第1课时 胚胎工程的理论基础
知识点一 受精
1.下列关于哺乳动物受精过程的叙述，错误的是（ ）
A.精子头部触及卵细胞膜时出现的反应是防止多精入卵的第一道屏障
B.受精卵细胞质中的遗传物质完全来自卵细胞
C.受精时只有精子头部进入卵子
D.雄原核形成的同时，卵子完成减数分裂Ⅱ
2.（2024·山东菏泽高二期中）下列有关哺乳动物体内受精的表述，错误的是（ ）
A.精子入卵后，精子的核体积直接变大发育成雄原核
B.精子入卵后，被激活的卵子完成减数分裂Ⅱ，形成雌原核
C.透明带和卵细胞膜会发生相应生理反应来防止多精入卵
D.动物排出的卵子有的可能是初级卵母细胞，有的可能是次级卵母细胞
3.受精过程中，精子头部的顶体酶原转化为有活性的顶体酶将卵细胞周围的透明带溶解，形成精子穿过的通道。精子进入卵细胞后，卵细胞膜上的精子受体失去活性。卵细胞膜下的皮层颗粒，以外排的方式，进入卵周空间，释放的酶类引起透明带“硬化”，形成受精膜，完成受精。下列叙述错误的是（ ）
A.卵细胞膜下皮层颗粒外排的方式可能是胞吐
B.受精卵中的遗传物质一半来自精子，一半来自卵细胞
C.透明带“硬化”是防止多个精子进入卵细胞受精的一道屏障
D.精子受体失去活性有助于一个卵细胞与一个精子结合
知识点二 胚胎早期发育
4.下列关于桑葚胚、囊胚、原肠胚的叙述，不正确的是（ ）
A.胚胎发育的顺序是桑葚胚→囊胚→原肠胚
B.囊胚期的细胞出现了分化，其原因是细胞中的遗传物质发生了变化
C.桑葚胚期之前的细胞均未出现分化
D.原肠胚的外胚层由内细胞团表层的细胞形成
5.（2024·河北衡水高二期末）下图为哺乳动物受精作用及胚胎发育的示意图，a、b表示胚胎发育的两个不同时期。下列有关叙述错误的是（ ）
A.①过程中发生了非同源染色体自由组合
B.②过程中细胞通过有丝分裂的方式增殖
C.a时期可分离得到胚胎干细胞
D.b时期会分化成三个胚层
6.（2024·山东泰安高二检测）囊胚期是哺乳动物胚胎发育的一个重要阶段。下列关于囊胚的叙述，错误的是（ ）
A.囊胚期以前的时期，细胞一般都具有全能性
B.滋养层细胞将来发育成胎儿的各种组织
C.囊胚从透明带中被挤压出来称为孵化
D.从受精卵到囊胚的发育过程中每个细胞的核质比逐渐增大，胚胎中DNA总量逐渐增加
7.如图表示精子入卵后，发生（或引起的）一系列变化形成受精卵的过程，下列叙述错误的是（ ）
A.图中X指卵细胞膜反应，Y指卵子完成减数分裂Ⅱ
B.精子触及卵细胞膜的瞬间便发生了X，防止多精入卵
C.精子入卵主要指精子的头部外膜与卵细胞膜融合
D.雌、雄原核充分发育后相向移动，继而合并成一个细胞核
8.（2024·山西大同统考）我国科学家利用猴胚胎干细胞首次创造了人工“猴胚胎”。研究流程如图所示。下列相关叙述正确的是（ ）
A.睾丸中的精原干细胞也属于胚胎干细胞
B.③处的细胞将来可发育成胎儿的各种组织
C.需要在充满CO2的培养箱中培养胚胎干细胞
D.人工“猴胚胎”的遗传特性与代孕受体保持一致
9.（多选）（2024·山东省实验中学高二期中）下列关于试管婴儿的叙述，正确的是（ ）
A.女性在取卵前通常通过服用促性腺激素以促进自身超数排卵
B.精子入卵后被激活的卵子完成减数分裂Ⅱ，排出第二极体
C.采集到的卵母细胞和精子要分别进行成熟培养和获能处理，然后才能用于体外受精
D.受精的标志是在卵细胞膜和透明带的间隙观察到雌、雄原核或两个极体
10.（多选）（2024·山东潍坊一中高二检测）下图为哺乳动物早期胚胎发育的过程，下列有关叙述错误的是（ ）
A.Ⅰ时期为桑葚胚，该时期的细胞具有发育的全能性
B.过程a和b使胚胎细胞数目增多，有机物的含量增多
C.Ⅱ时期囊胚腔中不含任何物质
D.细胞分化从Ⅱ时期开始，贯穿于动物的整个生命历程
11.亚麻酸（ALA）能够促进卵母细胞体外成熟和囊胚发育。为了给水牛体外胚胎产业化生产中合理使用亚麻酸提供理论依据，科研人员研究了不同浓度的亚麻酸对水牛卵母细胞体外成熟、早期胚胎发育的影响。分析回答下列问题：
①卵母细胞的收集和体外培养：从屠宰场水牛的卵巢中收集并处理卵母细胞，随机分成5组，分别置于不同浓度亚麻酸的培养液中，在39 ℃、5％ CO2的培养箱中培养22～24 h。
②卵母细胞成熟判断：在显微镜下观察卵母细胞，判断其是否成熟，统计结果如表1。
③体外受精：在受精溶液中进行体外受精后，用显微镜观察判断是否完成受精。
④早期胚胎培养：将受精卵移入胚胎培养液中培养44～48 h后检查分裂情况，每隔48 h更换一次培养液，第5～9天观察囊胚发育情况，统计结果如表2。
表1 亚麻酸对水牛卵母细胞体外成熟的影响
ALA浓度/（μmol·L－1） 卵母细胞数 核成熟卵子数
0 229 137
10 201 133
50 227 166
100 215 137
200 215 135
表2 亚麻酸对水牛早期胚胎发育的影响
ALA浓度/（μmol·L－1） 培养卵数 分裂数 囊胚数
0 309 171 75
10 325 182 82
50 292 185 97
100 310 188 84
200 231 145 68
（1）步骤①中，细胞培养箱中加5％ CO2的作用是 。
（2）步骤②中，成熟卵母细胞内染色体的行为特征是 。步骤③中，判断是否受精的依据是 。
（3）步骤④中，受精卵经 （时期）发育成囊胚，培养过程定期更换培养液的目的是 。
（4）根据实验数据分析，亚麻酸溶液为200 μmol·L－1时，对水牛卵母细胞体外成熟和囊胚发育起 （填“促进”或“抑制”）作用。
（5）实验结果表明， μmol·L－1的亚麻酸对水牛卵母细胞体外成熟和囊胚发育都较有利，判断依据是
。
4 / 4第2课时 动物细胞融合技术与单克隆抗体
知识点一 动物细胞融合技术
1.下列有关植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较，叙述正确的是（ ）
A.两者应用的原理都完全相同
B.两者都可用电融合法或聚乙二醇（PEG）融合法诱导细胞融合
C.两者融合完成的标志都是形成融合细胞核
D.两者的目的都是用于大量生产分泌蛋白
2.（2024·天津检测）如图为细胞融合的示意图，下列叙述正确的是（ ）
A.若a细胞和b细胞是植物细胞，需先去壁再诱导融合
B.若a和b为二倍体，则c也为二倍体
C.c细胞的形成与a、b细胞膜的选择透过性都有关
D.c细胞将同时表达a细胞和b细胞中的所有基因
知识点二 单克隆抗体及其应用
3.（2024·天津静海区高二检测）以SARS病毒核衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体。下列相关叙述正确的是（ ）
A.用纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，产生的血清抗体为单克隆抗体
B.体外培养浆细胞可以获得大量针对SARS病毒的单克隆抗体
C.融合并筛选特定的杂交瘤细胞，原代培养产生遗传物质改变后才能进行传代培养
D.用该单克隆抗体与SARS病毒核衣壳蛋白特异性结合的方法可诊断出病毒感染者
4.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞。在这种培养基上不能存活、增殖的细胞是（ ）
①B淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身融合细胞 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂交瘤细胞
A.①②③④ B.①③⑤
C.②④ D.①③
5.（2024·江苏泰州高二期中）下列有关单克隆抗体制备过程的叙述，错误的是（ ）
A.过程①注射一种灭活病毒可使小鼠体内产生多种B淋巴细胞
B.过程②形成的两两融合细胞只有图中的3种类型
C.过程③采用抗原—抗体杂交法进行特定杂交瘤细胞的筛选
D.过程④获得的全部杂交瘤细胞都只能产生同一种抗体
6.（2024·山东临沂期末）小胶质细胞参与一系列神经退行性疾病的发生过程，包括阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿舞蹈症、肌萎缩侧索硬化等。科研人员制备了抗小胶质细胞表面标志蛋白 CD22的单克隆抗体，具体方法如图所示。下列对抗CD22单克隆抗体的制备的分析，不合理的是（ ）
A.步骤①和步骤⑤向小鼠注射的都是CD22
B.步骤②所用的 SP2/0细胞具有无限增殖的特点
C.吸取③中的上清液到④的培养孔中后须加入 CD22 进行检测
D.步骤⑥提取的抗CD22 抗体，可抑制神经退行性疾病的发生
7.（2024·湖南张家界高二期中）科学家将能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体与药物结合，制成了抗体—药物偶联物（ADC），实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤。下列叙述错误的是（ ）
A.ADC由抗体、接头和药物三部分组成
B.ADC可与肿瘤细胞表面受体特异性结合
C.ADC进入细胞的过程依赖膜的流动性
D.单克隆抗体可特异性地杀伤肿瘤细胞
8.（2024·河北衡水中学高二检测）双特异性单克隆抗体是指可同时与癌细胞和药物结合的特异性抗体。下图是科学家设计的生产能同时识别癌胚抗原和长春碱（一种抗癌药物）的双特异性单克隆抗体的部分过程。相关叙述错误的是（ ）
A.单克隆抗体的制备需要用到动物细胞融合和动物细胞培养技术
B.该过程需要多次筛选，才可筛选出单克隆杂交—杂交瘤细胞
C.过程⑤的目的与过程①的目的不同
D.通过该技术合成的双特异性单克隆抗体的灵敏度更高
9.下图表示利用细胞融合技术进行基因定位的过程，在人—鼠杂交细胞中人的染色体会以随机方式丢失，通过分析基因产物进行基因定位。现检测细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中人的4种酶活性，只有Ⅱ具有芳烃羟化酶活性，只有Ⅲ具有胸苷激酶活性，Ⅰ、Ⅲ都有磷酸甘油酸激酶活性，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ均有乳酸脱氢酶活性。下列相关叙述不正确的有（ ）
A.加入灭活仙台病毒的作用是促进细胞融合
B.细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分别为人—人、人—鼠、鼠—鼠融合细胞
C.芳烃羟化酶基因位于2号染色体上，乳酸脱氢酶基因位于11号染色上
D.胸苷激酶基因位于17号染色体上，磷酸甘油酸激酶基因位于X染色体上
10.CD47 是一种跨膜糖蛋白，可与巨噬细胞表面的信号调节蛋白结合，从而抑制巨噬细胞的吞噬作用。肺癌肿瘤细胞表面的 CD47 含量比正常细胞高 1.6～5 倍，导致巨噬细胞对肿瘤细胞的清除效果减弱。为证明抗 CD47 的单克隆抗体可以解除 CD47 对巨噬细胞的抑制作用，科学家按照如下流程进行了实验，下列叙述正确的是（ ）
A.对照组应设置为：巨噬细胞＋正常细胞共培养体系＋单克隆抗体
B.肺癌肿瘤细胞有发达的内质网和高尔基体，参与细胞膜上糖蛋白的形成
C.过程②和过程③筛选得到的杂交瘤细胞都能够产生抗CD47的单克隆抗体
D.若实验组的吞噬指数高于对照组，则单克隆抗体有解除 CD47 对巨噬细胞的抑制作用
11.为了解决杂交瘤细胞在传代培养中出现来自B细胞染色体丢失的问题，研究者在单克隆抗体的制备过程中增加了一个步骤，如图所示。除了抗原刺激之外，用EBV（一种病毒颗粒）感染动物B细胞，并使之成为“染色体核型稳定”的细胞株。这样的细胞株能够在 HAT培养基中存活，但对乌本苷（Oua）敏感。下列相关分析不合理的是（ ）
A.杂交瘤细胞染色体丢失可能导致抗体产生能力下降
B.B淋巴细胞来源于抗原刺激后的动物的淋巴结和脾脏等
C.骨髓瘤细胞应该无法在HAT选择培养基中存活
D.杂交瘤细胞具有持续产生抗EBV抗体的能力
12.（多选）（2024·山东济宁高二检测）将特定药物与单克隆抗体相结合制成的“生物导弹”，能够用于杀死人类某些癌细胞，其过程如下图所示。下列有关叙述正确的是（ ）
A.①过程的原理和植物原生质体融合的原理基本相同
B.经①过程形成的杂交瘤细胞都能无限增殖并产生特定抗体
C.②过程需要筛选并克隆单个杂交瘤细胞
D.抗体的靶向作用使③过程具有高度特异性
13.（多选）某研究者利用细胞工程制备抗A的单克隆抗体。先用抗原（A）分别免疫 3 只同种小白兔（X、Y 和 Z），每只小白兔免疫5 次，每次免疫一周后测定各小白兔血清抗体的效价（能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数），制备 B 淋巴细胞时，免疫小白兔的血清抗体效价需达到 16 000 以上，检测结果如图所示。下列有关叙述错误的是（ ）
A.将抗原A注入小白兔体内的目的是获得免疫产生的抗A抗体
B.最适合用于制备B淋巴细胞的是小白兔X
C.骨髓瘤细胞与B淋巴细胞的融合可以使用灭活的病毒进行促融
D.融合细胞需要经过多次筛选获得足够数量的能分泌抗A抗体的杂交瘤细胞
14.（2024·山东潍坊高二检测）下图为制备单克隆抗体和多克隆抗体的示意图，据图回答下列问题：
（1）图中向小鼠注射包含多种抗原决定簇的抗原后，所获得的免疫抗血清实际上是含有 （填写抗体的名称）的混合物，这种方法制备的多克隆抗体产量低、纯度低。与多克隆抗体相比，单克隆抗体突出的优点是 ，
并能大量制备。
（2）图中选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞，说明细胞膜具有 ，如果仅考虑细胞的两两融合，其融合细胞有 种类型（不考虑B淋巴细胞种类）。
（3）图中两次筛选的目的不同，其中筛选①的目的是筛选出 ，筛选②的目的是筛选出 。筛选时所用的培养基是特定的 培养基。
（4）科学工作者正在研究的治疗癌症使用的“ADC”就是在 。用“ADC”治疗癌症的方法优于化疗的原因是
。
（5）由图中可看出，单克隆抗体的制备过程中，运用了动物细胞工程中的 和 两大技术。
15.现代生物科技不断发展，在治疗癌症等重大疾病方面发挥着越来越重要的作用。如图是能同时识别抗原A、B的双特异性单克隆抗体的结构图解和部分制备过程，请回答下列问题：
（1）抗体的结构类似Y字形，由两条重链和两条轻链组成，Y字形结构的顶端为抗原结合部位（可变）。这些肽链在核糖体合成后，经 、 等细胞器加工、连接形成有活性的抗体。
（2）单克隆杂交瘤细胞能够迅速大量增殖，原因是
。
（3）图中的单克隆杂交瘤细胞与脾脏细胞的融合细胞需要经过多次的检测和筛选才能得到少量的能产生双特异性单克隆抗体的单克隆杂交—杂交瘤细胞。根据题中信息，简述可能的原因：
。 （两种即可）
（4）人体内T细胞可以识别、杀伤癌细胞。以癌细胞细胞膜外表面的特异性蛋白为抗原A，T细胞细胞膜外表面的受体蛋白（能激活其免疫能力）为抗原B，科学家设计了1种双特异性单克隆抗体。这种双特异性单克隆抗体治疗癌症的效果优于抗体1、2联合使用，原因是
。
16.为降低乳腺癌治疗药物的副作用，科研人员尝试在单克隆抗体技术的基础上，构建抗体—药物偶联物（ADC），过程如图1所示。请回答下列问题：
（1）本实验中，小鼠注射的特定抗原应取自 。
（2）步骤①常用方法包括 融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等。
（3）步骤②的细胞必须经过步骤③克隆化培养和 才能筛选得到符合要求的杂交瘤细胞，杂交瘤细胞的特点是 。杂交瘤细胞可采用注射到小鼠腹腔内培养或进行 培养的方式进行扩大培养。
（4）步骤④是将获得的a 和b 这2部分，通过接头结合在一起，从而获得ADC。
（5）研究发现，ADC在患者体内的作用如图2所示。
①ADC能降低乳腺癌治疗药物的副作用，是因为 能精确地定位乳腺癌细胞，该过程依赖于 反应。
②ADC进入乳腺癌细胞后，细胞中的溶酶体可将其 ，释放出的药物最终作用于 ，可导致癌细胞凋亡。
6 / 6课时跟踪检测部分
第1章 发酵工程
第1节 传统发酵技术的应用
1.B 几千年前，人类就开始利用发酵技术酿酒、酿醋等，但是并不知道发酵的本质，A错误；传统发酵技术一般直接利用原材料中天然存在的微生物，或利用前一次发酵保存下来的面团、卤汁等发酵物中的微生物进行发酵、制作食品，C错误；利用传统发酵技术制作的食品包括腐乳、酱油、醋、泡菜等，不包括果汁，D错误。
2.B 泡菜制作过程中，主要是乳酸菌将葡萄糖分解形成乳酸，A错误；做馒头或面包时，经常要用到酵母菌，酵母菌可以分解面粉中的葡萄糖，产生二氧化碳和酒精，二氧化碳是气体，遇热膨胀而形成小孔，使得馒头或面包暄软多孔，B正确；酵母菌在有氧条件下可以大量繁殖，在密封也就是无氧条件下产生酒精，C错误；酸奶制作过程中，后期低温处理时大部分乳酸杆菌已死亡，不会大量繁殖，D错误。
