浙科版（2019）选择性必修三 1.2 纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得 课件(共17张PPT)

(共17张PPT)
思考
一滴液体中有很多微生物
1.人们在研究或利用微生物时需要使用纯种，为什么？
2.如何获得纯的某种微生物？
分散开
纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得
选择性必修3 第一章 发酵工程 第二节
单菌落→纯种微生物
由一个细胞分裂形成的、肉眼可见的、有一定形态构造的子细胞集团
形状、大小、颜色、边缘或表面是否光滑等
平板划线法
稀释涂布平板法
采用划线的接种方法能够实现对目标微生物的分离和纯化
接种是指微生物进入培养基质的过程。
自然接种
人为接种
平板划线法
基本工具：接种环
工具灭菌：火焰灼烧灭菌
划线方法
连续平行划线
扇形划线
多次连续平行划线
划线方法及结果
多次连续平行划线（分区划线）
特别注意：
下一次划线必须接触到上一次划线末端区域
每一次划线前后均要灼烧接种环
仅取样一次
最后划线结束为什么还需要灼烧？
不污染其他物品；确保安全
评价
这是哪种分离方法？分离效果如何？
出现这种情况的可能原因是？
接种环灼烧灭菌后贴在培养容器内壁上降温
如何避免以上问题？
采用涂布的接种方法能够实现对目标微生物的分离和纯化
基本工具
涂布器（涂布棒、玻璃刮刀、三角刮刀）
灭菌方法
高压蒸汽灭菌或75%酒精+火焰灼烧
基本步骤
移液器取0.1mL菌液加到培养基上
涂布器灭菌（若经高压蒸汽灭菌的直接使用）
火焰旁涂布
稀释涂布平板法步骤
为什么要稀释？
如何稀释？
活动 接种、培养并分离酵母菌
稀释涂布平板法可测定微生物的数量
这个实验结果能计数吗？
右图要计算样品中的微生物总数，还需要知道哪些数据？
稀释涂布平板法可测定微生物的数量
计数一般针对于微生物纯种，可研究微生物的繁殖速度等。
减小误差的方法
保证能准确计数的前提下减小稀释度 （30~300个）
将相同稀释度下的多组数值取平均值后再进行计算
所有计数原理统一：整体与部分的关系
N
1mL
=
159
0.1mL/103
N=159÷0.1× 103 =1.59×106 个/mL
显微镜计数法可测定微生物的数量
仪器：显微镜+血细胞计数板
方法：样方法
1mm
中方格
蓝色区域，大方格，用于白细胞计数，动物细胞也用这里。
大方格
25×16
小方格
计数室的体积=0.1mm3
红细胞计数区（酵母菌用这里）
显微镜计数法可测定微生物的数量
操作
血球计数板上盖一块盖玻片
用吸管在盖玻片边缘加摇匀的酵母菌悬液
渗入计数室（多余菌液会流走）
注意，不要加太多，不要加到盖玻片上，不要有气泡。
显微镜找到计数室
1个大格中有25个中格，五点取样，选取四个角和中央的中格，总计80个小格。
在4条边上的，数其中相邻的2条边
计算
这是一个中格！
N
1mL
=
80小格的数量÷80×400
0.1mm3
×稀释倍数
稀释涂布平板法和显微镜计数法的比较
相同点
基本原理都是整体与部分关系，符合这一原理必须确保整体和样本性质一致，具体而言，取样时都需要均匀。
三角瓶一般摇匀，试管一般用移液枪吹打均匀。
不同点
稀释涂布平板法只可计数活菌
显微镜计数法可计算全部微生物（活菌+死菌）
显微镜计数法能不能只计数活菌呢？
需要染色（红墨水、台酚蓝）
原理：活细胞细胞膜具有选择透过性
调整培养基的配方和培养方式可有目的地培养某种微生物
不同自然环境中生活着的微生物代谢类型不尽相同，代谢方式也不唯一。
自养VS异养
需氧VS厌氧
培养基中营养物质的浓度及比例都会影响微生物的生长。
过高的蔗糖浓度会抑制微生物的生长，过低的蔗糖浓度不能满足微生物生长的需要
利用微生物发酵生产谷氨酸时，培养基中的C/N（碳原子与氮原子的摩尔数比）为4:1时菌体大量繁殖，当比值降为3:1时，菌体繁殖减缓。
选择培养基
在培养基中添加（或减去）某种化学成分，使得只有某些特定的微生物能够生长，其他微生物均不能生长
←选择怎样的培养条件？
自养：不提供有机物，提供光
需氧：振荡培养保证氧气供应
厌氧：添加液体石蜡隔绝空气
作用：筛选特定细胞
活动 能分解尿素的微生物的分离与计数
原理
步骤
培养基配制、灭菌、倒平板
样本处理（稀释）、接种（涂布）
培养、观察
尿素
（唯一氮源）
氨
脲酶
产脲酶的微生物
分泌
吸收
NH4+
OH-
H2O
酚红变色
pH变大
酸黄碱红
活动 能分解尿素的微生物的分离与计数
讨论
1.在接种过程中，若用同一移液器吸取菌液，且不按照稀释度由大到小的顺序依次操作，是否会影响实验结果？为什么？
会影响。稀释度小的微生物浓度大，再去吸稀释度小的，会导致后者的细菌数目增多，产生误差。
2.根据培养结果，在估算土壤中能分泌脲酶的微生物的数量时，应统计哪个稀释度的培养皿？为什么？
应统计稀释度为10-3的3个培养皿中的菌落数后取平均值。因为这个浓度的培养皿中菌落数比较适中，计数的结果误差较小。
3. 培养皿E中许多菌落周围颜色发生明显改变。这种现象说明了什么？
平板上有较多能产生脲酶的微生物
4. 培养皿F中还有许多菌落周围颜色未发生明显改变。针对此现象，有人认为“这些未变色的菌落有可能是能自生固氮的微生物，而不是能产脲酶的微生物”。你认为这个解释合理吗？请说明理由。
不合理。