1.2.2 微生物的选择培养和计数 课件(共21张PPT)-2025-2026学年高二下学期《生物》（人教版）选必修3
文档属性
| 名称 | 1.2.2 微生物的选择培养和计数 课件(共21张PPT)-2025-2026学年高二下学期《生物》（人教版）选必修3 |
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| 格式 | pptx | ||
| 文件大小 | 5.7MB | ||
| 资源类型 | 教案 | ||
| 版本资源 | 人教版（2019） | ||
| 科目 | 生物学 | ||
| 更新时间 | 2025-12-14 00:00:00 | ||
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文档简介
(共21张PPT)
微生物的选择培养和计数
发酵工程
01
稀释涂布平板法
稀释涂布平板法
1×10
90mL无菌水
2
铲取土样，将样品装入纸袋中。
将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶，充分摇匀
1
2
取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中
梯度稀释
涂布平板
01
稀释涂布平板法
2
取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。
1mL
1mL
1mL
1mL
1mL
1mL
1mL
稀释过程是否有可能污染？
吹吸3次充分混匀
稀释涂布平板法
01
稀释涂布平板法
01
待涂布的菌液被培养基吸收后,将平板倒置,放入30~37℃的恒温培养箱中培养1~2d。在涂有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落
培养：
7
稀释涂布平板法
01
稀释涂布平板法
03
微生物的数量测定
方法1
稀释涂布平板计数法计数
当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
一般选择菌落数在30-300的平板进行记数。
统计的菌落数往往比活菌的实际数目低？
同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求平均值。
★原理：
★原则：
减小实验误差
★注意：
当两个或多个细胞连在一起，平板上观察到的只是一个菌落。
03
微生物的数量测定
方法2
显微镜直接计数法
快速、直观，能观察微生物的形态特征。
★特点：
不能区分死菌和活菌，统计结果一般是活菌数和死菌数的总和
03
微生物的数量测定
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
提出问题
①如何分离土壤中能分解尿素的细菌？
②如何计算每克土壤样品中有多少分解尿素的细菌？
尿素[CO(NH2)2]含氮量高，化学性质相对稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素施入土壤后，会被土壤中的某些细菌分解成NH3，NH3再转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。而这些细菌之所以能分解尿素为，是因为它们能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可以为细菌生长的氮源。
资料补充
CO(NH2)2 + H2O
CO2 + 2NH3
脲酶
转化
NH4+
NO3-
1. 将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？
以尿素作为唯一氮源，只允许以尿素作为氮源的微生物生长，培养基的其他营养成分与普通培养基基本相同。
选择培养基
允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类的微生物生长的培养基。
温度
提供70~80℃的培养温度
筛选出水生栖热菌
营养
筛选出石油分解菌
只提供石油为唯一碳源
营养
筛选出纤维素分解菌
只提供纤维素为唯一碳源
pH
选出耐高pH的细菌
提供高pH的生存环境
氧气
筛选出厌氧细菌
不提供氧气的生存环境
①投其所好
②取其所抗
选择培养基
稀释涂布平板法
单菌落
+
→
03
微生物的数量测定
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
利用尿素作为唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。
组分 含量
KH2PO4 1.4g
Na2HPO4 2.1g
MgSO4·7H2O 0.2g
葡萄糖 10.0g
尿素 1.0g
琼脂 15.0g
H2O 定容至1000mL
提供无机盐
提供碳源
提供氮源
提供水分
03
微生物的数量测定
实验设计
1.土壤取样
①要求：富含有机质、酸碱度接近中性的潮湿土壤
取样时一般要铲去表层土
城市：公园里、街道旁、花盆中
农村：农田里、菜园里
②取样土层：距地表3~8cm的土壤层
2.配置培养基
以尿素为唯一氮源的培养基
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
03
微生物的数量测定
实验设计
4.涂布平板
3.样品的稀释
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
细菌： 104、105、106