3.D 乳酸菌是厌氧菌，能够进行无氧呼吸，发酵产生了乳酸，不会产生二氧化碳，A错误；乳酸菌和芽孢杆菌生活在同一环境下会竞争营养物质和空间等，因此二者存在种间竞争关系，B错误；参与豆腐发酵的微生物有酵母、曲霉和毛霉等，其中起主要作用的是毛霉，C错误；毛霉能够产生蛋白酶，将蛋白质分解为小分子的肽和氨基酸，使得臭豆腐具有特殊的味道，D正确。
4.C 参与果酒制作的微生物是酵母菌，其最适生长温度约为28 ℃，在制作蓝莓酒时，温度应该控制在18～30 ℃，A正确；过程③是乙酸发酵，所用的微生物是醋酸菌，醋酸菌在氧气、糖源都充足的条件下可直接将蓝莓汁发酵为蓝莓醋，B正确；酒精发酵为无氧环境，而醋酸菌是好氧细菌，即使发酵装置中含有醋酸菌，在酒精发酵旺盛时，醋酸菌也不能将果汁中的糖分解为乙酸，C错误；利用重铬酸钾溶液在酸性条件下检测，若出现灰绿色，说明有酒精产生，D正确。
5.A 在泡菜腌制过程中亚硝酸盐的含量会先增加后减少；乳酸菌的含量先增加，后由于营养物质缺乏、pH下降而减少；乳酸的含量会先上升后保持稳定，A错误；泡菜发酵初期活动强烈的是酵母菌和大肠杆菌，进行有氧呼吸产生CO2，故在发酵初期有气泡产生，原因是微生物呼吸作用产生了CO2和坛中存在空气，B正确；制作过程中需要用食盐，其作用是析出芥菜中的水分、调制风味并抑制微生物生长，C正确；制作泡菜时宜选用新鲜的蔬菜，原因是新鲜蔬菜中亚硝酸盐的含量低，D正确。
6.B 甲装置没有通气，进行的是酒精发酵，而乙装置通入无菌空气，进行的是乙酸发酵，A正确；醋酸菌是原核生物，没有线粒体，B错误；在发酵前，该装置要进行消毒或灭菌，防止其他微生物对发酵的影响，C正确；酒精可以使用酸性重铬酸钾进行检测，颜色变化是橙色变为灰绿色，D正确。
7.B 高温可以破坏微生物的细胞结构，利用高温可将原料中的杂菌杀死，A正确；曲霉与酵母菌是真菌，都有成形的细胞核，B错误；原料经糖化作用形成葡萄糖等，为酵母菌提供营养物质，C正确；酒精发酵作用会先后经历有氧条件（酵母菌大量繁殖）和无氧条件（酒精发酵）两个阶段，D正确。
8.D 发酵0～24小时没有酒精产生，说明酵母菌进行了有氧呼吸，A正确；24小时后随着发酵时间延长，总酸含量逐渐上升，pH逐渐下降，B正确；乙酸发酵的最适温度是30～35 ℃，酒精发酵的最适温度是18～30 ℃，故由产酒到产醋应适度升高温度，C正确；发酵过程中有机物中的能量部分留在发酵产品中，部分通过呼吸作用释放，释放出来的能量大部分以热能形式散失，少部分转化为ATP中活跃的化学能，D错误。
9.BCD 存放发酵时需要用膜覆盖密封，说明生产发酵辣椒酱的菌种不是醋酸菌，而是厌氧的乳酸菌，A错误；若去蒂不完全，会影响到最终辣椒酱的细腻程度，B正确；发酵辣椒酱的传统生产工艺主要是利用了天然乳酸菌发酵产生乳酸，再辅以低盐来保存产品，存在生产周期长，产品品质不稳定，亚硝酸盐等有害物质的含量超标等严重问题，无法满足工业化大规模生产和食品安全的需要，D正确。
10.AB 根据题干信息无法判断28 ℃组是实验组，A错误；根据图示信息可知，28 ℃条件下气态酒精浓度比较高，表明果酒发酵的最适温度是28 ℃左右，B错误；酵母菌为兼性厌氧微生物，无氧呼吸产生酒精，所以酒精产生量的多少与通气条件密切相关，D正确。
11.（1）乳酸杆菌 不需要氧气 乳酸菌无以核膜为界限的细胞核 （2）杀灭杂菌，同时可去除部分溶解氧 （3）较强 乳酸含量较高，而亚硝酸盐含量低 （4）缺氧和酸性的环境抑制了杂菌生长，使亚硝酸盐的产生量降低
解析：（3）发酵初期，硝酸盐还原菌将蔬菜中的硝酸盐还原成亚硝酸盐，此时硝酸盐还原菌的作用较强；据图可知，在发酵的中后期乳酸含量较高，而亚硝酸盐含量低，故泡菜品质良好。（4）泡菜制作中期亚硝酸盐含量下降，原因是：一方面由于缺氧和酸性的环境抑制了杂菌生长，使亚硝酸盐的产生量降低；另一方面由于乳酸菌产生的亚硝酸还原酶将亚硝酸盐分解，使亚硝酸盐的含量降低。
第2节 微生物的培养技术及应用
第1课时 微生物的基本培养技术
1.C 培养基有选择培养基、鉴别培养基和加富培养基等，可实现分离、鉴定微生物等不同目的，B正确；在培养尿素分解菌的培养基中，尿素是唯一的氮源，培养基中添加葡萄糖，葡萄糖作为碳源，C错误；微生物的营养物质主要包括碳源、氮源、水和无机盐等，D正确。
2.D 由表中成分可知，该培养基中未添加有机碳源，故此培养基可用来培养自养型微生物，A正确；分析表格可知，表中的营养成分共有三类，即水、无机盐、氮源，B正确；培养基中各成分的质量按照所培养的微生物的营养需要来确定，C正确；大肠杆菌是异养型生物，且不能固氮，因此培养大肠杆菌还需要添加有机碳源，D错误。
3.D 对无菌室、超净台可采用紫外线杀菌，对实验员可用酒精擦拭双手进行消毒，A错误；家庭制作酸奶时，要将容器煮沸消毒，鲜牛奶不进行灭菌，B错误；加入培养基中的指示剂和染料也需要灭菌，否则可能会污染培养基，C错误；灼烧灭菌法可杀死物体内外所有的微生物（包括微生物的营养体、芽孢和孢子），D正确。
4.D 为保证不被杂菌污染，应将培养皿、接种工具和培养基等进行灭菌，A不符合题意；酒精灯火焰附近可以形成一个相对无菌区，为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行，B不符合题意；周围物品可能含有杂菌，为防止污染，实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触，C不符合题意；对实验操作的空间，操作者的衣着和双手，需进行清洁和消毒，仅用纯净水洗干净不属于无菌技术，D符合题意。
5.C 从第二次划线开始，每次划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，C错误。
6.B 火焰烧瓶口并在火焰旁将培养基倒入灭菌培养皿，这是因为酒精灯火焰旁具有无菌区域，能够防止杂菌污染，①正确；菌种试管口在火焰上灼烧，这样能够防止杂菌污染，②正确；接种前灼烧接种环，能够杀死接种环上的杂菌，③正确；接种前培养皿不能在火焰上灼烧，灼烧会导致培养基熔化等，正确操作是接种时在酒精灯火焰旁进行操作，④错误；靠近火焰接种，这样能够防止杂菌污染，⑤正确。
7.D 接种环等常用灼烧灭菌法处理，吸管、培养皿等常用干热灭菌法处理，培养基及多种器材用湿热灭菌法处理，A错误；倒平板、接种需要在酒精灯火焰旁进行，而称量、溶化不需要在酒精灯火焰旁进行，B错误；倒好的平板需要冷却后使用，C错误。
8.D 在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间，这样做的目的是检测培养基是否灭菌合格，以确保实验的准确性，A正确；菌落是由一个细胞发育成的子细胞群体，只含有一种细菌，故在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有一种细菌，C正确；培养微生物的培养基需要先灭菌后再分装到培养皿，D错误。
9.B 菜籽粕中含有35％～45％的蛋白质，麸皮富含纤维素，菜籽粕与麸皮可为微生物提供碳源和氮源，A正确；对培养基灭菌应在接种前，若接种后再灭菌，菌种将被全部杀死，B错误；据图可知，与对照组相比，黑曲霉菌发酵菜籽粕中单宁含量最低，说明黑曲霉菌对单宁的去除效果最为理想，C正确；对照组为不接种微生物的固体培养基，目的是作为对照，D正确。
10.ACD 倒平板后不接种任何菌种直接进行培养观察有无菌落的出现，可以判断培养基有无污染，A正确；该菌为嗜热菌，应放置在其适宜的高温条件下培养，而不是37 ℃，B错误；图中嗜热菌在添加了乙、丙特殊营养物质的区域生长，故该菌需要的特殊营养物质是乙和丙，C正确；不同的菌种所需的特殊营养物质不同，利用生长图形法可用于某些菌种的筛选，菌种只会在提供其需要的生长因子的区域生长，D正确。
11.（1）扩展青霉有以核膜为界限的细胞核，枯草杆菌无 （2）液体 蔗糖 为扩展青霉的生长提供氮源和无机盐、维持培养液一定的渗透压 （3）第一区域划线结束，接种环灼烧后未冷却或划线未从第一区域末端开始 （4）消毒 相同病斑情况下，离病斑越远的部位，Pat含量越低 相同部位病斑越大，Pat含量越高
解析：（2）活化扩展青霉菌种使用的培养基成分中没有凝固剂，故根据物理性质划分该培养基属于液体培养基。（3）每次从上一次划线的末端开始，能使扩展青霉的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细胞繁殖而来的菌落。若划线的某个平板培养后第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，其他区域的划线上却均无菌落，可能是因为第一区域划线结束，接种环灼烧后未冷却或划线未从第一区域末端开始。（4）接种扩展青霉前，为了避免苹果上其他杂菌、病原微生物的污染，应对苹果进行消毒处理。由图可知，①号为腐烂部位，②③④⑤依次距离腐烂部位越来越远，推测相同病斑情况下，①号部位的Pat含量最高，离腐烂部位越远的果肉中Pat含量越低，相同部位病斑越大，Pat含量越高。
第2课时 微生物的选择培养和计数
1.B 根据题意可知，该土壤细菌是异养型微生物，要配制分离这一菌种的选择培养基需要含碳有机物作为碳源，尿素作为唯一氮源，B符合要求。
2.D 分离获得能降解石油的菌株的关键是用以石油作为唯一碳源的选择培养基进行培养，A、B正确；由于该培养基以石油作为唯一碳源，能在该培养基上生长的微生物可能是石油降解菌，有些以空气中二氧化碳为碳源的微生物也能在该培养基上生存，C正确；石油降解菌在被石油污染的土壤中含量较高，D错误。
3.D 出现杂菌污染的原因可能有培养基制备过程中被杂菌污染；接种过程中，无菌操作不符合要求；系列稀释时，无菌操作不符合要求等；使用涂布器时涂布不均匀会导致菌落分布比较集中，会导致培养基上出现的菌落数目减少，不会出现多种菌落。
4.D 稀释涂布平板法用到的涂布器进行酒精浸泡消毒后要在涂布平板前进行灼烧灭菌，①错误；平板划线法不需要对菌液进行梯度稀释，稀释涂布平板法需要对菌液进行系列梯度稀释，②正确；平板划线法不能计算出菌液中的活菌数，稀释涂布平板法可计算菌液中的活菌数，二者都可纯化微生物，③正确；如果划线操作不规范，平板划线的最后划线区域不一定会出现单菌落，④错误。
5.B 需要一个空白的培养基作对照，以判断培养基是否被杂菌污染，A错误；涂布器灭菌时，将蘸有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8～10 s再涂布，B正确；用记号笔标记培养皿时，应标记在皿底，C错误；当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，菌落密度过大会影响结果的准确性，D错误。
6.B 要分离硝化细菌，应该用以铵盐为唯一氮源的培养基，培养基中不能加入牛肉膏蛋白胨，A错误；平板划线法不能用于菌落计数，C错误；若空白对照组上长出了菌落，则说明培养基被污染了，实验数据无效，需重新实验，D错误。
7.C 根据分析可知，透明圈不显红色的原因是其中的纤维素已被分解，A错误；菌落①形成的透明圈直径与菌落直径之比最大，说明菌落①降解纤维素能力最强，B错误；根据题干信息不能判断图中菌落的微生物类型，可能是细菌也可能是真菌，C正确；图中培养基应以纤维素为唯一碳源，不可用牛肉膏、蛋白胨配制，D错误。
8.D 小明筛选出的菌落数明显比其他同学多，出现这种结果的可能原因是和其他同学取样的土壤不同，也有可能是培养基混入其他氮源或培养基被污染，A正确；要证明培养基是否受到污染，可将小明配制的培养基不加土样进行培养，即进行空白对照，B正确；当稀释倍数太小时，可能会出现菌落重叠而导致计数结果偏小，C正确；在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，可初步鉴定尿素分解菌，D错误。
9.AB 培养细菌时，应该将培养基的pH调至中性或弱碱性，A错误；该计数方法为稀释涂布平板法，由于当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，故计数结果比显微镜直接计数法小，B错误；若以丙草胺作为唯一氮源，则只有具有降解丙草胺能力的降解菌能够存活，故可以提高降解菌的浓度，C正确；根据5号试管的数据可知，每克土壤中菌株数为（168＋175＋167）÷3×105×100＝1.7×109个，D正确。
10.AC 完全培养基上无法合成氨基酸的也可以生长，野生型的能在基本培养基培养，①②④为完全培养基，③为基本培养基，A错误；紫外线可以提高突变的频率，A操作的目的是提高突变菌株的浓度，扩大培养，B正确；B操作是将菌液滴加到培养基表面，再用涂布器将菌液均匀地涂布在②表面，C错误；从图中可看出，D在基本培养基中无法生长，在完全培养基中可生长，说明D是氨基酸缺陷型菌落；故经C过程影印及培养后，可从④培养基中挑取D菌落进行纯培养，D正确。
11.（1）稀释 （2）以除草剂为唯一氮源的固体培养基 前 湿热灭菌 （3）N2 该除草剂 （4）稀释涂布平板法 1.6×109
解析：（3）根据题中信息“该除草剂的培养基不透明”，则可知无透明带菌落利用的氮源并不是除草剂，而是空气中的N2，有透明带菌落利用的氮源为该除草剂。（4）接种微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法，其中稀释涂布平板法还可用于对微生物进行计数。在4个平板培养基上分别接种稀释倍数为106的土壤样液0.1 mL，培养后菌落数目分别为155、160、176、149，则每毫升原土壤样液中上述微生物数量为（155＋160＋176＋149）÷4÷0.1×106＝1.6× 109（个）。
第3节 发酵工程及其应用
1.C 在发酵过程中微生物代谢、繁殖会消耗营养成分，因此需要向装置中添加必需的营养成分，C错误。
2.B 谷氨酸棒状杆菌在扩大培养时，培养基中营养物质的浓度要合适，若浓度过高，不利于谷氨酸棒状杆菌的大量繁殖，A错误；谷氨酸棒状杆菌是一种好氧菌，因此培养基中需严格控制溶解氧、通气量等发酵条件，以保证谷氨酸棒状杆菌代谢正常进行，B正确；谷氨酸发酵过程中，当谷氨酸合成量过多时，就会抑制谷氨酸脱氢酶的活性，从而使谷氨酸的合成过程中断，因此需要及时地排出谷氨酸，才可以解除此抑制作用，有利于谷氨酸的合成和产量的提高，C错误；谷氨酸发酵过程中，当发酵液的pH为酸性时，谷氨酸棒状杆菌易形成谷氨酰胺和N-乙酰谷氨酰胺，D错误。
3.B 培养基要在菌种确定之后，再选择原料制备。而且在生产实践中，培养基的配方要经过反复试验才能确定。
4.B 单细胞蛋白是指以淀粉或纤维素的水解液、制糖工业的废料等为原料，通过发酵获得的大量的微生物菌体，B错误。
5.B 食品添加剂不仅可以增加食品的营养，改善食品的口味、色泽和品质，有时还可以延长食品的保存期，B错误。
6.B 红酸汤制作过程中要密封发酵，利用的微生物主要是厌氧菌，而醋酸菌是好氧菌，A错误；装坛时加入成品红酸汤是为了增加发酵菌种的数量，B正确；装坛时坛口留有一点空间而不装满的目的是防止发酵后液体外溢，C错误；如果发酵时间过长，会影响口感，D错误。
7.D 用CaCl2处理面包霉，改变其细胞膜的通透性，可以使氨基酸a和b都过量，从而抑制中间产物的分解，不能大量生产氨基酸b，A不符合题意；在反应物中增加面包霉生长因子的含量，并加大面包霉的接种量不能大量生产氨基酸b，B不符合题意；人工诱变，选育出能产生抑制酶③活性的面包霉，不能大量生产氨基酸b，C不符合题意；通过人工诱变，选育出不能合成酶②的面包霉，可以使中间产物不能生成氨基酸a，进而大量产生氨基酸b，D符合题意。
8.D 传统酿造工艺和两步发酵法生产米酒，糖类未耗尽时，酵母菌的发酵过程也会停止，原因可能是pH降低和酒精含量增多，对发酵起抑制作用，从而导致酵母菌发酵停止，D错误。
9.ACD 焙烤是为了利用高温杀死大麦种子胚并保持酶的活性，不是为了灭菌，B错误。
10.ABD 主发酵过程中还原糖主要用于无氧呼吸产酒精，同时无氧呼吸产生的CO2会使pH下降，C错误；发酵过程中要适时往外排气，后发酵时期由于糖类物质不充足，产生的气体变少，可以延长排气时间间隔，D正确。
11.（1）麦芽糖 氨基酸 （2）有氧 （3）无氧呼吸 酒精 （4）复合蛋白酶和中性蛋白酶 2
解析：（2）酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下能大量增殖，故扩培阶段需要通入无菌空气保证酵母菌的有氧呼吸。（3）酵母菌在无氧的条件下，进行酒精发酵，通过无氧呼吸，将葡萄糖分解成酒精和CO2及各种风味的代谢物。（4）根据总可溶性氮含量的变化可知，中性蛋白酶和复合蛋白酶对蛋白质的分解效果比较好。根据曲线的变化可知，反应时间至少要进行2 h。
第2章 细胞工程
第1节 植物细胞工程
第1课时 植物细胞工程的基本技术
1.D 玉米种子长成一棵植株没有体现植物细胞具有全能性，D错误。
