表面的抗原是经过细胞直接接触识别，因此CAR 蛋白中识别癌细胞表面抗原的应试胞外结合区，D错误。
10．【答案】C【解析】A、图示限制酶XbaⅠ切点不在识别序列的中心轴线处，故用限制酶XbaⅠ分别切割质粒和抗寒基因产生黏性末端，A错误
B、图示过程②筛选时出现了菌落，使用的是固体培养基，B错误；
C、图示实验中过程③需要接种、摇床培养，可判断该步骤使用液体培养基培养，主要目的是使转基因大肠杆菌快速增殖，获得更多的重组质粒，C正确；
D、花粉管通道转化法不需要经过植物组织培养，但是此方法并不一定将目的基因导入受体细胞，有失败的可能，故获得的种子不一定为转基因种子，D错误。
二、多选题
11．【答案】AC【解析】A、若受体细胞为大肠杆菌，大肠杆菌为原核生物，没有高尔基体和内质网，蛛丝蛋白需要进一步加工才具有相应的功能，A正确；
B、若从该DNA片段中直接获取蛛丝蛋白基因，DNA每条链上会破坏2个磷酸二酯键，共会破坏4个磷酸二酯键，B正确；
C、由于DNA聚合酶只能从5'→3'延伸子链，图中的磷酸基团为5'端，羟基为3'端，由于引物要延伸子链，子链和模板链反向平行，因此根据引物的延伸方向可知图中与引物结合的部位是2、3，C正确；
D、如图所示，
设X基因为目的基因。经过第一轮复制以亲代DNA的两条链做模板，可以得到①和②两种DNA；经过第二轮复制可以得到①和③、②和④；经过第三轮复制可以得到①和③、③和⑤、②和④、④和⑤；第四轮复制得到16个DNA分子，即①和③、2个③和2个⑤、②和④、2个④和2个⑤、第二轮的2个⑤得到4个⑤（统计为①、②、3个③、3个④、8个⑤）；第五轮复制得到32个DNA分子，即①和③、②和④、3个③和3个⑤、3个④和3个⑤、第四轮的8个⑤得16个⑤（统计为①、②、4个③、4个④、22个⑤，即还未获得32个目的基因），第六轮复制得64个DNA分子，即①和③、②和④、4个③和4个⑤、4个④和4个⑤、第五轮的22个⑤得44个⑤（统计为①、②、5个③、5个④、52个⑤，即此时获得32个以上符合条件的目的基因），综上所述，需要至少6次循环可获得32个符合要求的目的基因，D错误。
12．【答案】CD【解析】A、由图可知，最好选用 Xba Ⅰ、 Hind Ⅲ切割 S 基因的 cDNA 和 Ti 质粒，既能保证目的基因与载体产生相同的黏性末端，又不破坏目的基因，A正确；
B、在用农杆菌侵染的方法进行植物转基因过程中，既要让农杆菌的Ti质粒上的T-DNA 整合到植物细胞的染色体中，又要避免农杆菌的大量繁殖，因此培养基中通常加入抗生素，既能抑制农杆菌生长，又能根据标记基因筛选转化细胞，B正确；
C、用于扩增 S 基因的引物需满足的条件是两种引物分别与两条模板链 3′端的碱基序列互补配对，以保证子链从 5′端向 3′端延伸，C错误；
D、若检测出目的基因所表达的性状，则说明重组质粒已经成功导入西红柿细胞，D错误。
三、非选择题
13．【答案】(1)耐高温的DNA聚合酶 R基因两端的碱基（核苷酸）序列（R基因的已知序列）
(2)PstI、EcoRI
(3)Ti质粒 该细胞的染色体DNA上
(4)抗原—抗体杂交
(5)显微注射法 受精卵
【解析】（1）利用PCR技术扩增R基因时，进行的是DNA复制过程，因为过程中涉及到高温环境，因此需要加入耐高温的DNA聚合酶。扩增前，需要根据R基因两端的碱基（核苷酸）序列设计特异性引物，这样能够利用模板链特异性扩增出R基因片段。
（2）在构建基因表达载体时，若为了避免R基因和质粒的自连或反向连接，需要使用两种不同的限制酶形成两个不同的末端，HindIII会破坏抗四环素基因（抗性基因），因此应该选取PstI、EcoRI。