放线菌：103、104 、105
真菌：102、103、104
稀释倍数
03
微生物的数量测定
实验设计
4.涂布平板
稀释倍数
1×106
1×107
1×104
1×105
无菌水
选择培养基
牛肉膏蛋白胨培养基
对照
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
03
微生物的数量测定
5.培养观察
平板倒置于30~37℃下培养1~2d，每隔24h观察统计一次
1×106
1×107
1×104
1×105
无菌水
选择培养基
牛肉膏蛋白胨培养基
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
实验设计
不涂布的选择培养基
牛肉膏蛋白胨选择培养基
不加氮源的培养基
验证培养基是否有杂菌污染（平板是否合格）
验证选择培养基是否具有选择作用
验证是否有固氮菌干扰
03
微生物的数量测定
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
对照组
03
微生物的数量测定
实验设计
6.菌落计数
稀释度 1×104 1×105 1×106 1×107 1 2 3 平均值 1 2 3 平均值 1 2 3 平均值 1 2 3 平均值
每个平板的菌落数
当菌落数目稳定时，选取菌落数在30~300的平板进行技术，同一稀释度下至少计数3个平板，求出平均值，并根据对应的稀释度进行计算！
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
若其中有平板上的菌落数量与其他平板差别很大？
舍弃或重新实验
03
微生物的数量测定
实验设计
6.菌落计数
某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml）( )
A. 2.34×108 B. 2.34×109 C. 234 D. 23.4
B
=（C÷V）×M
=（234÷0.1）× 106
= 2.34×109
每克样品中的菌株数 =菌落平均数÷涂布的体积×稀释倍数
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
C:某稀释度下平板上生长的平均菌落数;
V:涂布平板时所用的稀释液的体积(mL);
M:稀释倍数
思考:如何检测饮用水中的大肠杆菌是否超标
微生物的筛选与鉴别方法
1.微生物的筛选方法
单菌落挑取法 利用平板划线法或稀释涂布平板法接种到固体培养基表面,直接根据微生物菌落的特征利用单菌落挑取的方法获得目的微生物
选择培养法 利用选择培养基对微生物进行选择培养,直接获得目的微生物
鉴别培养法 利用鉴别培养基使目的微生物菌落呈现特有的特征,然后筛选目的微生物
2.微生物的鉴别方法
菌落特征鉴别法 根据微生物在固体培养基表面形成的菌落的形状、大小和颜色等特征进行鉴别
指示剂鉴别法 如以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,培养某种微生物后,培养基变红说明该种微生物能够分解尿素
染色鉴别法 如利用刚果红染色法,根据培养基中出现以纤维素分解菌为中心的透明圈来筛选分解纤维素的微生物
谢谢观看
微生物的选择培养和计数
发酵工程
01
稀释涂布平板法
稀释涂布平板法
1×10
90mL无菌水
2
铲取土样，将样品装入纸袋中。
将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶，充分摇匀
1
2
取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中
梯度稀释
涂布平板
01
稀释涂布平板法
2
取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。
1mL
1mL
1mL
1mL
1mL
1mL
1mL
稀释过程是否有可能污染？
吹吸3次充分混匀
稀释涂布平板法
01
稀释涂布平板法
01
待涂布的菌液被培养基吸收后,将平板倒置,放入30~37℃的恒温培养箱中培养1~2d。在涂有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落
培养：
7
稀释涂布平板法
01
稀释涂布平板法
03
微生物的数量测定
方法1
稀释涂布平板计数法计数
当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
一般选择菌落数在30-300的平板进行记数。
统计的菌落数往往比活菌的实际数目低？
同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求平均值。
★原理：
★原则：
减小实验误差
★注意：
当两个或多个细胞连在一起，平板上观察到的只是一个菌落。
03
微生物的数量测定
方法2
显微镜直接计数法
快速、直观，能观察微生物的形态特征。
★特点：
不能区分死菌和活菌，统计结果一般是活菌数和死菌数的总和
03
微生物的数量测定
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
提出问题
①如何分离土壤中能分解尿素的细菌？
②如何计算每克土壤样品中有多少分解尿素的细菌？
尿素[CO(NH2)2]含氮量高，化学性质相对稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素施入土壤后，会被土壤中的某些细菌分解成NH3，NH3再转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。而这些细菌之所以能分解尿素为，是因为它们能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可以为细菌生长的氮源。