2.C 培养基中生长素和细胞分裂素的浓度及比例影响植物细胞的发育方向，故要控制好培养基中生长素和细胞分裂素的浓度及比例，B正确；植物组织培养时，需要对外植体消毒，既要杀死外植体表面的微生物，又要减少消毒剂对细胞的伤害，不能对其进行灭菌处理，C错误；有些植物激素是进行极性运输的，即从形态学上端运输到形态学下端，故接种外植体到培养基时，需要注意形态学方向，不可倒插，D正确。
3.D 过程①获得的原生质体不能悬浮在质量分数为30％的蔗糖溶液中，质量分数为30％的蔗糖溶液可导致原生质体失水皱缩甚至死亡，A错误；过程②为再分化，需提高细胞分裂素的比例以促进芽的分化，B错误；过程③可以表示诱导根的分化形成幼苗，此时细胞壁已经形成，C错误；原生质体虽无细胞壁，但含有细胞核等结构，即含有生物体全部的遗传信息，原生质体仍保持细胞的全能性，D正确。
4.B 植物组织培养的基本步骤是“消毒—取材—愈伤组织培养—出芽—生根—移栽”，B错误。
5.D 培养的不同阶段，对主要营养物质和激素的需求不同，所以培养过程中要及时调整各种营养物质、激素的比例，及时更换培养基，否则会导致外植体死亡，D错误。
6.A 根据题意可知，春油菜具有萝卜的雄性不育特性，因此春油菜作为母本用于杂交实验无须人工去雄操作，A正确；要先去除油菜细胞与萝卜细胞的细胞壁获得原生质体，然后诱导融合，之后还要再生出新的细胞壁才能形成杂种细胞，B错误；通过植物体细胞杂交技术获得的杂种细胞培育成新植物体属于无性生殖，C错误；春油菜染色体数是油菜和萝卜染色体数的总和，D错误。
7.D ①过程为去除细胞壁的过程，植物体细胞杂交的实质是植物原生质体的融合，所以在融合前需要使用酶解法（纤维素酶和果胶酶）去除植物的细胞壁，获得植物的原生质体，为了获得植物的原生质体，操作一般在等渗溶液或略大于细胞液浓度的溶液中进行，维持去掉细胞壁的原生质体的形态，A正确；利用聚乙二醇、高Ca2＋—高pH融合法等化学方法可实现a、b细胞融合，B正确；融合后的杂种细胞再生出新的细胞壁是原生质体融合完成的标志，故可利用质壁分离现象鉴定细胞壁是否再生，C正确；图中①至⑤过程表示植物体细胞杂交，涉及细胞的有丝分裂和分化，但不涉及有性生殖过程的减数分裂，D错误。
8.C 植物细胞壁的主要成分为纤维素和果胶，用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，体现了酶的专一性，A正确；“白菜—甘蓝”的产生过程是先将两种植物的原生质体融合，形成杂种细胞，再通过植物组织培养形成杂种植株，B正确；植物体细胞杂交属于无性生殖，因为没有经过减数分裂和受精作用，C错误；利用植物体细胞杂交技术培育“白菜—甘蓝”的过程，不进行减数分裂，不会发生同源染色体联会现象，D正确。
9.D 白菜和甘蓝都是二倍体植物，二者的体细胞杂交后培育成的“白菜—甘蓝”杂种植株属于异源四倍体，该杂种植株的体细胞中，有2个染色体组来自白菜，有2个染色体组来自甘蓝，因此“白菜—甘蓝”是可育的，能结子，A错误；愈伤组织是杂种细胞经过脱分化形成的，是一种高度液泡化的呈无定型状态的薄壁细胞，没有高度分化，B错误；上述过程包括去除细胞壁、原生质体融合、植物组织培养等过程，其结果是形成“白菜—甘蓝”幼苗，因此整个过程中包含有丝分裂和细胞分化，没有减数分裂过程，C错误。
10.D 诱导原生质体融合的障碍是细胞壁，所以通过纤维素酶和果胶酶可以去除植物的细胞壁，A正确；用化学的方法可以诱导原生质体融合，例如PEG诱导，B正确；细胞工程通过细胞器、细胞或组织水平上的操作，有目的地获得特定的细胞、组织、器官、个体或其产品，所以非对称融合属于细胞工程，C正确；非对称融合过程中部分染色体丢失（断裂），所以会降低植物细胞的全能性，D错误。
11.C 诱导植物细胞原生质体融合的方法：电融合法、PEG融合法，B正确；先用一定剂量的紫外线照射红豆杉原生质体，破坏部分染色体，所以红豆杉染色体＜24条，融合细胞中染色体数为两种植物细胞染色体数目之和：13～36的为杂种细胞，24条的可能是杂种细胞，C错误；杂种细胞中两种植物细胞的染色体间排斥较为明显，所以应在能合成紫杉醇的杂交细胞中选择红豆杉染色体数较少的细胞进行培养，这样染色体间的排斥较弱，D正确。
12.CD 消毒的原则是既要杀死材料表面的微生物，又要减少消毒剂对细胞的伤害，故外植体消毒可先用体积分数为70％的酒精处理30 s，无菌水清洗后再用次氯酸钠溶液处理30 min，A错误；过程③拟原球茎的长大，涉及的生物学原理是细胞增殖，拟原球茎经有丝分裂而不断生长，B错误；过程②为脱分化，固体培养基中生长素与细胞分裂素比例适中有利于拟原球茎（类似愈伤组织）的形成，C正确；据图2可知，生物碱含量与PLBs重量呈正相关，PLBs在光照下的重量明显大于在黑暗中的重量，说明光照条件有利于PLBs的生长，D正确。
13.CD 病毒可以诱导动物细胞融合，但不是诱导植物原生质体融合的方法，A错误；若将融合的原生质体置于无菌水中，由于无细胞壁的限制，原生质体可能会吸水涨破，B错误；愈伤组织无色，叶肉细胞因为含有叶绿体而呈绿色，其中供体细胞特有的结构是叶绿体，可通过观察叶绿体的有无，即有无绿色作为初步筛选杂种细胞的标志，C正确；由图可知，杂种植株核DNA与早花柠檬细胞核DNA完全相同，而杂种植株的线粒体DNA与山金柑细胞的线粒体DNA完全相同，说明杂种植株的核基因来自早花柠檬，而线粒体基因来自山金柑，D正确。
14.（1）生殖隔离 （2）纤维素酶和果胶 （3）细胞膜的流动性 聚乙二醇（PEG） 高Ca2＋—高pH （4）植物细胞的全能性 脱分化、再分化 （5）碘乙酰胺 （6）（异源）四 可育
解析：（5）用X射线处理会使细胞失去分裂能力，用碘乙酰胺处理会使细胞内的酶失活而抑制生长，已经对“中华猕猴桃”用X射线处理，需对“美味猕猴桃”用碘乙酰胺处理，使它们自身融合的原生质体无法生长，只有当两个不同种的原生质体融合时才能生长，筛选得到杂种细胞F，以便最终能获得优良杂种植株H。（6）若两种猕猴桃都是二倍体，则诱导形成的杂种细胞中会有四个染色体组，因此杂种植株为异源四倍体。因为杂种细胞内的同源染色体可以正常联会产生配子，所以理论上该杂种植株可育。
15.（1）打破生殖隔离，实现远缘杂交育种 （2）高 渗透压 （3）细胞膜的流动性 质量分数为30％的PEG溶液诱导原生质体融合效果最好，高于或低于30％均不利于获得融合的原生质体 （4）图见解析图 （5）培养过该真菌 该真菌能产生杠杆激素（且不被高温破坏）（或该真菌能产生具有杠杆激素作用的物质）
解析：（2）原生质体放在低渗溶液中，会吸水涨破，放在高渗溶液中会失水皱缩，利用酶解法去除细胞壁时，应严格控制使用种类、浓度、温度和处理时间等条件，以提高原生质体产量并降低破损率，以获得存活质量较高的原生质体。原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇来保持一定的渗透压，以维持原生质体的形态和活性。（3）原生质体融合的原理是细胞膜具有一定的流动性，已知两个原生质体融合效果较好时会呈现哑铃型细胞。实验结果显示：质量分数为30％的PEG溶液诱导原生质体融合效果最好，高于或低于30％均不利于获得融合的原生质体。（4）已知待测菌株的菌丝体接种于同一培养基内，若两菌丝体间长出“拮抗线”，说明二者的遗传关系较远。借助此原理，若要快速筛选出一株与两亲本菌株遗传关系较远的融合菌株X，可接种菌丝如下：
（5）根据后面的信息“在MS培养基中”，所以应该选择MS培养基，纯化的方法是平板划线法；根据题干信息“在组织培养中发现，有一个MS培养基中没有加入杠杆激素的培养瓶中也长出了与加有杠杆激素的培养瓶中一样的愈伤组织，瓶中还长出了一些某种真菌的菌落”，就出现该现象的原因作出的假设是“该种菌产生了有杠杆激素作用的物质”；所以可以增设一组实验，在MS培养基中加入经高压蒸汽灭菌处理过的该种真菌或经高压蒸汽灭菌处理过的培养过该真菌的培养基；如果产生了正常的愈伤组织，则支持该假设。
16.（1）绿色叶片和白色花瓣的细胞具有全能性，在一定条件下能发育成完整的植株 （2）葡萄糖、果糖 具有完整的细胞核 （3）细胞分裂素、生长素 脱分化 （4）不能 对杂合子的植株来说，其体细胞的基因型相同，而花粉粒的基因型与体细胞的基因型不同，用花粉粒进行组织培养得到的花卉的基因型不同于原植株
解析：（2）用细胞作为材料进行培养获得幼苗，细胞必须具有完整的细胞核，才具有发育为完整个体的一整套遗传信息。（3）影响植物组织培养的两种主要激素是细胞分裂素和生长素。
第2课时 植物细胞工程的应用
1.C ③④过程中基因的选择性表达导致了细胞再分化，C错误。
2.C 花粉细胞培育成单倍体植株，培育的原理是花粉粒细胞具有全能性，其技术是植物组织培养，A正确；图中四种培养基均为固体培养基，②③过程除培养基成分与含量不同外，对光照的需求也不同，C错误。
3.D 植物细胞培养技术的条件可以人为控制，具有快速、高效，几乎不受季节、天气等条件的限制的特点，B正确；人参是一种名贵中药材，其有效成分主要是人参皂苷，利用生物反应器悬浮培养人参细胞，提取人参皂苷，用于生产保健药品和美容护肤用品，C正确；植物细胞培养需要在一定的温度、pH等条件下进行，也需要进行无菌操作，D错误。
4.D B→C为脱分化过程，该过程中细胞的全能性增大，C→E为再分化过程，该过程中细胞的全能性降低，A正确；C试管中形成的是愈伤组织，愈伤组织由高度液泡化的薄壁细胞组成，B正确；植株F为单倍体植株，高度不育，因此一般不能直接用于扩大种植，C正确；植株A是正常的二倍体植株，而植株F是经花药离体培养获得的单倍体植株，两者体细胞中的染色体组数不同，D错误。
5.C 紫草宁是紫草细胞培养过程中产生的次生代谢物，但一般认为不是紫草细胞生长和生存所必需的，A错误；愈伤组织分化程度很低，B错误；愈伤组织的诱导受植物激素配比的影响，也受营养物质和光照等因素的影响，D错误。
6.A 图中愈伤组织和辣椒素高产细胞系的获得，并没有培养成完整植株或分化成其他各种细胞，故没有体现植物细胞的全能性，A错误；②过程是再分化，该过程中需用适宜配比的生长素和细胞分裂素溶液处理，C正确；将愈伤组织用酶解法分离成单细胞时，需要分解植物细胞之间的成分，常用的酶是果胶酶和纤维素酶，D正确。
7.B “手指植物”是人们通过植物组织培养技术培养获得的，故培养基能够满足其生长发育的需求，不需要再额外补充，A正确；“手指植物”为个体水平，其培育过程体现了植物细胞全能性，B错误；植物组织培养过程中，需要经历脱分化形成愈伤组织，再分化形成完整植株，C正确；植物组织培养过程中，没有经过两性生殖细胞的结合，属于无性生殖，故“手指植物”的培育方式属于无性繁殖，D正确。
8.ABC 顶端分生组织几乎不含病毒，因此过程A中取顶芽细胞进行体细胞杂交有利于获得脱毒苗，A正确；过程A可使用纤维素酶和果胶酶处理植物细胞获得原生质体，过程B可使用PEG（聚乙二醇）诱导原生质体融合，B正确；过程C中只有融合细胞活性部位互补，具有完整的细胞结构，才能正常生长，然后将获得的杂种细胞进行植物组织培养获得杂种植株，C正确；操作过程中生物材料、培养环境都要严格地消毒，而培养基需要经过高压蒸汽灭菌，D错误。
9.BCD 品种丁是三倍体西瓜，高度不育，所以其亲本品种丙和品种甲存在生殖隔离，属于不同物种，A正确；品种丁不能结出有子果实的原因是品种丁在进行减数分裂过程中，同源染色体联会紊乱，不能产生正常配子，B错误；图中①和④过程所用试剂为适宜浓度的秋水仙素，⑤过程所用试剂是适宜浓度的生长素或生长素类植物生长调节剂，C错误；由品种甲和品种乙培育出品种戊的原理有基因重组、植物细胞的全能性和染色体数目变异，D错误。
10.（1）酒精和次氯酸钠 （2）蔗糖浓度下降，pH 降低 渗透压 （3）秋水仙素或低温 （4）物理或化学 （5）在特定时间和空间条件下，细胞中的基因选择性表达
解析：（1）图1中，植物组织培养过程应该在无菌的条件下进行，因此过程①所用的外植体需用酒精和次氯酸钠消毒，以防止杂菌污染。（2）据图2分析可知，外植体离体培养过程中需要消耗蔗糖，蔗糖浓度下降，pH下降会影响酶的活性，且愈伤组织细胞不能进行光合作用，对物质的合成小于分解，故细胞干重下降；植物组织培养过程中，蔗糖既能提供能源也能调节细胞渗透压。（3）使用秋水仙素或低温诱导都可以抑制纺锤体形成，诱导细胞染色体数目加倍，形成多倍体。（4）在植物体细胞杂交过程中，利用酶解法获得有活力的原生质体，然后再用物理或化学方法诱导使其融合，最后选择能够高效合成紫杉醇的杂种细胞进行培养。（5）红豆杉的形成层在生长发育过程中并不能合成紫杉醇，这是由于在特定时间和空间条件下，细胞中的基因选择性表达。
第2节 动物细胞工程
第1课时 动物细胞培养
1.A 动物细胞体外培养要求环境无菌、无毒；在细胞培养液中需添加血清等一些天然成分；培养温度一般与动物体温相近；动物细胞培养还需要O2和CO2，O2是细胞代谢所必需的，CO2可维持培养液的pH。
2.D 大多数动物细胞增殖需要贴附于某些基质表面上才能进行，贴壁生长的细胞存在接触抑制的现象，少数可以进行悬浮培养，A、B正确；由动物细胞培养的过程可知，动物细胞培养先进行原代培养再进行传代培养，C正确；传代培养时需要收集细胞，悬浮细胞可以直接利用离心法收集，贴壁生长细胞需要用胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理后收集，D错误。
3.D 该技术属于动物细胞培养，原理是细胞增殖，而植物组织培养的原理是植物细胞的全能性，两者不同，A错误；此技术即动物细胞培养需要适宜的温度（36.5±0.5 ℃）和pH（7.2～7.4），B错误；由于技术条件等的制约，目前不能将动物体细胞培养为完整个体，且牙髓干细胞属于分化程度较高的细胞，不能分化为任何一种类型的细胞，C错误。
4.C 需将培养室置于含适宜浓度 CO2的培养箱中，以维持培养液的pH，A错误；一开始将肿瘤细胞加入膜上铺有基质胶的上室中，一段时间后在下室发现肿瘤细胞，说明肿瘤细胞可分泌水解酶将基质胶中的成分分解后进入下室，B错误；上室含无血清培养液，下室含血清培养液，加入上室的肿瘤细胞一段时间后出现在下室中，说明血清培养液中含有某些因子促使肿瘤细胞向营养高的下室移动，C正确；由题意可知，可通过计数下室的细胞量即可反映细胞的侵袭能力，若进入下室的肿瘤细胞数量越多，说明肿瘤细胞的侵袭能力越强，但不能说明肿瘤细胞的分裂能力越强，D错误。
5.D 离体动物细胞培养需要无菌无毒的环境，需要对实验小鼠进行消毒处理，A正确；乙表示用胰蛋白酶处理皮肤组织，使其分散成单个皮肤细胞，获得细胞悬液后再进行细胞培养，B正确；丙表示原代培养，培养过程中会出现贴壁生长和接触抑制现象，此后用胰蛋白酶处理后获得细胞悬液，再进行传代培养，C正确；丁是传代培养过程，大部分会出现贴壁生长，因而不能直接离心获得细胞悬液，D错误。
6.D ES细胞存在于早期胚胎中，能分化成任何一种类型的细胞，并进一步形成机体的所有组织和器官甚至生物个体，A、B错误；iPS细胞是分化的体细胞在体外经人工诱导培养形成的诱导多能干细胞，在特定条件下可诱导分化成各种组织细胞，C错误，D正确。
7.B 诱导iPS细胞分化的实质是基因的选择性表达，B错误。
8.D 动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理分散成单个细胞，A正确；由题图可知，过程②转入的相关因子会影响体细胞内基因的表达，使细胞恢复未分化状态，B正确；细胞培养成功的关键条件是培养基（液）、培养用具及培养环境无菌无毒，故过程③所用培养液和所有培养用具需进行灭菌处理，C正确；过程④为细胞再分化，其实质是基因的选择性表达，不改变基因种类，故获得的神经细胞和肌细胞含有的基因种类相同，D错误。
9.A 成体干细胞具有组织特异性，只能分化成特定的细胞或组织，iPS细胞类似胚胎干细胞，可以分化成各种细胞或组织，A错误；在体外培养动物细胞，需要满足相应的条件，所以肺类装配体的培养需要适宜的营养、温度、pH等基本条件，B正确；培养肺类装配体时需定期更换培养液以便清除代谢废物等，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害，C正确；由题图可知，肺类器官A和B是由肺上皮干细胞分化而来，细胞分化的实质是基因的选择性表达，所以肺类器官A和B细胞中的DNA相同，RNA和蛋白质存在差异，D正确。
10.C 初代培养过程中，若细胞有丝分裂过程复制出现差错，也会发生基因突变，A错误；细胞分裂13次以上时，大部分细胞老化、死亡，少部分细胞获得无限增殖的能力，B错误；传代培养时，部分细胞遗传物质改变，具有癌变细胞的特点，可以在培养条件下无限制的传代下去，C正确；无限细胞系能够无限增殖，适于作为疫苗的宿主细胞，D错误。
11.BC 根据题意，为治疗皮肤大面积烧伤的患者，选取其自身细胞进行体外培养获得健康皮肤，皮肤中成纤维细胞或皮肤干细胞分裂能力强、易于体外培养，通常选取这些细胞进行体外培养更容易成功，A正确；用胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理组织使其分散成单个细胞，可以使单个细胞与培养液充分接触，有利于细胞充分吸收培养液中的营养物质，并排出代谢废物，B错误；动物细胞培养所需的气体主要有O2和CO2，O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH，因细胞呼吸产生的CO2不足以维持培养液的pH，所以才需要提供5％的CO2，C错误；癌细胞在营养充足的条件下具有无限增殖的能力，不会出现动物细胞培养过程中出现的接触抑制现象，D正确。