（3）农杆菌侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T-DNA转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。
（4）R基因正常表达将会产生对应的蛋白质，可用抗原—抗体杂交技术检测该蛋白质的产生。
（5）转基因动物中最常采用将目的基因导入受体细胞的技术是显微注射技术，常用的受体细胞是受精卵。
14．【答案】标记基因和目的基因 牛乳腺蛋白基因 显微注射 氨苄青霉素 用限制酶切割后破坏了Tetr基因，但不会破坏Ampr基因，导入重组质粒的受体细胞（对氨苄青霉素具有抗性），能在含氨苄青霉素的培养基上生存下来 Sau3AⅠ 或 都不能 放射性同位素（或荧光物质等） 人乳铁蛋白基因（目的基因） 大肠杆菌为原核生物，无内质网和高尔基体，不具备加工人乳铁蛋白的能力
【解析】（1）一个基因表达载体的组成必须有启动子、终止子、标记基因和目的基因。若用牛作为转基因动物生产人乳铁蛋白，可以用人的乳铁蛋白基因替换牛的乳铁蛋白基因，所以可以将人乳铁蛋白基因与牛乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，可通过显微注射方法将基因表达载体导入受精卵中，然后使其发育成转基因动物。
（2）据图分析，构建重组质粒的过程中用限制酶切割后破坏了Tetr基因，但不会破坏Ampr基因， Ampr基因可以作为重组质粒的标记基因，导入重组质粒的受体细胞（对氨苄青霉素具有抗性），能在含氨苄青霉素的培养基上生存下来，所以，筛选含有重组质粒的受体细胞需要在含氨苄青霉素的培养基上进行，能生存下来的说明其具有标记基因。
（3）根据表中五种酶的识别序列及切割位点可知，限制酶Sau3A I还可以切割限制酶BclⅠ和限制酶BamHI的识别序列，因此若只允许使用一种限制酶将人乳铁蛋白基因插入质粒，应选择的限制酶是Sau3AⅠ，若BamHⅠ酶切的DNA末端与BclⅠ酶切的DNA末端连接起来，连接部位的6个碱基对序列为或，对于该部位，这两种酶都不能切开。若要检测转基因动物DNA上是否插入了目的基因，检测方法是采用DNA分子杂交技术，即用放射性同位素或荧光物质等标记的人乳铁蛋白基因（目的基因）作探针，如果显示出杂交带，则表明目的基因已插入染色体DNA中。
（4）人乳铁蛋白是真核细胞产生的蛋白质，由于大肠杆菌为原核生物，无内质网和高尔基体，不具备加工人乳铁蛋白的能力，所以利用转基因大肠杆菌（工程菌）不能生产有活性的人乳铁蛋白。
15．【答案】(1)脱氧核苷三磷酸/脱氧核苷酸 5' HindⅢ、BamHI
(2)RNA聚合酶 瘦素
(3)存在不同的启动子或转录后的加工不同或翻译后的加工不同
(4)抗原抗体杂交
【解析】（1）PCR 技术扩增基因，其原理是DNA复制，故需要的原料是脱氧核苷三磷酸；PCR扩增时，子代链延伸方向是5'→3'，故若添加限制酶识别序列，需加在引物的5'端；据题干信息“在P 载体上瘦素基因与GFP基因共用启动子和终止子，GFP基因能在真核细胞中表达”可知，结合图示P载体上的酶切位点及瘦素基因与P载体的转录方向，应在引物1的5'端添加HindⅢ限制酶识别序列，在引物2的5'端添加BamHI限制酶识别序列。
（2）RNA聚合酶可以特异性的识别并结合启动子序列，起始转录；结合上图分析，瘦素基因真核表达载体进行表达时， 先合成瘦素，再合成GFP。
（3）Kanr/NeOr抗性基因在真核与原核细胞中可能有不同的启动子或转录后的加工不同或翻译后的加工不同，使得同种基因在真核、原核细胞中表达结果不同。
（4）为检测瘦素基因是否在受体细胞中成功表达出瘦素，除了根据荧光的强度来进行判断之外，还可用抗原抗体杂交的方法来鉴定，即用瘦素的单抗来检测是否存在瘦素。