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第4课时
第2章 细胞工程
动物细胞融合技术与单克隆抗体
人教版选择性必修3
1.能阐明动物细胞融合技术的概念,举例说出诱导动物细胞融合的方法
2.能概述单克隆抗体的制备过程
植物体细胞杂交
植物细胞融合
植物组织培养
有没有技术让不同种动物的体细胞杂交,
培育出集不同细胞优势于一身的动物细胞呢?
能阐明动物细胞融合技术的概念,举例说出诱导动物细胞融合的方法
任务:阅读教材48页并结合人鼠细胞融合过程,构建动物细胞融合模型(用文字表示)
目标
一
【提示】
动物细胞A
动物细胞B
膜融合、质融合
动物细胞培养
杂交细胞(单核)
物理、化学、生物法诱导
动物细胞融合也称细胞杂交,是指使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。
1.概念:
①融合过程:
②动物细胞融合实质及完成的标志:
③重组细胞的特点:
细胞膜融合→细胞质融合→ 细胞核融合。
核融合
具有两种细胞的遗传信息,杂种细胞表现出两个亲本细胞的特点。
细胞膜的流动性
电融合法
PEG融合法(聚乙二醇)
灭活的病毒
2.原理
3.诱导方法
物理方法:
化学方法:
化学方法:
注意说明
①与植物原生质体融合相比,动物特有的诱导细胞融合的方法是用灭活的病毒作为诱导剂。
②在这里需要理解,灭活是指用物理或化学手段使病毒失去感染能力,但并不破坏它们的抗原结构。
③灭活病毒诱导细胞融合的原理:是病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用,使细胞互相凝聚,细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布,细胞膜打开、细胞发生融合。这一过程既能反映出糖蛋白在细胞识别中的重要作用,又能反映出细胞膜具有流动性这一结构特点。
从原理、方法、结果和意义等方面对比动物细胞融合和植物体细胞杂交的异同
【思考与讨论】
比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合
原理
融合前处理
使用的酶
方法
结果
意义 细胞膜的流动性
细胞膜的流动性、细胞的全能性
先除去细胞壁
先使细胞分散开
纤维素酶和果胶酶
胰蛋白酶或胶原蛋白酶
物理法:电融合法、离心法化学法:PEG融合法
除物理法和化学法外,也可用灭活的病毒诱导
杂种植株
杂交细胞
克服了远缘杂交不亲和的障碍,打破了生殖隔离,扩展了杂交的亲本组合
获得抗体的传统方法和缺点
抗原
传统抗血清
(所有抗体混合)
免疫
3 1 2 4
1
2
3
4
3 1 2 4
(1)方法:
向动物体内反复注射某种抗原,使动物产生抗体,然后从动物血清中分离所需抗体。
(2)缺点:
产量低、纯度低、特异性差
一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体
骨髓瘤细胞(癌细胞)能无限增殖
动物细胞融合
杂交瘤细胞
动物细胞培养
单克隆抗体
杂交瘤细胞:既能迅速大量增殖,又能产生抗体
单克隆抗体的制备思路
能概述单克隆抗体的制备过程
任务:阅读教材P46页,构建制备单克隆抗体的流程
目标
二
小鼠
相应的B淋巴(浆细胞)细胞
多种杂交细胞
能分泌所需抗体的杂交瘤细胞
体外培养
体内培养
大量单克
隆抗体
骨髓瘤细胞
杂交瘤细胞
注射抗原
诱导融合
选择性培养基筛选
筛选,
克隆化培养
从培养液中提取
从小鼠腹水中提取
【提示】
单克隆抗体的制备
(1)概念:
由单一的B淋巴细胞群产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体
(2)基本原理
①每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体,但不能在体外无限增殖
②小鼠骨髓瘤细胞能在体外无限增殖,但不能产生抗体
③利用动物细胞融合技术产生的杂交瘤细胞可以保持亲代双方的特性,既能迅速大量增殖,又能产生专一抗体
(3)来源:单克隆抗体是由B淋巴细胞和骨髓瘤细胞杂交形成的单一杂交瘤细胞增值产生的高度专一的抗体
①B淋巴细胞:能产生特异性强的抗体
②骨髓瘤细胞:在体外能无限增殖
1.给小鼠注射特定的抗原的目的是什么 实验为什么选择骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合
【提示】给小鼠注射特定的抗原是为了让小鼠产生能产生专一性抗体的B淋巴细胞。骨髓瘤细胞是癌细胞,可以无限增殖,而B淋巴细胞能产生专一性抗体,所以融合的杂交瘤细胞既能无限增殖,又能产生专一性抗体。
【思考与讨论】
2.在两细胞融合后,为什么还要进行两次筛选 两次筛选的目的有何不同 如何进行筛选
【提示】
项目 第一次筛选 第二次筛选
筛选原因
筛选方法
筛选目的
诱导融合后得到多种杂交细胞,另外还有未融合的细胞
从小鼠体内提取的B淋巴细胞有很多种,形成的杂交瘤细胞也有很多种
用特定的选择培养基筛选:未融合的细胞和同种细胞融合后形成的细胞都会死亡,只有融合的杂交瘤细胞才能生长
用多孔培养皿培养,在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始克隆化培养和抗体检测,经多次筛选得到能产生特异性抗体的细胞群
得到杂交瘤细胞
得到能分泌所需抗体的杂交瘤细胞
单克隆抗体的应用
(1)作为诊断试剂:单克隆抗体能准确地识别抗原的细微差异,与特定抗原发生特异性结合,并且可以大量制备,因此被广泛用作诊断试剂,在肿瘤、心血管畸形等多种疾病的诊断和病原体鉴定中发挥重要作用
抗人绒毛促性腺激素单克隆抗体
血型检测试剂
(2)用于治疗疾病和运载药物
单克隆抗体+药物=生物导弹
两个过程
动物细胞融合过程
单克隆抗体制备过程
三个“一”
一个诱导细胞融合的新方法
--灭活病毒
一个新细胞
--杂交瘤细胞
一个优势
--单克隆抗体特异性强、灵敏度高、可大量制备的优势
谢谢观看
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