12.ABD 对照组和实验组均设置了三个孔，符合平行重复原则，最终求每个组的平均值，可以减少实验误差，降低偶然因素对实验结果的影响，A正确；根据单一变量原则可知，对照组中加入的溶液是和实验组等体积、相同浓度的无菌二甲基亚砜，以排除溶剂对实验结果的干扰，C错误；根据实验结果可知，最终细胞的数量：对照组＞药物Y实验组＞药物X实验组，说明加入药物X的实验组存活的癌细胞数是最少的，即可以初步判断药物X的抗癌效果较好，D正确。
13.BC 动物细胞培养时，需要用胰蛋白酶处理，因此实验中要控制胰蛋白酶溶液浓度和处理时间，以免损伤细胞；6 d时，新产生的细胞数等于死亡细胞数，6 d后，新产生的细胞数小于死亡细胞数，活细胞密度降低。
14.（1）原代培养 OB （2）合成 补充合成培养基中缺失的成分 （3）增殖 脱分化和再分化
解析：（1）人们通常将动物组织处理后的初次培养称为原代培养，在图中是OB段。（2）在动物细胞培养时，将细胞所需的营养物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基称为合成培养基。通常还需要在培养基中加入适量血清等一些天然成分，血清作为天然培养基的作用是补充合成培养基中缺失的成分，有利于细胞的正常生长与增殖。（3）动物细胞培养和植物组织培养过程中，二者除了都需要增殖外，植物细胞不同于动物细胞的是还要进行脱分化和再分化。
15.（1）蛋白质 不能 多数动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4，胃蛋白酶在此环境中变性失活
（2）清除细胞代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害 对培养液和所有培养用具进行灭菌处理以及在无菌环境下进行操作 （3）基因的选择性表达 避免了免疫排斥问题 （4）解决不育问题
解析：（1）在对成纤维细胞进行培养时，常用胰蛋白酶处理使之分散成单个细胞，用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。多数动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性，而胰蛋白酶在此环境中活性较高，因此胰蛋白酶适宜用于细胞培养。（2）在培养iPS细胞的过程中，培养基中应含有细胞所需的各种营养物质，并定期更换培养液。定期更换培养液的目的是清除细胞代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。为了给培养物提供无菌环境，可进行的操作是对培养液和所有培养用具进行灭菌处理以及在无菌环境下进行操作。（3）细胞分化是基因选择性表达的结果。若iPS细胞来源于病人自身体细胞的诱导，再将其分化出的细胞移入患者体内，由于自体细胞组织相容性抗原相同，故可以避免免疫排斥反应。（4）如果诱导iPS细胞定向分化为原始生殖细胞，可以用该技术解决不育问题。
16.（1）分裂能力强，分化程度低 吸收氧气和营养物质、排出代谢物 （2）抑制细菌的生长 合成 血清
（3）④染色体形态和数量 丙组淋巴细胞染色体出现异常，而丁组（或者甲、乙、丁组）的淋巴细胞正常 （4）肝脏培养液、肝脏小块（独自）
解析：（1）幼龄鼠的肝脏分裂能力强，分化程度低，更容易培养。肝脏切成小薄片可以增大与外界环境的接触面积，因此肝脏小片放在培养基中就可以扩大与培养基的接触面积，利于吸收氧气和营养物质、排出代谢物。（2）动物细胞培养需要无菌、无毒的环境，抗生素可以杀菌，抑制细菌的生长。这种将细胞所需的营养物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基，称为合成培养基。因为合成培养基中可能缺少细胞生长所需要的一些物质，通常需要加入血清等一些天然成分。（3）由题目中吉姆萨染液（使染色体着色），可知在显微镜下观察染色体的形态和数目。因为有机物X对淋巴细胞的毒害作用，当出现丙异常，而丁组（或者甲、乙、丁组）的淋巴细胞正常，说明对细胞的毒害是物质X引起的，同时加入肝脏小块和X时，细胞正常，说明肝脏小块对有机物X有解毒作用。（4）由表格可知，甲组只含有肝脏培养液，乙组加入了肝脏小块，甲乙设置对照的目的是排除肝脏培养液、肝脏小块（独自）对实验结果的影响。
第2课时 动物细胞融合技术与单克隆抗体
1.B 植物体细胞杂交的原理是细胞膜具有流动性和植物细胞一般具有全能性，动物细胞融合的原理是细胞膜具有流动性，A错误；电融合法或聚乙二醇（PEG）融合法既可诱导动物细胞融合，也可诱导植物原生质体融合，B正确；植物原生质体融合完成的标志是杂种细胞再生出细胞壁，动物细胞融合完成的标志是形成融合细胞核，C错误；植物体细胞杂交的目的是产生杂种植株，动物细胞融合可用于大量生产分泌蛋白等，D错误。
2.A 若a细胞和b细胞是植物细胞，需先去细胞壁获得原生质体后再诱导融合，A正确；若a和b为二倍体，则c为异源四倍体，B错误；c细胞的形成，与a、b细胞膜具有流动性有关，C错误；c细胞将选择性表达a细胞和b细胞中的基因，D错误。
3.D 单克隆抗体是由能产生特定抗体的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞分泌的，A错误；单独的效应B细胞有产生抗体的能力，但没有无限增殖的能力，因此在体外培养浆细胞是不能得到大量的单克隆抗体的，B错误；单克隆抗体制备需要细胞融合并筛选特定的杂交瘤细胞，原代培养和传代培养的区别并不是遗传物质的改变与否，传代培养的细胞遗传物质不一定改变，C错误；单克隆抗体能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，因此利用该单克隆抗体与SARS病毒核衣壳蛋白特异性结合的方法可诊断出病毒感染者，D正确。
4.A 用特定培养基培养细胞的目的是筛选出既能大量增殖、又能产生特定抗体的杂交瘤细胞，因此除了杂交瘤细胞，其他的细胞都不能在此培养基上生存。所以在这种培养基上不能存活、增殖的细胞有：①B淋巴细胞，②小鼠骨髓瘤细胞，③B淋巴细胞自身融合细胞，④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞。故A符合题意。
5.B 一种灭活病毒可能存在多种抗原，因此注射一种灭活病毒可使小鼠体内产生多种B淋巴细胞，A正确；过程②形成的两两融合细胞包括同种细胞融合细胞和异种细胞融合细胞，即过程②还可以形成B淋巴细胞自身融合细胞、骨髓瘤细胞自身融合细胞，B错误；过程③可借助抗原—抗体杂交法进行特定杂交瘤细胞的筛选，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞，C正确；经过程③筛选获得能产生所需抗体的杂交瘤细胞，再经过程④克隆获得的全部杂交瘤细胞都只能产生同一种抗体，D正确。
6.A 要获得抗 CD22单克隆抗体，步骤①应该注射 CD22蛋白（CD22抗原），步骤⑤是将分泌抗 CD22抗体的杂交瘤细胞注入小鼠体内培养，以获得大量单克隆抗体，A错误；步骤②所用的 SP2/0细胞是骨髓瘤细胞，特点是能在体外无限增殖，B正确；根据抗原—抗体杂交原理，应该用CD22蛋白检测其中是否含抗 CD22蛋白的抗体，因此，步骤④中需加入CD22蛋白进行专一抗体检测，C正确；步骤⑥提取的抗CD22 抗体，能与抗小胶质细胞表面标志蛋白 CD22特异性结合，可抑制神经退行性疾病的发生，D正确。
7.D 该单克隆抗体不能杀伤肿瘤细胞，而是与药物结合，将药物带到特定部位，利用药物杀伤肿瘤细胞，D错误。
8.C 制备单克隆抗体过程中需要骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合形成杂交瘤细胞和培养杂交瘤细胞，A正确；该过程需要多次筛选，第一次筛选是过程③，筛选出初次免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合得到的杂交瘤细胞；第二次筛选是过程④，筛选出能产生所需抗体的单克隆杂交瘤细胞；第三次筛选是过程⑥，筛选出再次免疫的B淋巴细胞和单克隆杂交瘤细胞融合得到的单克隆杂交—杂交瘤细胞；第四次筛选是过程⑦，筛选出能产生双特异性单克隆抗体的单克隆杂交—杂交瘤细胞，B正确；过程⑤与过程①均是对小鼠注射特定抗原，目的相同，都是获得相应的B淋巴细胞，C错误；该双特异性单克隆抗体能同时识别癌胚抗原和长春碱，故通过该技术合成的双特异性单克隆抗体的灵敏度更高，D正确。
9.B 分析题干信息：Ⅰ保留X、11号染色体，Ⅱ保留2、11号染色体，具有芳烃羟化酶活性，Ⅲ保留X、11、17号染色体，具有胸苷激酶活性，Ⅰ、Ⅲ都有磷酸甘油酸激酶活性，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ均有乳酸脱氢酶活性，所以支配芳烃羟化酶合成的基因位于2号染色体上，支配胸苷激酶合成的基因位于17号染色体上；支配磷酸甘油酸激酶合成的基因位于X染色体上；支配乳酸脱氢酶合成的基因位于11号染色体上。动物细胞融合过程中，可以利用灭活的仙台病毒或聚乙二醇作诱导剂促进细胞融合，A正确；细胞Ⅲ中保留了人的X、11、17号染色体，故不会是鼠—鼠融合细胞，B错误；根据分析可知，芳烃羟化酶基因位于2号染色体上，乳酸脱氢酶基因位于11号染色上， 胸苷激酶基因位于17号染色体上，磷酸甘油酸激酶基因位于X染色体上，C、D正确。
10.D 根据单一变量原则可知，应设置不加单克隆抗体的巨噬细胞和肿瘤细胞的共培养体系为对照，A错误；肺癌、结肠癌等肿瘤细胞有内质网和高尔基体，参与细胞膜上糖蛋白的形成，但癌细胞表面糖蛋白减少，肺癌、结肠癌等肿瘤细胞的内质网和高尔基体不会很发达，B错误；过程②得到的是杂交瘤细胞，过程③得到的是既能产生抗CD47抗体又能无限增殖的杂交瘤细胞，C错误；抗CD47的单克隆抗体可以解除CD47对巨噬细胞的抑制作用，没有抗体抑制，CD47对巨噬细胞有抑制作用，因此若对照组中吞噬细胞的吞噬指数显著低于实验组可验证上述推测，D正确。
11.D 杂交瘤细胞染色体丢失可能引起细胞发生变异，进而导致抗体产生能力下降，A正确；脾、淋巴结和扁桃体是免疫细胞集中分布的场所，因此在制备单克隆抗体的过程中，B细胞可以来源于抗原刺激后的动物的淋巴结和脾脏等，B正确；由图示分析可知：在HAT选择培养基中，骨髓瘤细胞无法存活，C正确；本实验中EBV的作用是使B细胞染色体核型更稳定，而不是刺激B细胞分化成浆细胞产生抗体，所以该杂交瘤细胞不具有产生抗EBV抗体的能力，D错误。
12.ACD ①过程的原理和植物原生质体融合的原理基本相同，都是细胞膜的流动性，A正确；经①过程形成的杂交瘤细胞不一定都能产生特定抗体，需要经过抗体阳性检测筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞，B错误；②过程需要采用抗体阳性检测筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞，然后进行克隆化培养（包括体内培养和体外培养），C正确；癌细胞是抗原，抗体能与抗原发生特异性结合，因此，抗体的靶向作用使③过程具有高度特异性，D正确。
13.AB 将抗原A注入小白兔体内的目的是刺激小白兔发生体液免疫，从而获得已免疫的B淋巴细胞，A错误；在第五次中，小白兔Y的效价最大，所以最适合用于制备B淋巴细胞的是第五次免疫后的小白兔Y，B错误；骨髓瘤细胞与B淋巴细胞的融合常使用灭活的病毒进行促融，也可用物理或化学的方法进行促融，C正确；杂交细胞需要经过多次筛选才可获得只分泌抗A抗体的杂交瘤细胞，第一次筛选可获得杂交瘤细胞，第二次筛选可获得只分泌抗A抗体的杂交瘤细胞，D正确。
14.（1）Ab1、Ab2、Ab3、Ab4 能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合 （2）（一定的）流动性
3 （3）杂交瘤细胞 能产生所需抗体的杂交瘤细胞 选择 （4）单克隆抗体上连接抗癌药物 可在原位杀死癌细胞，还不损伤正常细胞，且用药剂量小，毒副作用小 （5）动物细胞融合 动物细胞培养
解析：（1）据题图可知，向小鼠注射包含多种抗原决定簇的抗原后，所获得的免疫抗血清实际上是含有Ab1、Ab2、Ab3、Ab4的混合物，这种方法制备的多克隆抗体产量低、纯度低；与多克隆抗体相比，单克隆抗体突出的优点是能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，并能大量制备。（2）题图中选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞，说明细胞膜具有一定的流动性；如果仅考虑细胞的两两融合，其融合细胞有B淋巴细胞自身融合细胞、骨髓瘤细胞自身融合细胞、杂交瘤细胞3种类型。（3）题图中两次筛选的目的不同，其中筛选①的目的是筛选出杂交瘤细胞，筛选②的目的是筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞；筛选时所用的培养基是特定的选择培养基。（4）科学工作者正在研究的治疗癌症使用的“ADC”就是在单克隆抗体上连接抗癌药物，制成“生物导弹”，注入体内，借助单克隆抗体的导向作用，将抗癌药物定向带到癌细胞所在位置，在原位杀死癌细胞；和普通化疗相比，用“生物导弹”治疗癌症的优点是可在原位杀死癌细胞，不损伤正常细胞，且用药剂量小，毒副作用小。（5）由题图可看出，单克隆抗体的制备过程中，运用了动物细胞工程中动物细胞融合（不同细胞的融合）和动物细胞培养两大技术。
15.（1）内质网 高尔基体 （2）单克隆杂交瘤细胞由已免疫的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合而成，骨髓瘤细胞具有无限增殖（体外大量增殖）的能力 （3）部分融合细胞丢失了与抗体合成有关的染色体或不同的多肽链组合可以形成的抗体类型较多 （4）这种双特异性单克隆抗体使T细胞更容易（或更精准或更高概率）接触到癌细胞（类似表达即可）
解析：（1）抗体等分泌蛋白的合成与分泌过程：附着在内质网上的核糖体合成蛋白质→内质网进行粗加工→内质网“出芽”形成囊泡→高尔基体进行再加工形成成熟的蛋白质→高尔基体“出芽”形成囊泡→细胞膜，整个过程还需要线粒体提供能量。所以，抗体等这些肽链在核糖体合成后，经内质网、高尔基体等细胞器加工、连接形成有活性的抗体。（2）因为骨髓瘤细胞内原癌基因和抑癌基因发生了突变，从而具有在体外培养条件下无限增殖的能力。而单克隆杂交瘤细胞由已免疫的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合而成，骨髓瘤细胞具有无限增殖（体外大量增殖）的能力，因此单克隆杂交瘤细胞能够迅速大量增殖。（3）根据题中信息，部分融合细胞丢失了与抗体合成有关的染色体或不同的多肽链组合可以形成的抗体类型较多等原因，导致图中的单克隆杂交瘤细胞与脾脏细胞的融合细胞需要经过多次的检测和筛选才能得到少量的能产生双特异性单克隆抗体的单克隆杂交—杂交瘤细胞。（4）人体内T细胞可以识别、杀伤癌细胞。以癌细胞细胞膜外表面的特异性蛋白为抗原A，T细胞细胞膜外表面的受体蛋白（能激活其免疫能力）为抗原B。双特异性单克隆抗体能将抗癌药物定向带到癌细胞所在位置，在原位杀死癌细胞。这样既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。因为双特异性单克隆抗体使T细胞更容易（更精准或更高概率）接触到癌细胞。所以，双特异性单克隆抗体治疗癌症的效果优于抗体1、2联合使用。
16.（1）人的乳腺癌细胞 （2）PEG （3）抗体检测 既能大量增殖，又能产生特定抗体 体外 （4）单克隆抗体 治疗乳腺癌的药物 （5）①单克隆抗体 特异性的抗原—抗体 ②水解 细胞核
第3课时 动物体细胞核移植技术和克隆动物
1.C 克隆哺乳动物时，一般将动物的一个细胞的细胞核移入一个去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。通常作为核移植受体细胞的是去核的次级卵母细胞，C正确。
2.B 克隆猫完全不像生养它的花斑猫，也不完全像为它提供细胞核基因的猫的原因可能是发生了基因突变，①正确；动物细胞的细胞质中含有少量的遗传物质，所以提供卵母细胞的雌猫的细胞质基因能表达出性状，导致该克隆猫不完全像为它提供细胞核基因的猫，②正确；基因的表达受环境因素的影响，所以表型是基因型与环境共同作用的结果，③正确；生养该克隆猫的花斑猫与克隆猫之间只有营养物质的交换，没有基因的交流，④错误。