资料补充
CO(NH2)2 + H2O
CO2 + 2NH3
脲酶
转化
NH4+
NO3-
1. 将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？
以尿素作为唯一氮源，只允许以尿素作为氮源的微生物生长，培养基的其他营养成分与普通培养基基本相同。
选择培养基
允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类的微生物生长的培养基。
温度
提供70~80℃的培养温度
筛选出水生栖热菌
营养
筛选出石油分解菌
只提供石油为唯一碳源
营养
筛选出纤维素分解菌
只提供纤维素为唯一碳源
pH
选出耐高pH的细菌
提供高pH的生存环境
氧气
筛选出厌氧细菌
不提供氧气的生存环境
①投其所好
②取其所抗
选择培养基
稀释涂布平板法
单菌落
+
→
03
微生物的数量测定
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
利用尿素作为唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。
组分 含量
KH2PO4 1.4g
Na2HPO4 2.1g
MgSO4·7H2O 0.2g
葡萄糖 10.0g
尿素 1.0g
琼脂 15.0g
H2O 定容至1000mL
提供无机盐
提供碳源
提供氮源
提供水分
03
微生物的数量测定
实验设计
1.土壤取样
①要求：富含有机质、酸碱度接近中性的潮湿土壤
取样时一般要铲去表层土
城市：公园里、街道旁、花盆中
农村：农田里、菜园里
②取样土层：距地表3~8cm的土壤层
2.配置培养基
以尿素为唯一氮源的培养基
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
03
微生物的数量测定
实验设计
4.涂布平板
3.样品的稀释
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
细菌： 104、105、106
放线菌：103、104 、105
真菌：102、103、104
稀释倍数
03
微生物的数量测定
实验设计
4.涂布平板
稀释倍数
1×106
1×107
1×104
1×105
无菌水
选择培养基
牛肉膏蛋白胨培养基
对照
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
03
微生物的数量测定
5.培养观察
平板倒置于30~37℃下培养1~2d，每隔24h观察统计一次
1×106
1×107
1×104
1×105
无菌水
选择培养基
牛肉膏蛋白胨培养基
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
实验设计
不涂布的选择培养基
牛肉膏蛋白胨选择培养基
不加氮源的培养基
验证培养基是否有杂菌污染（平板是否合格）
验证选择培养基是否具有选择作用
验证是否有固氮菌干扰
03
微生物的数量测定
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
对照组
03
微生物的数量测定
实验设计
6.菌落计数
稀释度 1×104 1×105 1×106 1×107 1 2 3 平均值 1 2 3 平均值 1 2 3 平均值 1 2 3 平均值
每个平板的菌落数
当菌落数目稳定时，选取菌落数在30~300的平板进行技术，同一稀释度下至少计数3个平板，求出平均值，并根据对应的稀释度进行计算！
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
若其中有平板上的菌落数量与其他平板差别很大？
舍弃或重新实验
03
微生物的数量测定
实验设计
6.菌落计数
某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml）( )
A. 2.34×108 B. 2.34×109 C. 234 D. 23.4
B
=（C÷V）×M
=（234÷0.1）× 106
= 2.34×109
每克样品中的菌株数 =菌落平均数÷涂布的体积×稀释倍数
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
C:某稀释度下平板上生长的平均菌落数;
V:涂布平板时所用的稀释液的体积(mL);
M:稀释倍数
思考:如何检测饮用水中的大肠杆菌是否超标
微生物的筛选与鉴别方法
1.微生物的筛选方法
单菌落挑取法 利用平板划线法或稀释涂布平板法接种到固体培养基表面,直接根据微生物菌落的特征利用单菌落挑取的方法获得目的微生物
选择培养法 利用选择培养基对微生物进行选择培养,直接获得目的微生物
鉴别培养法 利用鉴别培养基使目的微生物菌落呈现特有的特征,然后筛选目的微生物
2.微生物的鉴别方法
菌落特征鉴别法 根据微生物在固体培养基表面形成的菌落的形状、大小和颜色等特征进行鉴别
指示剂鉴别法 如以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,培养某种微生物后,培养基变红说明该种微生物能够分解尿素
染色鉴别法 如利用刚果红染色法,根据培养基中出现以纤维素分解菌为中心的透明圈来筛选分解纤维素的微生物
谢谢观看