课件37张PPT。第一节 微生物的分离和培养 19世纪中期,法国的酿造业在生产过程中,出现了葡萄酒变酸、变味的怪事。经过一番研究,法国科学家巴斯德发现,导致生产失败的根源在于发酵物中混入了杂菌。 微生物是结构简单、形体微小,若想得到纯净的微生物,就必须对其进行培养和分离。
今天我们就以大肠杆菌为例学习微生物的培养与分离。1.特点:结构都相当简单,个体多数十分微小,通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到,有的甚至没有细胞结构,且体内一般不含有叶绿素,不能进行光合作用。2.微生物包括五类病 毒
细 菌
放线菌
真 菌
原生动物 培养基(培养液)是由人工方法配制而成的,专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。
固体培养基 液体培养基 半固体培养基1.培养基的类型成分区别:琼脂2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方细菌喜荤,霉菌喜素大肠杆菌配方
酵母提取物:0.25g 蛋白胨:0.5g
Nacl:0.5g 琼脂:1g 水:50ml3.培养基内所含的基本物质①一般营养物质水、碳源、氮源、无机盐
②其他物质pH、特殊营养物质,例如:生长因子(即细菌生长必需,而自身不能合成的化合物)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。 4.培养基的用途液体培养基:增菌、工业生产
固体培养基:纯化(分离), 鉴定、活菌计数、 保藏菌种
半固体培养基:动力检测1.无菌操作泛指在培养微生物的操作中,所有防止杂菌污染的方法。
无菌操作是培养微生物成功的关键!(1)消毒定义:2.消毒与灭菌的概念及两者的区别 (2)灭菌的定义:是指杀灭病原微生物的方法。 是指杀灭或清除环境中一切微生物(包括芽胞、孢子)的方法a.灼烧灭菌3.常用灭菌的方法b.干热灭菌:
160-170℃ 下加热1-2h。
c.高压蒸气灭菌:
100kPa、121℃ 下维持15-30min.配制培养基包器材灭菌菌种扩增倒平板接种、划线培养观察记录实验操作2配制培养基包器材灭菌菌种扩增倒平板接种、划线培养观察记录配制培养基MS培养基的配制流程图配制培养基包器材灭菌菌种扩增倒平板接种、划线培养观察记录包器材包器材配制培养基包器材灭菌菌种扩增倒平板接种、划线培养观察记录高压锅灭菌条件:
121℃(1kg/c㎡)
气压100kPa
20min灭菌配制培养基包器材灭菌菌种扩增倒平板接种、划线培养观察记录摇床震荡培养12h(于LB液体培养基中)菌种扩增配制培养基包器材灭菌菌种扩增倒平板接种、划线培养观察记录倒平板灭菌后的培养基在无菌操作台上倒入4个培养皿中,倒后立即置于水平位置上,轻轻晃动,使培养基铺满平皿底部,待凝,使之形成平面。配制培养基包器材灭菌菌种扩增倒平板接种、划线培养观察记录接种将斜面上培养的大肠杆菌菌种接种到灭菌后的液体培养基中,使其在37℃摇床培养24小时。注意事项:
1.火焰旁从斜面上用接种环取菌;
2.取菌前接种环要用酒精灯灼烧灭菌,冷却后方能取菌;
3.取菌后封口膜和棉塞复原。烧至暗红接种划线
1)灼烧接种环;
2)接种环冷却后,蘸取带菌培养物;
3)在近火焰处,让带菌接种环在固体培养基上划线。
①④③②分离后,一个菌体便会形成一个菌落,这是消除污染杂菌的通用方法,也是用于筛选菌株的最简便方法之一。1.关微生物营养物质的叙述中,正确的是( )
A.是碳源的物质不可能同时是氮源
B.凡碳源都提供能量
C.除水以外的无机物只提供无机盐
D.无机氮源也能提供能量D解析:A、B选项的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源;有的碳源可同时是氮源;有的碳源同时是能源;有的碳源同时是氮源,也是能源。对于C选项,除水以外的无机物种类繁多,功能也多样。对于D选项,无机氮源提供能量的情况还是存在的,如NH3可为硝化细菌提供能量和氮源。2.下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是( )
A.防止杂菌污染
B.接种前菌种要进行灭菌
C.培养基和发酵设备都必须灭菌
D.灭菌必须在接种前B退出解析:发酵所用的菌种大多是单一的纯种,整个发酵过程不能混入其他微生物(杂菌),A正确;B错误,因为灭菌的目的是防止杂菌污染,但实际操作中不可能只消灭杂菌,而是消灭全部微生物。C正确,因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌;发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的,灭菌必须在接种前,如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。