3.C 胚胎干细胞进行核移植更容易成功，是由于其分化程度低，全能性表现更容易。
4.B 从供体取出组织进行动物细胞培养，属于体细胞核移植技术培育克隆牛的一个步骤，A正确；将体细胞核与MⅡ期的卵母细胞融合使用的是电融合法，没有用灭活的病毒促融，B错误；体细胞核移植技术中，可以用物理或化学方法激活重构胚，使其完成发育进程，属于体细胞核移植技术培育克隆牛的一个步骤，C正确；选择合适时期的胚胎进行移植，使其发育成完整个体，属于体细胞核移植技术培育克隆牛的一个步骤，D正确。
5.C 动物体细胞核移植技术的应用前景不包括复活已灭绝的但仍保持完整细胞的动物，C错误。
6.D 由图可知，“三亲婴儿”的培育需要采用体外受精技术，属于有性生殖，A正确；选择捐献者的卵母细胞进行核移植，原因是卵母细胞体积比较大，易操作，同时卵母细胞的细胞质多，营养丰富，含有能激发细胞核全能性表达的物质，B正确；母亲卵母细胞取核去质，故该技术可避免母亲细胞质中的致病基因传递给后代，C正确；色盲基因位于X染色体上，属于核基因，故该技术不可以避免母亲的色盲基因传递给后代，D错误。
7.C 高度分化的动物细胞的全能性受到限制，所以不能用类似植物组织培养的方法获得完整的动物个体，A错误；克隆技术并没有完全成熟，绝大多数克隆动物还存在一些遗传和生理缺陷类的健康问题，B错误；细胞核移植过程中通常采用M Ⅱ 期的卵母细胞作为受体细胞，D错误。
8.C 图中①为体细胞核移植技术，形成重构胚，A正确；胚胎干细胞来自早期胚胎，B正确；③指进行自体移植，优点是没有免疫排斥反应，C错误；胚胎干细胞经过②发育为神经细胞和胰岛B细胞，从根本上说是基因的选择性表达，即转录水平的差异导致的，D正确。
9.C 胚胎细胞分化程度低，分裂能力强，胚胎细胞核的移植成功率高于成体细胞核的移植，A正确；卵母细胞质中含有促使细胞核全能性表达的物质，B正确；重组细胞最初分裂时，DNA复制完成后，可以进行转录形成RNA，C错误；大熊猫的克隆成功能证明细胞质具有调控细胞核发育的作用，D正确。
10.BC 细胞核移植主要在同种动物细胞的普通细胞与去核卵母细胞之间进行，不是同种组织，A错误；去核卵母细胞的细胞质中含有让细胞核表达出全能性的物质和营养条件，与重组细胞的发育有关，B正确；早期胚胎细胞分化程度低，作为细胞核的供体细胞时，妊娠成功率最高，C正确；培养动物细胞的培养液中需含维生素、激素等物质，但它们不是能源物质，D错误。
11.BD 接受供体细胞核的是发育到MⅡ期的次级卵母细胞，B错误；体细胞核移植过程中，用物理或化学方法（如电刺激、Ca2＋载体、乙醇、蛋白酶合成抑制剂等）激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育进程，D错误。
12.（1）A （2）虎C （3）不遵循 克隆属于无性生殖，而孟德尔的遗传定律仅在有性生殖的减数分裂过程中适用 （4）不能 高度分化的动物细胞全能性受到限制，虎和牛体细胞融合后得到的杂交细胞不能正常发育成完整个体
解析：（1）由克隆华南虎的过程可知，华南虎A提供细胞核，普通虎B提供细胞质，所以克隆虎D的遗传性状与供核的华南虎A更接近。（2）老虎C只提供胚胎发育的场所，没有提供遗传物质给虎D。（3）核移植过程没有经过两性生殖细胞的结合，属于无性生殖，没有减数分裂过程，不遵循孟德尔遗传定律。（4）高度分化的动物细胞全能性受到限制，因此无论是高度分化的动物体细胞，还是不同种动物体细胞融合后的杂交细胞，经细胞培养只会发生细胞增殖，无法形成个体，动物体细胞的全能性无法体现。
第3节 胚胎工程
第1课时 胚胎工程的理论基础
1.B 精子头部接触卵细胞膜时出现的反应是防止多精入卵的第一道屏障，A正确；受精卵细胞质中的遗传物质绝大部分来自卵细胞，一小部分来自精子，B错误；精子入卵后，尾部脱离，只有头部进入卵子，C正确；雄原核形成的同时，卵子完成减数分裂Ⅱ，排出第二极体，D正确。
2.A 精子入卵后，尾部脱离，原有核膜破裂并形成一个新的核膜，最后形成一个比原来精子的核还大的雄原核，A错误。
3.B 卵细胞膜下皮层颗粒外排的方式可能是胞吐，依赖于细胞膜的流动性，A正确；受精卵中的细胞核遗传物质一半来自精子，一半来自卵细胞，而细胞质遗传物质几乎都来自卵细胞，B错误；透明带“硬化”是防止多个精子进入卵细胞受精的一道屏障，C正确；精子受体失去活性有助于一个卵细胞与一个精子结合，防止多精入卵，D正确。
4.B 囊胚期的细胞出现了分化，其原因是基因的选择性表达，B错误。
5.A ①过程是受精作用，没有发生非同源染色体的自由组合，非同源染色体的自由组合发生在减数分裂产生配子的过程中，A错误。
6.B 滋养层细胞将来发育成胎膜和胎盘，内细胞团将来发育成胎儿的各种组织，B错误。
7.B 精子触及卵细胞膜的瞬间便发生了透明带反应，防止多精入卵，而图中X指卵细胞膜反应，B错误。
8.B 胚胎干细胞来自早期胚胎，精原干细胞不属于胚胎干细胞，A错误；③是内细胞团的细胞，具有发育全能性，可发育成胎儿各种组织，B正确；动物细胞培养和早期胚胎培养需要在95％空气和5％二氧化碳的环境中培养，C错误；人工“猴胚胎”的遗传特性与提供胚胎干细胞的供体基本一致，代孕受体提供营养，D错误。
9.BC 促性腺激素的化学本质为蛋白质，口服后会被消化道内的消化酶分解，故不能口服，A错误；体外受精时对精子要进行获能处理，卵母细胞也需要培养至MⅡ期才能进行受精作用，C正确；受精的标志是在卵细胞膜和透明带的间隙可以观察到两个极体（一个是第一极体，还有一个是第二极体），D错误。
10.BC Ⅰ时期为桑葚胚，含有的所有细胞都是全能细胞，该时期的细胞具有发育的全能性，A正确；过程a表示卵裂形成桑葚胚，过程b表示桑葚胚形成囊胚，这两个过程均需要消耗能量，故胚胎中有机物的含量均减少，B错误；Ⅱ时期囊胚腔中含有液体成分，C错误；细胞分化从Ⅱ（囊胚）时期开始，贯穿于动物的整个生命历程，D正确。
11.（1）维持培养液pH的相对稳定 （2）染色体的着丝粒排列在赤道板上 在卵细胞膜和透明带的间隙可否观察到两个极体 （3）桑葚胚 清除有害代谢物，补充营养物质 （4）促进 （5）50 核成熟卵子数占卵母细胞的比例较高，囊胚数占培养卵数的比例较高
解析：（1）动物细胞培养时，细胞培养箱中加5％ CO2的作用是维持培养液pH的相对稳定。（2）卵母细胞培养到减数分裂Ⅱ中期时才成熟，而减数分裂Ⅱ中期的特征是染色体的着丝粒排列在赤道板上；判断是否受精的依据是在卵细胞膜和透明带的间隙可否观察到两个极体。（3）早期胚胎发育过程为受精卵→卵裂期→桑葚胚→囊胚→原肠胚，因此步骤④中，受精卵经桑葚胚发育成囊胚；培养过程定期更换培养液的目的是清除有害代谢物，补充营养物质。（4）亚麻酸溶液为0 μmol·L－1的一组为对照组，与其相比，表1中，亚麻酸溶液浓度为200 μmol·L－1时，核成熟卵子数占卵母细胞数的比例较高，表2中，亚麻酸溶液浓度为200 μmol·L－1时，囊胚数占培养卵数的比例较高，可见其对水牛卵母细胞体外成熟和囊胚发育起促进作用。（5）表1中，亚麻酸溶液浓度为50 μmol·L－1 时，核成熟卵子数占卵母细胞的比例较高，表2中，亚麻酸溶液浓度为50 μmol·L－1 时，囊胚数占培养卵数的比例较高，因此50 μmol·L－1 的亚麻酸对水牛卵母细胞体外成熟和囊胚发育都较有利。
第2课时 胚胎工程技术及其应用
1.D 试管动物技术在操作过程中仍然有两性生殖细胞的结合过程，只不过是通过人工在体外操作，获得胚胎，然后再移植到生物体内发育成新个体。早期胚胎经移植后的过程在体内进行，故选D。
2.A 试管婴儿技术是精子和卵细胞在体外培养条件下受精，属于有性生殖。
3.B 采集的精子获能后才能与成熟的卵母细胞完成体外受精，A正确；①②过程分别为受精和有丝分裂，B错误。
4.D 对牛进行胚胎移植时，供体公牛、母牛必须是同一物种的良种，这样才能获得良种的胚胎，但受体母牛只是给胚胎提供营养物质及适宜的发育环境，可以只是同物种的一般健康牛，D错误。
5.C 过程③是从子宫或输卵管中冲取胚胎，C错误。
6.C 在分割囊胚阶段的胚胎时，要注意将内细胞团均等分割，对于不同发育阶段的胚胎，分割的具体操作不完全相同，C错误。
7.A 在胚胎发育过程中，受精卵通过有丝分裂不断增加体细胞数目，A正确；在进行步骤③时，应选择发育良好的囊胚来操作，需均等分割囊胚的内细胞团，以免影响胚胎发育，B错误；在胚胎发育中，卵裂期细胞数量不断增多，细胞体积不断减小，胚胎体积基本不变，C错误；步骤①代表奶牛的体外受精，属于有性繁殖的方式，D错误。
8.D 从良种公牛体内获得的精子需要在体外获能后才可以与培养到MⅡ期的卵细胞结合受精，A错误；据图可知，三种早期囊胚由不同受精卵发育而来，故a、b、c的基因型不一定相同，B错误；胚胎分割技术要注意对囊胚的内细胞团进行均等分割，桑葚胚中没有形成内细胞团，所以切割桑葚胚和囊胚时的具体操作是不完全相同的，C错误；由于不知道受精形成的早期囊胚c的性别，因此不能确定图中“小牛”的性别，图中“小牛”的性别可能为雄性或雌性，D正确。
9.D 体外受精时，需用促性腺激素处理使妇女超数排卵，A错误；囊胚阶段细胞逐渐分化，B错误；根据题图可知，移植卵裂期胚胎流产率高于移植囊胚，故卵裂期胚胎移植成功率低，C错误。
10.ACD 结果显示分割囊胚时，在TCM－199培养液中分割效果优于其他两种培养液，B错误。
11.CD 在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，应注意要将内细胞团均等分割，以免影响胚胎的恢复和进一步发育，A错误；胚胎冷冻后分割，更有利于提高半胚存活率，而冷冻后分割与分割后冷冻相比，分割成功率几乎无差别，B错误；胚胎分割属于无性生殖或克隆，但是由于环境条件不同或生物产生变异，生物性状不一定完全相同，D正确。
12.（1）供体1、2、3 方法2 是 （2）内细胞团 MⅡ期卵母 （3）同期发情处理后，一段时间内，同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的（合理即可） （4）细胞培养、单克隆抗体、植物组织培养、胚胎分割技术等
解析：（1）方法2获得的细胞B来自正常受精作用形成的早期胚胎，再将早期胚胎的细胞核移植到供体3的去核卵母细胞中，细胞D的核遗传物质来自供体1、2，细胞质遗传物质来源于供体3，因此方法2获得的小牛的遗传物质来源于供体1、2、3。方法1是体细胞核移植，方法2是胚胎细胞核移植，胚胎细胞分化程度低，所以胚胎细胞核移植比体细胞核移植更容易成功。方法3中采用了胚胎分割技术，而来自同一个胚胎的后代具有相同的遗传物质，因此方法3中①和②发育成的小牛的遗传物质相同。（2）细胞B取自囊胚的内细胞团，内细胞团的细胞具有很高的全能性，属于胚胎干细胞。细胞C应取自供体3的MⅡ期卵母细胞。（3）胚胎移植是克隆动物的最后一道工序，受体能为供体的胚胎提供相同的生理环境，依据的生理学基础是同期发情处理后，一段时间内，同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的。（4）根据世界卫生组织对克隆的概念可知，细胞培养、单克隆抗体、植物组织培养、胚胎分割技术等均属于克隆。
第3章 基因工程
第1节 重组DNA技术的基本工具
1.D 基因工程的内容就是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需的基因产物，也就是定向地改造了生物体的遗传性状，D正确。
2.B 由题意可知，该技术为基因工程，是在生物体外进行的操作。
3.D 题干表述的是目的基因导入受体细胞并得以表达的过程，目的基因在不同生物细胞中能够表达出相同的蛋白质，说明控制其合成的mRNA上的密码子是共用的，相同的密码子决定相同的氨基酸，A正确；基因通过转录获得mRNA，进而控制蛋白质的合成，B正确；基因通常是有遗传效应的DNA片段，只要是双链DNA都遵循碱基互补配对原则，其组成原料都是四种脱氧核苷酸，C正确；生物之间是否有共同的原始祖先与转基因技术之间没有必然关系，D错误。
4.B DNA连接酶连接的是两个DNA片段，A错误；限制酶只能切割DNA分子，烟草花叶病毒的核酸是RNA，不能切割，B正确；E.coli DNA连接酶只能连接黏性末端，不能连接平末端，C错误；限制酶主要从原核生物中分离纯化而来，但是不会剪切自身的DNA，D错误。
5.A 从黏性末端是否相同可以看出，①④是由同一种限制酶切割的，其他片段是由不同的限制酶切割的，因此以上DNA片段是由4种限制酶切割后产生的，A错误；DNA相应片段的连接应用DNA连接酶，B正确；①④黏性末端相同，连接后形成的DNA序列是，C正确；DNA连接酶能将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的磷酸二酯键，D正确。
6.D 切割产生甲的限制酶的识别序列为GAATTC∥CTTAAG，切割产生乙的限制酶的识别序列为CAATTG∥GTTAAC，切割产生丙的限制酶的识别序列为CTTAAG∥GAATTC。三者的识别序列和切割位点不同，由此可见，甲、乙、丙的黏性末端是由三种限制酶切割产生的，A正确。甲、乙的黏性末端相同，因此可在DNA连接酶的作用下形成重组DNA分子；但甲、丙的黏性末端不同，它们之间不能形成重组DNA分子，B正确。DNA连接酶催化磷酸基团和脱氧核糖之间形成磷酸二酯键，a处是磷酸二酯键，C正确。切割产生甲的限制酶的识别序列为“GAATTC”，D错误。
7.D 表中的6种限制酶切割形成的末端中，均为黏性末端，A错误；BamHⅠ和Sau3AⅠ切割形成的末端，可以相互连接，连接形成的DNA序列中还存在Sau3AⅠ的识别序列和切割位点，故能再被Sau3AⅠ切割，B错误；Acc65Ⅰ和KpnⅠ切割形成的黏性末端序列无法配对，而且磷酸端（5'端）也不能与磷酸端（5'端）连接，既然不能连接也就不存在重新切割，C错误；Sau3A Ⅰ识别序列为4个碱基，而BglⅡ识别序列为6个碱基，因此分别用Sau3AⅠ和BglⅡ切割随机序列DNA，前者得到的片段长度明显短于后者，D正确。
8.D BamH Ⅰ限制酶的识别序列具有6个碱基对，若DNA上的碱基随机排列，理论上每46＝4 096个碱基对会有一个BamHⅠ限制酶的切割位点，A正确；NotⅠ限制酶的识别序列具有8个碱基对，而其他三种限制酶的识别序列均为6个碱基对，故若DNA上的碱基随机排列，NotⅠ限制酶切割位点出现频率较其他三种限制酶低，B正确；作为基因工程的最常用的载体，质粒上通常会有多种限制酶的切割位点，C正确；BamHⅠ限制酶切割的DNA产生的黏性末端和用BglⅡ切割的载体DNA产生的黏性末端可以互补配对，故BamHⅠ限制酶切割的DNA可以连接到用BglⅡ切割的载体DNA中，D错误。
9.A 植物细胞具有细胞壁，加入蒸馏水不会使细胞吸水涨破，A错误；DNA可溶于2 mol/L NaCl溶液，加入2 mol/L NaCl溶液是为了溶解DNA，B正确；加入研磨液的作用是裂解细胞膜，有利于DNA释放，C正确；DNA不溶于酒精，但是细胞中的某些蛋白质可以溶于酒精，故加入95％的冷酒精可析出DNA，D正确。
10.B 家兔属于哺乳动物，哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核，不能用于DNA的粗提取，A错误；DNA含量高，并且材料易得的生物都可以作为提取DNA的材料，所以菠菜也可以作为提取DNA的材料，C错误；鉴定DNA时，应先将丝状物溶于2 mol/L的NaCl溶液后，再加入二苯胺试剂，进行沸水浴，冷却后溶液呈蓝色，D错误。
11.D 由题干可知，SDS能使蛋白质变性，破坏蛋白质空间结构，从而促进DNA和蛋白质分离，A正确；EDTA是DNA酶抑制剂，能减少DNA水解，提高DNA的完整性和总量，B正确；Tris作为缓冲剂能维持pH的稳定，可以防止DNA结构被破坏，保证DNA结构正常，C正确；鉴定DNA的方法是沸水浴下用二苯胺试剂鉴定，D错误。
12.C 酶a与酶b切断的化学键均为磷酸二酯键，A错误。酶a与酶b切出的黏性末端相同，用DNA连接酶可以将它们连接起来，B错误。由题表可知，限制酶a可以把DNA分子切成4段，说明该DNA分子上限制酶a的切割位点有3个；限制酶b把长度为2 100 bp的DNA片段切割成长度分别为1 900 bp和200 bp的两个DNA片段，把长度为1 400 bp的DNA片段切割成长度分别为800 bp和600 bp的两个DNA片段，说明限制酶b在该DNA分子上有2个切割位点，所以酶a与酶b的识别序列分别有3个和2个，C正确。用酶a切割与该DNA序列相同的质粒（环状的），可得到3种大小不同的切割产物，D错误。
13.ACD 多个片段乙和多个片段丁混合在一起，用DNA连接酶拼接可得到环状DNA，A正确；多个片段乙和多个片段丁混合，只由两个DNA片段连接成的环状DNA分子有3种，即片段乙自身连接、片段丁自身连接，片段乙和片段丁连接，B错误；限制酶具有特异性，一种限制酶只能识别双链DNA中某种特定的核苷酸序列，C正确；根据图中酶M和酶N切割后的结果，若酶M特异性剪切的DNA片段是，则酶N特异性剪切的DNA片段是，D正确。
14.AD 限制酶SmaⅠ的切割位点在中轴线上，切割后形成平末端，E.coli DNA连接酶只能连接黏性末端，A错误；一种限制酶只能识别特定的脱氧核苷酸序列，并在特定位点切割DNA分子，并非只能识别一种核苷酸序列，如表格中限制酶HindⅡ识别的核苷酸序列不止一种，D错误。
15.（1）磷酸二酯键 EcoRⅠ、BamHⅠ、BclⅠ、Sau3AⅠ （2）BamHⅠ、BclⅠ 它们切割后产生的片段具有相同的黏性末端 3 （3）标记基因
解析：（1）限制酶的作用是识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。题中可供使用的限制酶切割相应片段后都会产生黏性末端。（2）经限制酶Sau3AⅠ切割后得到的DNA片段可以与BamHⅠ、BclⅠ切割后得到的DNA片段连接，理由是它们切割后产生的片段具有相同的黏性末端。图中甲质粒有3个Sau3AⅠ的切割位点（TetR上有1个，AmpR上有2个），所以经Sau3A Ⅰ完全切割后可得到3种DNA片段。（3）图甲中的TetR和AmpR都是抗性基因，在载体上可以作为标记基因，用于重组DNA的筛选。
16.（1）筛选（鉴别）目的基因是否导入受体细胞
（2）如下所示：
目的基因
—G AATTC—…… —G AATTC—
—CTTAA G—…… —CTTAA G—
（3）磷酸二酯 两种限制酶（BamHⅠ和BglⅡ）切割得到的黏性末端相同 （4）能抗氨苄青霉素，但不能抗四环素 pBR322质粒
解析：（1）质粒作为基因表达载体的条件之一是要有抗性基因，以便于筛选（鉴别）目的基因是否导入受体细胞。（2）同一种限制酶切割DNA分子产生的黏性末端相同，根据题意可知：该目的基因两侧被限制酶EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端为见答案。（3）DNA连接酶催化两个DNA片段形成磷酸二酯键；而通过DNA连接酶作用能将两个DNA分子片段连接，表明经两种限制酶（BamHⅠ和BglⅡ）切割得到的DNA片段，其黏性末端相同。（4）由题意知：由于与图三空圈相对应的大肠杆菌能在含氨苄青霉素的培养基上生长，而不能在含四环素的培养基上生长，故可推知与图三空圈相对应的图二中的菌落能抗氨苄青霉素，但不能抗四环素。由图二、图三结果显示，多数大肠杆菌都能抗氨苄青霉素，而经限制酶BamHⅠ作用后，标记基因TetR被破坏，故导入目的基因的大肠杆菌不能抗四环素，即多数大肠杆菌导入的是pBR322质粒。
17.（1）EcoRⅠ、PstⅠ EcoRⅠ、SmaⅠ、PstⅠ、EcoR Ⅴ （2）磷酸二酯键 （3）复制 一个至多个限制酶切割位点 选择性培养
解析：（1）由题图可以看出，EcoR Ⅰ、Sma Ⅰ、Pst Ⅰ、EcoR Ⅴ切割后分别形成黏性末端、平末端、黏性末端和平末端，E.coli DNA连接酶可用于连接黏性末端，T4 DNA连接酶可用于连接黏性末端和平末端。（2）DNA连接酶催化DNA链的5'端与另一DNA链的3'端生成磷酸二酯键。（3）复制原点是在基因组上复制起始的一段序列，可以保证质粒在宿主细胞中进行复制。质粒上有一个至多个限制酶切割位点，该位点可被限制酶切开并使外源目的基因插入其中。在含有特定抗生素的培养基上进行选择性培养可以将含质粒载体的细胞筛选出来。
第2节 基因工程的基本操作程序
第1课时 目的基因的筛选与获取和基因表达载体的构建
1.A 目的基因主要是指编码蛋白质的基因，A错误；目的基因的筛选与获取是实施基因工程的第一步，B正确；来自苏云金杆菌的Bt基因可作为培育转基因抗虫棉用到的目的基因，C正确；随着测序技术的发展，以及序列数据库和序列比对工具等的应用，越来越多的基因的结构和功能为人们所知，这为科学家找到合适的目的基因提供了更多的机会和可能，D正确。
2.D PCR技术扩增的目的基因序列不一定完全是已知的，A错误；该技术是通过高温来使DNA解旋的，不需要解旋酶，B错误；该技术需要的一对引物，分别能与模板DNA的两条链进行碱基互补配对，其序列不是互补的，C错误。
3.D 用PCR扩增DNA片段的过程中，在引物作用下，DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链，即DNA的合成方向是从子链的5'端至3'端延伸的，故引物的碱基序列应与每条模板链5'端的一段核苷酸链的碱基序列相同，即应以模板链5'端的一段脱氧核苷酸单链片段作为引物；由题干信息分析可知，5'端的碱基序列是5'-GACCTGTGGAAGC-3'和5'-CAATCCCGTATG-3'，故对应的引物为①④，D正确。
4.D 过程①为逆转录，所需的原料是脱氧核苷酸，A错误；由DNA单链合成DNA双链的过程中所需要的DNA聚合酶不需要耐高温，B错误；过程③为变性，温度上升到超过90 ℃时，双链DNA解聚为单链，不需要解旋酶破坏氢键，C错误；过程④为复性，温度降到50 ℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合，但引物对之间不能互补配对，D正确。
5.D 由图可知，以原来的每条母链为模板经第一轮合成的两个DNA分子中，只含有引物A或引物B，而以新合成的子链为模板合成新DNA分子时，两种引物都含有，故第三轮循环共产生8个DNA分子，其中含有引物A的分子是7个，即占7/8，D错误。
6.A 载体不能防止目的基因被受体细胞限制酶“切割”，A错误；载体在受体细胞中能够稳定存在，并且自我复制，使目的基因数量扩大，B正确；启动子是RNA聚合酶的识别和结合的位点，能启动转录过程，终止子控制着转录的结束，所以载体含有的启动子和终止子可协助目的基因的表达，C正确；载体具有标记基因，标记基因便于筛选含有目的基因的受体细胞，D正确。
7.C 用限制酶XbaⅠ和SacⅠ来切割目的基因，可以使目的基因两端产生不同的黏性末端，防止目的基因自身环化，A正确；为能从蚕丝腺细胞中提取蛛丝蛋白，基因表达载体中目的基因的上游必须含有使其能在蚕丝腺细胞中转录的启动子，即构建表达载体时选用蚕丝蛋白基因的启动子利于基因在家蚕丝腺细胞中表达，B正确；启动子只能驱动基因转录，不能驱动其复制，C错误；基因表达载体中的标记基因的作用是鉴别与选择含有蛛丝蛋白基因的受体细胞，D正确。
8.D 切割目的基因时，用BamHⅠ切割会破坏目的基因，只用PstⅠ切割目的基因和质粒载体，会出现目的基因和质粒的自身环化，或目的基因和质粒的反向连接，而用PstⅠ和Hind Ⅲ 进行酶切，能确保目的基因和质粒的正向连接，并且质粒上保留新霉素抗性基因作为标记基因，A、C正确；在酶切过程中，不能破坏质粒中全部的标记基因，至少需保留其中的一个，B正确；用PstⅠ切割后，质粒上氨苄青霉素抗性基因被破坏了，导入重组质粒的大肠杆菌不可以在含氨苄青霉素的培养基中生长，D错误。
9.B 图示过程为基因表达载体的构建过程，是基因工程中的核心步骤；构建过程中需要将目的基因完整切割下来，此时要用到限制酶PstⅠ、EcoRⅠ；抗卡那霉素基因是标记基因，目的是便于鉴定和筛选含有目的基因的细胞；基因表达载体包括复制原点、启动子、目的基因、终止子和标记基因等。
10.D 图示环节为引物与模板碱基互补配对，表示的是复性环节，复性的上一环节为变性，复性的温度比变性的温度低，A正确；引物的设计要有一段已知目的基因的核苷酸序列，保证其与已知模板能碱基配对，在后续扩增的过程中才能进行子链的延伸，B正确；子链是从5'端向3'端延伸的，耐高温的DNA聚合酶只能从引物的3'端开始延伸DNA链，C正确；由于两个引物均不在该片段的端点，因此一个循环后，子代DNA双链的脱氧核苷酸数量不相同，D错误。
11.D 该DNA复制4次共形成16个DNA，其中①②分别有1个，③④分别有3个，⑤有8个，D正确。
12.B 引物自身不应存在互补序列，否则会出现引物与自身配对、引物跟引物配对的情况，降低PCR的效率，A正确；引物引导子链合成的方向是5'端→3'端，因此为了便于扩增的DNA片段与载体连接，需要在引物的5'端加上限制酶识别序列，B错误；设计引物时需要避免引物之间碱基互补配对而造成引物自身环化的现象，为了便于扩增的DNA片段与载体连接，常在两条引物上设计加入不同的限制酶识别位点，主要目的是使目的基因能定向插入表达载体，避免目的基因自身环化，C正确；复性所需的温度、时长和延伸所需的温度、时长均与引物有关，如引物中G与C含量高，需要设定更高的复性和延伸温度，D正确。
13.B 过程①是以mRNA形成单链DNA的过程，表示逆转录，A正确；过程③拟对单链cDNA进行第n次循环的扩增，根据DNA分子半保留复制特点可知，该过程理论上至少需要2n－1个引物B，B错误；利用实时荧光RT-PCR技术对某些微量RNA病毒进行检测时可提高检测的灵敏度，是因为增加了待测RNA逆转录产生的DNA的数量（或浓度），便于检测，C正确；游离的脱氧核苷酸只能从引物的3'端开始连接，D正确。
14.ABC 第四轮循环得到的16个DNA分子中，两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段有24－2×4＝8（个），即有8个⑤，D错误。
15.（1）从基因文库中获取、人工合成 （2）DNA半保留复制 B、C （3）A （4）目的基因与载体反向连接 4 会破坏标记基因
解析：（1）获得目的基因的方法有PCR技术、从基因文库中获取、人工合成。（2）采用PCR扩增目的基因的原理是DNA半保留复制，由图2可知，DNA复制只能从5'端到3'端，因此构建前利用PCR技术扩增基因时，A、B、C、D四种单链DNA片段中应选取B和C作为引物。（3）DNA的基本骨架由脱氧核糖与磷酸交替连接而成，A正确；其结构中G—C碱基对越多，分子结构越稳定，B错误；PCR技术利用高温解开氢键，不需要解旋酶，C错误；由图3可知，目的基因碱基A有2个，复制6次需要碱基A的数量为26×2－2＝126个，D错误。（4）在构建目的基因表达载体时，用PstⅠ、EcoRⅠ两种酶同时切割目的基因和质粒，是为了防止一种酶切割时产生目的基因与载体反向连接。限制酶破坏的是磷酸二酯键，图中目的基因切割需要破坏4个磷酸二酯键，因此需要消耗4个水分子。由图可知，不选用限制酶PstⅠ和Hind Ⅲ同时对质粒和目的基因进行切割的原因是会破坏标记基因。
16.（1）平 （2）胸腺嘧啶（T） DNA连接 （3）B A类菌落含有P0 C类菌落未转入质粒 （4）乙、丙 目的基因反向连接
解析：（1）从图中可以看出，EcoR Ⅴ酶切出来的载体质粒为平末端。（2）从图中可以看出，目的基因的两端各有一个游离的腺嘌呤脱氧核苷酸，由于载体P1为平末端，所以载体P1的两端应该各添加一个胸腺嘧啶脱氧核苷酸，这样在DNA连接酶的作用下才能把目的基因和载体P1连接起来。（3）由题意可知，构建重组质粒时四环素抗性基因被破坏，所以导入目的基因的菌落只能在没有抗生素或含有氨苄青霉素的培养基中存活，应该选B类菌落。A类菌落能在表中条件下存活，说明导入的是P0质粒。C类菌落只能在无抗生素的培养基中存活，说明C类菌落没有导入质粒。（4）据图分析，目的基因的外侧链只能用丙作引物，内侧链可用甲、乙作引物，如果用甲、丙作引物，则无论目的基因是否插入正确，都能通过PCR扩增大量目的基因，如果用乙、丙作为引物，当目的基因插入不正确（反向插入）时，则乙、丙两引物都结合在外侧，PCR不能正常进行，因此选用乙、丙作为引物可以进行PCR鉴定。若扩增出的DNA片段为400 bp，则正好是目的基因反向连接后，外侧链用乙作引物，内侧链用甲作引物扩增出的片段。
17.（1）逆转录 （2）限制性内切核酸酶（或限制酶） 碱基互补配对 （3）变性 延伸 （4）引物与模板 G—C含量高 （5）②③
解析：（1）PCR是在体外进行DNA扩增，提取的mRNA不能用于PCR扩增，需要经过逆转录获得DNA后才可用于PCR扩增。（2）设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物（引物1和引物2），需要在引物中增加适当的限制性内切核酸酶（限制酶）的识别序列，便于构建重组质粒。为了避免引物自连，设计引物时需要避免引物之间形成碱基互补配对。（3）根据PCR的过程可知，图中步骤1为变性，步骤2为复性，步骤3为延伸，这三个步骤构成一轮循环。（4）复性温度的设定与引物长度、碱基组成有关，复性温度过高会破坏引物与模板的碱基配对。因G、C之间氢键数多于A、T之间氢键数，故在使用G—C含量高的引物时需要设定更高的复性温度。（5）如果PCR得不到任何扩增产物，可能的原因是复性温度过高使扩增效率降低；也可能是未按照目的基因两端的核苷酸序列来设计引物，需要重新设计。因此可采取的措施有降低复性温度、重新设计引物等。
第2课时 将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定
1.D 用Ca2＋处理大肠杆菌，使之处于一种能够吸收周围环境中DNA分子的生理状态，B正确；对于动物来说，受体细胞一般是受精卵，因为受精卵的全能性易于表现，C正确；将目的基因转入动物细胞常用显微注射法，将目的基因转入微生物细胞常用Ca2＋处理法，D错误。
2.D 要让目的基因进入受体细胞后能稳定存在并得到复制和表达，不管采用什么导入方法，都需要构建表达载体才能实现，A错误；花粉管通道法只适用于转基因植物的培育，B错误；采用花粉管通道法时，植物受体细胞一般是植物体细胞或受精卵，通常不选卵细胞，C错误。
3.D 在农杆菌转化法中，需要将目的基因插入到T-DNA片段上，A错误；农杆菌转化法中应直接利用土壤农杆菌感染植物细胞，B错误；Ti质粒是一种环状DNA分子，是存在于细菌拟核DNA之外的DNA，C错误。
4.A 通过观察害虫吃棉叶是否死亡，属于个体生物学水平的鉴定，A符合题意；通过PCR等技术检测棉花的染色体DNA上是否插入抗虫基因，属于分子水平的检测，B不符合题意；检测转基因生物中是否转录出相应的mRNA，属于分子水平的检测，C不符合题意；采用抗原—抗体杂交检测目的基因是否翻译成蛋白质，属于分子水平的检测，D不符合题意。
5.B 改变后的NR2B基因作为目的基因，需要与载体结合后才可导入小鼠受精卵内，B错误。
6.C 由于同性相斥、异性相吸，带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动，C错误。
7.C PCR反应的操作步骤一般为准备（包括配制试剂及将各试剂放于实验台上）→移液→混合→离心→反应。PCR仪是一种能自动调控温度的仪器，设置好循环程序就可以进行反应。
8.C 成功导入了重组质粒的细菌B，因目的基因插入质粒后，破坏了四环素抗性基因，所以在含有四环素的培养基上不能生长，C错误。
9.BC 过程②是目的基因表达载体的构建过程，由题图可知，该过程既要连接黏性末端又要连接平末端，因此该过程中需用T4 DNA连接酶连接，B错误；过程③是将重组质粒导入农杆菌的过程，该过程可以用钙离子处理使农杆菌处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，C错误。
10.ABD 目的基因是用限制性内切核酸酶将DNA酶切后得到的，需筛选，A错误；Ca2＋用于处理细菌细胞，B错误；基因成功表达的前提是能转录和翻译，转录时需RNA聚合酶识别转录的起点才能启动，C正确；花药离体培养得到的是玉米的单倍体，需再用秋水仙素处理单倍体，使染色体数目加倍才能得到稳定遗传的转基因玉米，D错误。
11.（1）XhoⅠ、claⅠ 使人血栓调节蛋白基因能在猪血管内皮细胞中特异性表达 （2）4种脱氧核苷酸 hTM基因编码区两端的核苷酸序列 claⅠ、EcoRⅤ （3）成功插入 （4）嘌呤霉素 阳 （5）MⅡ 去核卵母细胞 早期胚胎培养、胚胎移植
解析：（1）据题图可知，步骤①是在质粒1中插入pTM的启动子，得到质粒2，使用的限制酶是XhoⅠ、claⅠ，其目的是使人的血栓调节蛋白基因能在猪血管内皮细胞中特异性表达。（2）步骤②是将逆转录得到的hTM cDNA进行PCR扩增，需要引物诱导，合成这些引物的原料是4种脱氧核苷酸。根据提供的2种引物的脱氧核苷酸序列以及表格判断，设计引物的依据有hTM基因编码区两端的核苷酸序列以及claⅠ和EcoRⅤ的识别序列。（3）将步第1课时 植物细胞工程的基本技术
知识点一 植物组织培养技术
1.下列有关植物细胞全能性的说法，错误的是（ ）
A.体细胞具有发育成完整个体所必需的全套基因
B.高度分化的细胞只有处于离体状态时才有可能表现出全能性
C.植物细胞一般具有全能性是植物组织培养的理论基础
D.从一粒玉米种子长成一棵植株体现了细胞具有全能性
2.（2024·山东滨州高二检测）下列关于菊花组织培养的叙述，错误的是（ ）
A.菊花的组织培养需要经过细胞的脱分化和再分化过程
B.要控制好培养基中生长素和细胞分裂素的浓度及比例
C.为避免环境中微生物的污染，要对外植体进行灭菌处理
D.接种外植体到培养基时，需要注意形态学方向，不可倒插
3.为探究矮牵牛原生质体的培养条件和植株再生能力，某研究小组的实验过程如下图。下列叙述正确的是（ ）
A.过程①获得的原生质体需悬浮在质量分数为30％的蔗糖溶液中
B.过程②需提高生长素的比例以促进芽的分化
C.过程③需用秋水仙素处理诱导细胞壁再生
D.原生质体虽无细胞壁，但仍保持细胞的全能性
4.甜叶菊植株中所含甜菊糖的甜度是蔗糖的300倍左右，而它的热量却很低，是一种非常理想的蔗糖替代甜味剂。甜叶菊的种子小，发芽率低，种子繁殖的遗传性状不稳定，可利用植物组织培养技术提高甜叶菊繁殖效率。下列说法错误的是（ ）
A.植物组织培养是植物细胞工程的基本技术，依据的原理是植物细胞的全能性
B.植物组织培养的基本步骤是“取材—消毒—愈伤组织培养—生根—出芽—移栽”
C.愈伤组织再分化为根和芽，本质上是基因选择性表达的结果
D.培养基中生长素与细胞分裂素含量的比值显著高于1时，可促进愈伤组织分化出根
5.（2024·襄阳五中期中）某科研小组拟培育一种名贵菊花的脱毒苗，其技术路线为“制备MS固体培养基→外植体消毒→接种→培养→移栽→栽培”，下列相关叙述错误的是（ ）
A.取材部位应选择植物顶端分生区附近，因其分裂旺盛且病毒少
B.外植体消毒常进行无菌水冲洗、酒精处理、消毒液处理等措施
C.接种时，将外植体的1/3～1/2插入诱导愈伤组织的培养基中
D.“外植体接种→培养→移栽”的过程中不需要更换培养基
知识点二 植物体细胞杂交技术
6.科研人员通过植物体细胞杂交技术获得了具有油菜叶绿体和萝卜雄性不育特性的春油菜，下列叙述正确的是（ ）
A.春油菜作为母本用于杂交实验无须人工去雄操作
B.将油菜细胞与萝卜细胞直接诱导融合形成杂种细胞
C.杂种细胞培育成新植物体的过程属于有性生殖
D.春油菜染色体数是油菜和萝卜染色体总数的一半
7.（2024·天津滨海新区高二期末）下图为“番茄—马铃薯”杂种植株幼苗的培育过程图，有关叙述错误的是（ ）
A.通常在等渗溶液中用酶解法处理植物细胞获得原生质体a和b
B.诱导a、b细胞融合的化学方法有聚乙二醇、高Ca2＋—高pH融合法等
C.可根据质壁分离现象鉴别杂种细胞的细胞壁是否再生
D.上述过程中包含了有丝分裂、细胞分化和减数分裂等过程
8.（2024·山东青岛高二期中）白菜和甘蓝均为二倍体生物，科学家利用植物体细胞杂交的方法获得了“白菜—甘蓝”，它具有生长周期短、耐热性强和易储存等优点。下列叙述错误的是（ ）
A.用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁体现了酶的专一性
B.“白菜—甘蓝”的培育用到了植物原生质体融合和植物组织培养技术
C.杂种细胞含有两个细胞的遗传物质，所以体细胞杂交属于有性生殖
D.利用植物体细胞杂交技术培育“白菜—甘蓝”的过程中不发生同源染色体联会现象
9.（2024·北京大兴一中月考）如图是“白菜—甘蓝”杂种植株的培育过程。下列说法正确的是（ ）
A.所得到的“白菜—甘蓝”植株不能结子
B.愈伤组织是已高度分化的细胞
C.上述过程中包含有丝分裂、减数分裂等过程
D.诱导原生质体融合时可用聚乙二醇
10.（2024·北京昌平期末）用紫外线照射番茄原生质体，使其部分染色体丢失（断裂），处理后的番茄原生质体与烟草原生质体融合，获得非对称杂种植株。相关叙述不正确的是（ ）
A.诱导原生质体融合前需去除细胞壁
B.用PEG处理诱导原生质体的融合
C.非对称融合技术属于细胞工程
D.非对称融合过程提高植物细胞的全能性
11.（2024·山东日照期末）红豆杉（2n＝24）生长缓慢且紫杉醇（可制作抗癌药物）含量非常低。红豆杉和柴胡（2n＝12）的亲缘关系较远，研究人员尝试运用体细胞杂交技术培育产生紫杉醇的柴胡。先用一定剂量的紫外线照射红豆杉原生质体，破坏部分染色体，再将其与未经紫外线照射的柴胡原生质体融合，得到两两融合的细胞，然后筛选杂种细胞，杂种细胞中两种植物细胞的染色体间排斥较为明显。下列说法错误的是（ ）
A.融合前需将红豆杉细胞和柴胡细胞用纤维素酶和果胶酶处理
B.可以用化学诱导剂PEG诱导红豆杉原生质体与柴胡原生质体融合
C.融合细胞中染色体数为13～23的为杂种细胞，24条的可能不是杂种细胞
D.应在能合成紫杉醇的杂交细胞中选择红豆杉染色体数较少的细胞进行培养
12.（多选）（2024·陕西师大附中期末）铁皮石斛是我国名贵中药，生物碱是其有效成分之一。研究人员通过培养铁皮石斛拟原球茎（简称PLBs，类似愈伤组织）生产生物碱，过程及结果如下图。相关叙述正确的是（ ）
A.过程①获得的幼芽应先用无水乙醇灭菌30 min，再用次氯酸钠溶液处理30 s
B.过程③涉及的生物学原理是细胞膜的流动性
C.过程②固体培养基中生长素与细胞分裂素比例适中有利于拟原球茎的形成
D.结果表明，生物碱含量与PLBs重量呈正相关，光照条件有利于PLBs的生长
13.（多选）（2024·山东青岛期末）利用山金柑愈伤组织细胞（2n）和早花柠檬叶肉细胞（2n）进行体细胞杂交可以得到高品质、抗逆性强的杂种植株。如图是7组杂种植株核DNA和线粒体DNA来源鉴定的结果。下列分析正确的是（ ）
A.进行原生质体融合有多种手段，如电刺激、离心、振荡、聚乙二醇、病毒等诱导
B.细胞融合依赖膜的流动性，获得的融合原生质体需放在无菌水中以防杂菌污染
C.可通过观察融合后细胞的颜色进行初步筛选
D.由图可知，杂种植株的核基因只来自早花柠檬，线粒体基因只来自山金柑
14.（2024·江苏常州高二期中）猕猴桃是一种营养丰富的美味水果。我国研究人员利用“中华猕猴桃”和“美味猕猴桃”两个品种培育出了更加优良的品种，其过程如下图所示。请分析并回答下列问题：
（1）因“中华猕猴桃”和“美味猕猴桃”之间存在 ，所以用有性杂交方法很难得到可育后代。
（2）用酶解法制备原生质体时，用 酶去除细胞壁，获得原生质体。
（3）③过程依据的生物学原理是 。此过程使用的化学法包括 融合法和 融合法等。
（4）在利用杂种细胞培育杂种植株的过程中，依据的原理是 ，⑤⑥过程分别称为 。
（5）已知用X射线处理会使染色体受影响而导致细胞失去分裂能力；用碘乙酰胺处理会使细胞内的酶失活而抑制生长。为了能筛选得到杂种细胞F，若在①过程对“中华猕猴桃”用X射线处理，需对“美味猕猴桃”用 处理，以便最终能获得优良杂种植株H。
（6）若两种猕猴桃都是二倍体，则杂种植株为 倍体。从理论上讲，该杂种植株的育性为 （填“可育”或“不育”）。
15.平菇具有味道鲜美，抗杂菌污染的优势，杏鲍菇具有菌丝强壮，生长旺盛的优势。为获得具有优良性状的平菇形菌株，研究者利用原生质体融合技术，进行了如下研究。
（1）以原生质体融合技术培育杂种新菌株的典型优势是
。
（2）用酶解法处理平菇和杏鲍菇获取原生质体，酶解之前需先用较 （选填“高”或“低”）渗透压的溶液处理。培养原生质体时，需要向培养液中加入适宜浓度的甘露醇来维持 ，以维持细胞正常的形态和功能。
（3）采用不同浓度PEG诱导原生质体融合，实验结果如下表所示：
PEG质量分数 25％ 30％ 35％ 40％
原生质 体状态 有破碎现象，哑铃型细胞比例＜0.01％ 表现正常，哑铃型细胞比例为0.03％ 原生质体出现缩小现象，哑铃型细胞比例为0.01～0.02％ 原生质体出现缩小现象，哑铃型细胞比例为0.01～0.02％
两个原生质体融合效果较好时会呈现哑铃型细胞，融合的原理是 。实验结果显示：
。
（4）鉴定菌株间遗传关系时，常将待测菌株的菌丝体接种于同一培养基内，若两菌丝体间长出“拮抗线”，说明二者的遗传关系较远（见图1）。借助此原理，快速筛选出一株与两亲本菌株遗传关系较远的融合菌株X，请在图2中绘制模式图，标注接种菌丝体位置、菌株类型，预测拮抗线的位置并标注。
（5）在组织培养中发现，有一个MS培养基中没有加入杠杆激素的培养瓶中也长出了与加有杠杆激素的培养瓶中一样的愈伤组织，瓶中还长出了一些某种真菌的菌落”。研究人员没有放弃这难得的机遇，初步做出一个假设，继续进行实验：
他们就地取材，首先纯化该真菌，再增设一组实验，具体做法是：在未添加杠杆激素的MS培养基中加入经高压蒸汽灭菌处理过的该种真菌或经高压蒸汽灭菌处理过的 的培养基，再接种外植体，其他环境条件与正常组培相同，观察能否培养出正常的愈伤组织。
预测结果：如果产生了正常的愈伤组织，支持该假设。如果没有产生愈伤组织，不支持该假设。他们做的假设是：
。
16.（2024·泰州高二月考）甲、乙两位同学分别以某种植物的绿色叶片和白色花瓣为材料，利用植物组织培养技术繁殖该植物。回答下列问题：
（1）以该植物的绿色叶片和白色花瓣作为外植体，在一定条件下进行组织培养，均能获得试管苗，其原理是
。
（2）甲、乙同学在诱导愈伤组织形成所用的培养基中均加入一定量的蔗糖，蔗糖水解后可得到 。若要用细胞作为材料进行培养获得幼苗，该细胞应具备的条件是 （填“具有完整的细胞核”或“具有叶绿体”）。
（3）图中A、B、C显示的是不同的培养结果，出现不同结果主要是由于培养基中两种激素用量不同，这两种激素是 （填名称）。A中的愈伤组织是叶肉细胞经 形成的。
（4）若该种植物是一种名贵花卉的杂合子，要快速获得与原植株基因型和表型都相同的该种花卉，可用组织培养方法繁殖，在培养时 （填“能”或“不能”）采用经减数分裂得到的花粉粒作为外植体，原因是
。
6 / 6第3课时 动物体细胞核移植技术和克隆动物
知识点一 体细胞核移植的过程
1.在克隆哺乳动物过程中，通常作为核移植受体细胞的是去核的（ ）
A.卵原细胞 B.初级卵母细胞
C.次级卵母细胞 D.卵细胞
2.美国得克萨斯州科学家培育出世界上第一只克隆猫，这只小猫毛色花白，看上去完全不像生养它的花斑猫，也不完全像为它提供细胞核基因的猫。对该克隆猫毛色的解释合理的是（ ）
①发生了基因突变 ②提供卵母细胞的雌猫细胞质基因进行了表达 ③表型是基因型与环境共同作用的结果 ④代孕花斑猫的基因进行了表达
A.① B.①②③
C.②③④ D.①②③④
3.科学家利用小鼠的成纤维细胞成功培育了克隆鼠，培育过程如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A.细胞A为培育到MⅡ期的卵母细胞
B.克隆鼠的遗传物质主要来自鼠成纤维细胞
C.利用胚胎干细胞作为核供体更难培育克隆鼠
D.在培养瓶中培养成纤维细胞时会出现细胞贴壁和接触抑制现象
4.通过体细胞核移植技术培育克隆牛的过程中，未涉及的操作是（ ）
A.从供体取出组织用动物细胞培养技术培养
B.用灭活的病毒促进体细胞核与MⅡ期的卵母细胞融合
C.用物理或化学方法激活重构胚，使其完成发育进程
D.选择合适时期的胚胎进行移植，使其发育成完整个体
知识点二 体细胞核移植技术的应用前景及存在的问题
5.体细胞核移植技术在畜牧业、医药卫生以及其他领域有着广泛的应用前景。下列关于体细胞核移植技术的应用前景及存在问题的叙述，错误的是（ ）
A.可使人类更深入地了解胚胎发育及衰老的过程
B.以患者作为供体培育的人核移植胚胎干细胞诱导形成的组织、器官等，可避免免疫排斥反应
C.复活已灭绝的但仍保持完整细胞的动物
D.有研究者指出，绝大多数克隆动物存在健康问题，如体形过大、脏器缺陷、免疫失调等
6.“三亲婴儿”的培育过程可选用如下技术路线。据图分析，下列叙述不正确的是（ ）
A.“三亲婴儿”的出生属于有性生殖
B.选择捐献者的卵母细胞进行核移植，其中原因之一是卵母细胞体积比较大，易于进行显微操作去核
C.使用该技术可使母亲细胞质中的致病基因不会传递给后代
D.该技术可避免母亲的色盲基因传递给后代
7.下列关于动物细胞核移植技术和克隆动物的叙述，正确的是（ ）
A.目前在实验中，科学家可以用类似植物组织培养的方法获得完整的动物个体
B.核移植得到的克隆动物一般不存在健康问题
C.利用动物细胞核移植技术可有选择地繁殖某一性别的动物个体
D.核移植过程中的受体细胞最好是受精卵
8.下图所示为帕金森病和少年糖尿病的胚胎干细胞移植治疗方案。下列相关叙述错误的是（ ）
A.图中①为体细胞核移植技术
B.图中的胚胎干细胞是从早期胚胎中分离出来的
C.③指找到免疫匹配的患者进行移植
D.胚胎干细胞经过②发育为神经细胞和胰岛B细胞，从根本上说是转录水平的差异导致的
9.（2024·河南洛阳高二检测）中科院动物所和福州大熊猫研究中心合作，通过将大熊猫的细胞核植入去核后的兔子卵母细胞中，在世界上最早克隆出一批大熊猫胚胎，表明我国的大熊猫人工繁殖研究再次走到世界前列。下列有关克隆大熊猫胚胎的叙述中错误的是（ ）
A.胚胎细胞核的移植成功率高于成体细胞核的移植
B.兔子卵母细胞质的作用之一是激发大熊猫细胞核的全能性
C.重组细胞最初分裂时，DNA复制后不再进行转录
D.大熊猫的克隆成功证明细胞质具有调控细胞核发育的作用
10.（多选）（2024·辽宁葫芦岛高二检测）科学家培育克隆羊时，使用了三种细胞核的供体细胞，分别将这些细胞核移入去核卵母细胞中，形成重组细胞，发育成重构胚，这些重构胚的发育情况如下。据此分析正确的是（ ）
细胞核供体细胞类型 妊娠数/受体母羊数
乳腺上皮细胞 1/13
胚胎成纤维细胞 4/10
早期胚胎细胞 14/27
A.细胞核移植主要在同种动物、同种组织的细胞之间进行
B.重组细胞的发育与去核卵母细胞的细胞质有关
C.早期胚胎细胞作为细胞核的供体细胞时，妊娠成功率最高
D.培养动物细胞的培养液中含维生素、激素等多种能源物质
11.（多选）（2024·辽宁丹东高二期中）中国科学家首次利用基因编辑方法，并通过体细胞克隆技术，获得5只生物节律核心基因BMAL1敲除的克隆猴，这5只小猴的生物节律紊乱。下列说法错误的是（ ）
A.体细胞克隆猴的成功培育对于医学研究具有重要意义
B.该过程运用了细胞核移植技术，接受供体细胞核的是发育到MⅠ期的初级卵母细胞
C.培育生物节律紊乱的小猴过程中，需要对重构胚进行培养并进行胚胎移植
D.培育生物节律紊乱的小猴过程中，不可以用蛋白酶合成抑制剂激活重构胚
12.（2024·吉林四平高二检测）华南虎是原产中国的老虎品种，已有近30年没有野生华南虎出现的报告，一些专家认为野生华南虎已经濒临灭绝。科学工作者尝试用普通老虎完成体细胞克隆华南虎的研究，如图是其培育过程。请据图回答下列问题：
（1）克隆华南虎的遗传性状与虎 （填字母）基本一致。
（2）A、B、C 3只虎没有提供遗传物质的是 。
（3）克隆华南虎的过程是否遵循孟德尔的遗传定律？ 。为什么？
。
（4）有人设想将虎的体细胞与牛的体细胞进行融合，以获得新物种“虎—牛”，你认为依据目前的生物技术和理论能否实现这一愿望？ 。原因是
。
3 / 3第2课时 植物细胞工程的应用
知识点一 植物繁殖的新途径
1.如图为培育甘蔗脱毒苗的两条途径，研究发现经②过程获得的幼苗脱毒效果更好。下列相关叙述错误的是（ ）
A.①过程所取茎尖中的叶原基具有较高的分裂、分化能力
B.②过程的作用可能是阻碍病毒等进入茎尖分生组织
C.③④过程中基因的选择性表达导致了细胞脱分化
D.培养基A、B中生长素和细胞分裂素的浓度和比例不同
2.花粉植株是体细胞遗传研究和突变育种的理想材料。下面是培育四季柑橘（2N＝18）花粉植株的过程示意图，有关叙述错误的是（ ）
A.花粉植株培育的原理是花粉粒细胞具有全能性，其技术是植物组织培养
B.过程③是细胞再分化，诱导丛芽产生时应适当提高细胞分裂素的比例
C.四种培养基均为固体培养基，②③过程除培养基成分与含量不同外，其他条件均相同
D.观察处于分裂中期的四季柑橘花粉植株根尖细胞，可观察到9条染色体
知识点二 作物新品种的培育及细胞产物的工厂化生产
3.植物细胞培养是在植物组织培养技术的基础上发展起来的，下列有关植物细胞培养的叙述，不正确的是（ ）
A.植物细胞培养技术的目的是获得大量有生理活性的次生代谢物
B.植物细胞培养技术快速、高效，几乎不受季节、天气等的限制
C.利用生物反应器悬浮培养人参细胞，提取人参皂苷，用于生产保健药品和美容护肤用品
D.植物细胞培养需要在一定的温度、pH等条件下进行，但不需要进行无菌操作
4.下图表示优质玉米的培育过程，据图判断下列说法中，错误的是（ ）
A.B→E过程中细胞全能性的高低发生了改变
B.C试管中形成的是高度液泡化的薄壁细胞团块
C.植株F一般不能直接用于扩大种植
D.植株A和F体细胞中的染色体组数相同
5.紫草细胞中富含紫草宁，科研人员利用紫草新生的营养芽进行培养获得愈伤组织，再进行细胞悬浮培养，以获得更多的紫草宁。下列叙述正确的是（ ）
A.紫草宁是紫草细胞生长和生存所必需的次生代谢物
B.愈伤组织是由高度分化的一团薄壁细胞组成，无特定形态
C.愈伤组织细胞可用于细胞产物的工厂化生产，利用了愈伤组织细胞分裂快、代谢旺盛的特点
D.愈伤组织的诱导受植物激素配比的影响，不受营养物质和光照等因素的影响
6.辣椒素作为一种生物碱广泛用于食品保健、医药工业等领域，其获得途径如下图所示。下列叙述错误的是（ ）
A.图中愈伤组织、脱毒苗和高产细胞系的获得都体现了植物细胞的全能性
B.图中①和②分别表示辣椒组织培养中细胞的脱分化和再分化过程
C.②过程中需要用适宜配比的生长素和细胞分裂素溶液处理
D.用酶解法将愈伤组织分离成单细胞时，常用的酶是纤维素酶和果胶酶
7.（2024·湖北武汉高二期中）近年来，花卉市场上出现了一种名为“手指植物”或“试管植物”的新型工艺品，它们经植物组织培养技术获得，并终生生长在密闭的、无菌玻璃瓶内的培养基上，代谢缓慢，极具观赏价值。下列关于“手指植物”的说法，错误的是（ ）
A.购买者不需要向“手指植物”额外补充水分或营养物质
B.“手指植物”的成功培育并未体现细胞全能性
C.“手指植物”在培育过程中要经历脱分化和再分化
D.“手指植物”的培育方式属于无性繁殖
8.（多选）（2024·山东新泰市高二期中）甲品种青花菜具有由核基因控制的多种优良性状，另一远缘植物乙的细胞质中存在抗除草剂基因，欲将乙细胞质中的抗性基因引入甲中。下列相关叙述正确的是（ ）
A.过程A中取顶芽细胞进行体细胞杂交有利于获得脱毒苗
B.过程B中常用PEG诱导原生质体融合
C.过程C中只有融合细胞活性部位互补，具有完整的细胞结构，才可以正常生长
D.操作过程中生物材料、培养基、培养环境都要严格地灭菌
9.（多选）下图所示为利用二倍体西瓜的品种甲和品种乙培育其他新品种的流程图。下列相关叙述错误的是（ ）
A.品种丁高度不育，品种丙和品种甲属于不同物种
B.品种丁不能结出有子果实的原因是品种丁不能进行减数分裂
C.图中①④⑤过程所用到的试剂都是秋水仙素
D.由品种甲和品种乙培育出品种戊的原理只有染色体数目变异
10.紫杉醇是从红豆杉属植物树皮中提取分离出来的一种代谢物，具有显著的抗癌效果。科研人员设计如图1所示流程制备紫杉醇。为了获得大量的紫杉醇，先用植物外植体获得愈伤组织，然后在液体培养基中悬浮培养。请回答下列问题：
（1）图1中，为了防止微生物污染，过程①所用的外植体需用 消毒。
（2）在愈伤组织悬浮培养时，细胞干重、蔗糖浓度和pH的变化如图2所示，细胞干重在12 d后下降的原因有 ；培养液中适量的蔗糖不仅可以为培养的细胞提供能源，还可以调节培养基的 。
（3）多倍体愈伤组织细胞产生代谢物的量常高于二倍体。二倍体愈伤组织细胞经 处理，会产生染色体加倍的细胞。
（4）为了培养能高效产生紫杉醇的红豆杉柴胡植株，科研人员将红豆杉的愈伤组织和柴胡的愈伤组织用酶处理后，获得有活力的原生质体，再用 方法诱导使其融合，最后选择能够高效合成紫杉醇的杂种细胞进行培养。
（5）红豆杉的形成层在生长发育过程中并不能合成紫杉醇的根本原因是
。
3 / 3第1课时 动物细胞培养
知识点一 动物细胞培养的条件和过程
1.一般来说，动物细胞体外培养需要满足的条件有（ ）
①无毒的环境 ②无菌的环境 ③培养液中需加血清 ④温度与动物体温相近 ⑤需要O2 ⑥加CO2维持培养液的pH
A.①②③④⑤⑥ B.①②③④
C.①③④⑤⑥ D.①②③④⑥
2.（2024·云南师范大学附中月考）下列关于动物细胞培养过程的叙述，错误的是（ ）
A.大多数动物细胞增殖需要贴附于某些基质表面上才能进行
B.贴壁生长的细胞存在接触抑制的现象
C.动物细胞培养先进行原代培养再进行传代培养
D.传代培养时需要收集细胞，都可以直接利用离心法收集
3.（2024·江苏扬州期末）牙齿再生术的难点在于牙髓再生和牙周组织再生。空军军医大学口腔医院金岩教授率领团队经历多年潜心努力，从患者脱落的乳牙中获取牙髓干细胞，经过体外培养，将形成的干细胞聚合体植入患者牙髓腔里，使得牙齿神经、血管再生，完全恢复牙齿原有功能。针对以上技术，下列叙述正确的是（ ）
A.此技术的原理与植物组织培养的原理相同
B.此技术需要适宜的温度（36.5 ℃）和pH（6.8～7.8）
C.牙髓干细胞与胚胎干细胞一样都可以分化为成年动物体内任何一种类型的细胞，甚至产生个体
D.对于牙髓干细胞的培养过程需要经历原代培养，用胰蛋白酶处理后再用离心法收集悬液中的细胞进行传代
4.Transwell实验可模拟肿瘤细胞侵袭过程。取用无血清培养液制成的待测细胞悬液加入膜上铺有基质胶的上室中，下室为有血清培养液，上下层培养液以一层具有一定孔径的聚碳酸酯膜分隔开，放入培养箱中培养，通过计数下室的细胞量即可反映细胞的侵袭能力，如图所示。下列说法正确的是（ ）
A.需将培养室置于含适宜浓度 CO2的培养箱中，以刺激细胞呼吸
B.肿瘤细胞可分泌水解酶将聚碳酸酯膜分解后进入下室
C.血清培养液中含有某些因子促使肿瘤细胞向营养高的下室移动
D.进入下室的肿瘤细胞数量越多，说明肿瘤细胞的分裂能力越强
5.实验小鼠皮肤细胞进行贴壁生长培养的基本过程如图所示。下列叙述不正确的是（ ）
实验小鼠皮肤组织皮肤细胞原代培养传代培养
A.甲过程需要在无菌条件下进行
B.乙过程需要将获得的皮肤组织分散成单个细胞
C.原代培养时可能出现接触抑制现象
D.丁过程可以直接离心来进行传代培养
知识点二 干细胞培养及其应用
6.下列关于ES细胞和iPS细胞及其应用的说法，正确的是（ ）
A.ES细胞存在于早期胚胎中，能分化成各种功能细胞，不能形成生物个体
B.ES细胞存在于成体组织和器官内，能分化成特定的组织
C.iPS细胞存在于成体组织和器官内，能分化成特定的组织
D.iPS细胞是人工诱导产生的，也可诱导分化成为各种组织细胞
7.（2024·山东青岛高二期末）如图为诱导多能干细胞（iPS细胞）用于治疗糖尿病的示意图，下列相关叙述错误的是（ ）
A.干细胞存在于多种组织和器官中，包括胚胎干细胞和成体干细胞等
B.诱导iPS细胞分化的实质是动物细胞核具有发育的全能性
C.除图中的成纤维细胞外，已分化的T细胞和B细胞等均能被诱导为iPS细胞
D.将分化得到的胰岛细胞移植回病人体内治疗，理论上可避免免疫排斥反应
8.（2024·河南周口期末）如图表示科学家利用牛的体细胞诱导出多能干细胞（iPS），进而再分化成多种体细胞的过程。下列相关叙述错误的是（ ）
A.过程①所取的组织可用胰蛋白酶处理成单个细胞
B.过程②转入的相关因子影响体细胞内基因的表达
C.过程③所用培养液和所有培养用具需进行灭菌处理
D.过程④获得的神经细胞和肌细胞含有的基因种类不同
9.（2024·河南联考期末）目前肺类器官主要有两种培养方式：其一是诱导多能干细胞（iPS细胞）生成；其二是将肺上皮干细胞与筛选后的体细胞进行共培养（过程如图所示）。下列叙述错误的是（ ）
A.iPS细胞具有组织特异性，只能分化成特定的细胞或组织
B.肺类装配体的培养需要适宜的营养、温度、pH等基本条件
C.培养肺类装配体时需定期更换培养液以便清除代谢废物等
D.肺类器官A和B细胞中的DNA相同，RNA和蛋白质存在差异
10.下图为动物细胞培养过程中，细胞数量的指数变化示意图。下列表述正确的是（ ）
A.初代培养过程中，细胞不会发生基因突变
B.细胞分裂8次以上时，大部分细胞老化、死亡
C.传代培养时，少数细胞会克服细胞寿命的自然极限，其遗传物质发生了改变
D.有限细胞系适于作为疫苗的宿主细胞
11.（多选）在治疗大面积烧伤病人时，通常选取皮肤烧伤患者的自身细胞（如具有分裂能力的成纤维细胞），经体外培养获得自体健康皮肤，再通过皮肤移植手术对患者进行治疗。下列说法错误的是（ ）
A.通常选取皮肤中分裂能力强、易培养的成纤维细胞或皮肤干细胞进行体外培养
B.用胃蛋白酶处理组织使其分散成单个细胞，有利于单个细胞与培养液充分接触
C.该细胞体外培养过程只需要提供O2，其呼吸产生的CO2就足以维持培养液的pH
D.与体外培养癌细胞过程相比，该患者皮肤细胞培养过程中会出现接触抑制现象
12.（多选）为了初步检测药物X和Y的抗癌活性，在细胞培养板的每个孔中加入相同数量的肝癌细胞，使其贴壁生长，实验组加入等体积相同浓度的溶于二甲基亚砜（溶剂）的药物X或Y，对照组中也加入了一定的溶液，培养过程及结果如图所示。下列有关叙述正确的是（ ）
实验结果
组别 细胞个数（个/孔）
对照 7.8×106
药物X 6.7×104
药物Y 5.3×105
A.对照组和实验组均设置了三个孔，可以减少实验误差
B.可用血细胞计数板对肝癌细胞进行计数
C.对照组中加入的溶液是和实验组等体积的无菌蒸馏水
D.根据实验结果，可以初步判断药物X的抗癌效果较好
13.（多选）如图所示是某动物细胞培养时，培养液中活细胞和死亡细胞密度统计结果，下列相关叙述正确的是（ ）
A.实验中要控制胃蛋白酶溶液浓度和处理时间，以免损伤细胞
B.培养液中应适当加入青霉素、链霉素，以避免杂菌污染
C.bc段变化的主要原因是培养液中营养物质不足及有害代谢产物积累
D.培养至第6 d时，新产生的细胞数等于死亡细胞数
14.如图为动物细胞培养过程中细胞增殖情况的变化曲线，图中O、A、B、C、D、E是曲线上的点，其中B、E两点表示经筛选、分装后继续培养。据图回答问题：
（1）通常将动物组织处理后的初次培养称为 ，在图中是 段（填字母）。
（2）在动物细胞培养时，将细胞所需的营养物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基称为 培养基。通常在培养基中还需要加入适量血清等一些天然成分，血清作为天然培养基的作用是 。
（3）动物细胞培养和植物组织培养过程中，就细胞增殖、分化来说，动植物细胞都要进行 ，不同的是植物细胞还要进行 。
15.（2024·山东泰安模拟）胚胎干细胞必须从胚胎中获取，但这涉及伦理问题，因而限制了它在医学上的应用。科学家通过体外诱导成纤维细胞，获得了类似于胚胎干细胞的一种细胞，称为诱导多能干细胞（简称iPS细胞）。因为诱导过程无须破坏胚胎，而且iPS细胞可来源于病人自身的体细胞，因此iPS细胞的应用前景优于胚胎干细胞。下图为iPS细胞的获得及用其培育不同种细胞的示意图（c-Myc、Klf4、Sox2和Oct-3/4等基因与细胞的脱分化有关）。回答下列问题。
（1）在对成纤维细胞进行培养时，常用胰蛋白酶处理使之分散成单个细胞，这说明细胞间的物质主要为 ， （填“能”或“不能”）用胃蛋白酶处理成纤维细胞，原因是
。
（2）在培养iPS细胞的过程中，培养基中应含有细胞所需的各种营养物质，并定期更换培养液。定期更换培养液的目的是 。
为了给培养物提供无菌环境，可进行的操作是 。
（3）过程③④为iPS细胞提供的条件不同，分化得到的细胞不同，可知细胞分化是 的结果。若iPS细胞来源于病人自身体细胞的诱导，再将其分化出的细胞移入患者体内的优势是 。
（4）如果诱导iPS细胞定向分化为原始生殖细胞，该技术可能的应用是
。
16.动物器官的体外培养技术对于研究器官的生理、病理过程及其机制意义重大。下图是一个幼龄小鼠的肝脏小块培养装置示意图。请回答下列问题：
（1）肝脏小块取自幼龄鼠是因为幼龄鼠的肝脏 ，肝脏切成小薄
片，这有利于肝脏细胞 。
（2）培养液中添加抗生素是为了 ，但要注意选择抗生素的种类和剂量，以保证抗生素对肝脏无害。培养液中的营养物质种类主要包含葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等，并按照所需数量严格配制而成。这样的培养基称为 培养基。使用此种类的培养基，通常需要加入 等一些天然成分。
（3）有机物X有毒性，可诱发染色体断裂。利用上图所示装置和提供的下列材料用具，探究肝脏小块对有机物X是否具有解毒作用。
材料用具：肝脏小块，外周血淋巴细胞，淋巴细胞培养液，植物凝集素（刺激淋巴细胞分裂），显微镜，载玻片，盖玻片，玻璃皿，滴管，吉姆萨染液（使染色体着色），有机物X溶液等。
实验过程：
①在淋巴细胞培养液中加入植物凝集素培养淋巴细胞，取4等份，备用。
②利用甲、乙、丙、丁4组上图所示装置，按下表步骤操作（“√”表示已完成的步骤）。
甲 乙 丙 丁
步骤一：加入肝脏培养液 √ √ √ √
步骤二：加入有机物X溶液 √ √
步骤三：放置肝脏小块 √ √
③培养一段时间后，取4组装置中的等量培养液，分别添加到4份备用的淋巴细胞培养液中继续培养。
④一段时间后取淋巴细胞分别染色、制片。在显微镜下观察 ，并对比分析。若观察到 ，则说明肝脏小块对有机物X具有解毒作用。
（4）分析实验操作步骤，实验中设置甲、乙两组的目的是排除 对实验结果的影响。
6 / 6第2课时 胚胎工程技术及其应用
知识点一 体外受精
1.试管动物技术是指通过人工操作使精子和卵子在体外条件下成熟和受精，并通过培养发育为早期胚胎后再经移植产生后代的技术。下列关于试管动物技术的叙述，不正确的是（ ）
A.该技术可以更多、更有效地利用动物卵细胞
B.运用该技术繁育后代的过程属于有性生殖
C.可实现优良品种的快速、大量繁殖
D.运用试管动物技术培育动物的过程全部在体外进行
2.在生物学上试管婴儿技术属于（ ）
A.有性生殖、体外受精 B.无性繁殖、体内发育
C.有性生殖、体内受精 D.无性繁殖、体外发育
3.如图是通过体外受精技术培育试管动物的大致流程示意图，下列叙述错误的是（ ）
A.采集的精子不能直接与成熟的卵母细胞完成体外受精
B.①②过程分别为受精和减数分裂
C.自然孕育时，图中的①～④过程都是在输卵管中完成的
D.早期胚胎在生理状况相同的同种雌性动物体内都可继续发育
知识点二 胚胎移植和胚胎分割
4.（2024·河南周口高二期末）无论是转基因、核移植还是体外受精所获得的胚胎，都必须移植给受体才能获得后代，下列有关说法错误的是（ ）
A.胚胎工程的最终技术环节一般都是胚胎移植
B.进行同期发情处理，有助于使受体生理状态适于接受移植的胚胎
C.胚胎移植的生理学基础包括受体不会对移植胚胎发生免疫排斥反应
D.对牛进行胚胎移植时，供体公牛、母牛和受体母牛必须是同一品种
5.如图表示牛胚胎移植的流程，其中①～④表示相应的操作流程。下列相关叙述错误的是（ ）
A.过程①是注射相关激素，使供、受体同期发情
B.过程②是注射促性腺激素，使供体超数排卵
C.过程③主要涉及人工授精和从卵巢中冲取胚胎
D.过程④的主要目的是选择适合移植的胚胎
6.（2024·山东聊城高二期中）下列关于胚胎分割移植的叙述，不正确的是（ ）
A.胚胎分割移植存在一些问题，比如刚出生的动物体重偏轻、毛色和斑纹存在差异等
B.分割胚胎一般用分割针或者分割刀进行分割
C.不论选择桑葚胚还是囊胚进行分割，分割时的具体操作完全相同
D.胚胎分割所需要的主要仪器设备为体视显微镜和显微操作仪
7.如图表示研究人员利用胚胎工程培育优质奶牛的过程，下列相关说法正确的是（ ）
A.在胚胎发育过程中，受精卵通过有丝分裂不断增加体细胞数目
B.在进行步骤③时，应选择发育良好的原肠胚来操作
C.在胚胎发育中，卵裂期细胞数量不断增多，胚胎体积不断增大
D.步骤①代表奶牛的体外受精，属于无性繁殖的方式
8.胚胎工程中各种胚胎操作技术如图所示。下列分析正确的是（ ）
A.从良种公牛精巢内获得的精子可直接与获能的卵细胞结合受精
B.早期囊胚a、b、c的基因型相同
C.切割桑葚胚和囊胚时的具体操作是完全相同的
D.图中“小牛”的性别可能为雄性或雌性
9.（2024·辽宁锦州高二期末）如图表示移植卵裂期胚胎和囊胚的流产率与受孕妇女年龄的关系，下列相关叙述正确的是（ ）
A.体外受精时，需用促性腺激素处理使精子获能
B.卵裂期细胞和囊胚细胞均未分化
C.实验结果表明，卵裂期胚胎移植成功率较高
D.受孕妇女年龄越大，胚胎移植的流产风险越高
10.（多选）研究人员对新西兰白兔不同阶段胚胎在三种培养液中的分割效果进行研究，结果如表。下列相关叙述正确的是（ ）
分割胚胎 培养液 桑葚胚 囊胚
分割胚胎数 分割成功率（％） 分割胚胎数 分割成功率（％）
PBS 20 75.0 26 80.8
TCM－199 38 80.3 33 84.8
DMEM 44 80.7 42 81.0
合计 102 78.7 101 82.2
A.应选择发育良好、形态正常的桑葚胚或囊胚进行胚胎分割
B.结果显示在DMEM培养液中分割效果优于其他两种培养液
C.分割的两种胚胎数量应足够多以减少实验误差
D.胚胎分割技术可用于优良种畜的快速繁殖
11.（多选）（2024·山东菏泽高二检测）研究人员探究不同冷冻处理方法对囊胚分割效果的影响，结果如表所示。下列有关叙述正确的是（ ）
处理方法 分割成功率/％ 半胚存活率/％
1 冷冻后分割 76.4 66.5
2 分割后冷冻 76.5 57.6
A.分割时，必须将滋养层和透明带均等分割
B.胚胎冷冻后分割，更有利于提高分割成功率
C.半胚移植后，可与受体子宫建立正常的组织联系
D.同一胚胎分割获得的不同个体性状不一定相同
12.如图表示哺乳动物克隆的几种方法的主要步骤，据图回答下列问题：
（1）方法2获得的小牛的遗传物质来源于 。方法1和方法2更容易获得克隆动物的是 。方法3获得的①②中的遗传物质是否相同？ （填“是”或“否”）。
（2）细胞B来自囊胚的 ，细胞C应取自供体3的 细胞进行处理。
（3）胚胎移植是克隆动物的最后一道工序，受体能为供体的胚胎提供相同的生理环境，依据的生理学基础是
。
（4）世界卫生组织解释克隆为“遗传上同一机体或细胞系（株）的无性繁殖”。你认为在细胞工程、胚胎工程中哪些技术也属于克隆？
（至少答出三个）。
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