第四部分 浅尝现代生物技术
梳理知识 构建纲要
整合重点 提升技能
突破1 几种传统发酵技术菌种的比较
菌种 结构 代谢 应用
酵母菌 真核生物 异养兼性厌氧型 果酒发酵
醋化醋杆菌 原核生物 异养需氧型 果醋发酵
乳酸菌 原核生物 异养厌氧型 泡菜发酵
假丝酵母 真核生物 异养厌氧型 泡茶发酵
突破体验
1.下列有关果酒制作、果醋制作、泡菜腌制及相关菌种的叙述，正确的是( )
A.三种发酵过程中，均需将装置密封
B.泡菜腌制过程中，具有协同作用的菌种主要是醋化醋杆菌和假丝酵母
C.醋化醋杆菌是需氧型生物，其ATP产生的场所主要是线粒体
D.从生态系统的成分看，三种发酵相关菌种均属于分解者
答案 D
解析 醋化醋杆菌是需氧型生物，果醋发酵过程中，应向装置不断地通入无菌空气。泡菜腌制过程中，起主要作用的是乳酸菌和假丝酵母。醋化醋杆菌是一种细菌，属于原核生物，不具线粒体结构。
突破2 常用发酵技术的比较
菌种及其生活方式 重要反应 发酵条件 操作提示
果酒发酵 酵母菌兼性厌氧型 C6H12O6→2C2H5OH＋2CO2 温度：25～30 ℃；氧气：先通O2，然后控制无O2 选材和材料；防止杂菌污染；控制发酵条件；正确使用发酵装置
果醋发酵 醋化醋杆菌需氧型 C6H12O6→2C2H5OH＋2CO2；C2H5OH＋O2→CH3COOH＋H2O 温度：30～35 ℃；氧气充足 选材和材料；防止杂菌污染；控制发酵条件；正确使用发酵装置
泡菜发酵 乳酸菌厌氧型 C6H12O6→2C3H6O3 防止杂菌污染；密封严密 选择气密性好的泡菜坛；控制腌制条件
突破体验
2.随着生物技术的快速发展，发酵工程为人类提供了越来越多的产品。在发酵过程中，果醋、果酒、泡菜所用的菌种依次为________、________、________。在制作果醋、果酒、泡菜时，发酵过程中对氧气的需求分别是______、__________、__________。在制作果酒的过程中，为了检验发酵液中有无酒精生成，要用____________进行检验，若有酒精存在，将出现________；在制作果醋的过程中，检验醋酸产生的简单易行的方法是________或用pH试纸鉴定；在制作泡菜的过程中，刚开始由于某些微生物的作用，可将蔬菜中含有的硝酸盐还原为________，为检测泡菜中______________的含量，我们一般使用的方法是在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与________________发生重氮化反应后，再与N 1 萘基乙二胺偶联，形成____________色产物，再与标准显色液进行对照，可大致估算出________的含量。
答案 醋化醋杆菌 酵母菌 乳酸菌 有氧 无氧 无氧 重铬酸钾 灰绿色 品尝 亚硝酸盐 亚硝酸盐 对氨基苯磺酸 紫红 亚硝酸盐
突破3 植物组织培养流程
突破体验
3.如图甲是植物组织培养过程示意图，图乙是植物激素对愈伤组织分化影响的示意图。据图回答下列问题：
(1)植物组织培养的原理是植物细胞具有__________________________________________。
(2)在A过程中，为了有利于嫩枝组织细胞启动细胞分裂形成愈伤组织，常常需要在配制好的培养基中添加________。嫩枝组织细胞接种后2～5天时，若发现其边缘局部污染，原因可能是________________________________________________________________________。
(3)在过程B中，若愈伤组织没有形成根，但分化出了芽，其原因可能是__________________；
若要获得更多的愈伤组织，培养基中两种激素的含量应该是________________。
(4)切取经光照一段时间后的幼苗芽尖处的组织块，消毒后，接种到诱导再分化的培养基中培养，该培养基中两种植物激素浓度相同。从理论上分析，分化的结果是________；原因是
________________________________________________________________________。
答案 (1)全能性 (2)植物激素 嫩枝组织细胞消毒不彻底 (3)培养基中生长素较少，细胞分裂素较多 细胞分裂素中等量，生长素较少 (4)生根 培养基中细胞分裂素与生长素的浓度相等，而经光照后的幼苗芽尖处组织块含较多生长素，因此组织块中的细胞分裂素相对较少，生长素相对较多，故诱导生根(共14张PPT)
章末整合提升
第四部分 浅尝现代生物技术
梳理知识 构建纲要
整合重点 提升技能
内容索引
梳理知识 构建纲要
整合重点 提升技能
突破1 几种传统发酵技术菌种的比较
菌种 结构 代谢 应用
酵母菌 真核生物 异养兼性厌氧型 果酒发酵
醋化醋杆菌 原核生物 异养需氧型 果醋发酵
乳酸菌 原核生物 异养厌氧型 泡菜发酵
假丝酵母 真核生物 异养厌氧型 泡茶发酵
突破体验
1.下列有关果酒制作、果醋制作、泡菜腌制及相关菌种的叙述，正确的是
A.三种发酵过程中，均需将装置密封
B.泡菜腌制过程中，具有协同作用的菌种主要是醋化醋杆菌和假丝酵母
C.醋化醋杆菌是需氧型生物，其ATP产生的场所主要是线粒体
D.从生态系统的成分看，三种发酵相关菌种均属于分解者
解析 醋化醋杆菌是需氧型生物，果醋发酵过程中，应向装置不断地通入无菌空气。泡菜腌制过程中，起主要作用的是乳酸菌和假丝酵母。醋化醋杆菌是一种细菌，属于原核生物，不具线粒体结构。
答案
解析
突破2 常用发酵技术的比较
菌种及其生活方式 重要反应 发酵条件 操作提示
果酒发酵 酵母菌兼性厌氧型 C6H12O6→
2C2H5OH＋2CO2 温度：25～30 ℃；氧气：先通O2，然后控制无O2 选材和材料；防止杂菌污染；控制发酵条件；正确使用发酵装置
果醋发酵 醋化醋杆菌需氧型 C6H12O6→
2C2H5OH＋2CO2；C2H5OH＋O2→
CH3COOH＋H2O 温度：30～35 ℃；氧气充足 选材和材料；防止杂菌污染；控制发酵条件；正确使用发酵装置
泡菜发酵 乳酸菌厌氧型 C6H12O6→
2C3H6O3 防止杂菌污染；密封严密 选择气密性好的泡菜坛；控制腌制条件
突破体验
2.随着生物技术的快速发展，发酵工程为人类提供了越来越多的产品。在发酵过程中，果醋、果酒、泡菜所用的菌种依次为 、 、 。在制作果醋、果酒、泡菜时，发酵过程中对氧气的需求分别是 、 、
。在制作果酒的过程中，为了检验发酵液中有无酒精生成，要用_________进行检验，若有酒精存在，将出现 ；在制作果醋的过程中，检验醋酸产生的简单易行的方法是 或用pH试纸鉴定；在制作泡菜的过程中，刚开始由于某些微生物的作用，可将蔬菜中含有的硝酸盐还原为 ，为检测泡菜中 的含量，我们一般使用的方法是在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与
发生重氮化反应后，再与N -1- 萘基乙二胺偶联，形成 色产物，再与标准显色液进行对照，可大致估算出 的含量。
答案
醋化醋杆菌
酵母菌
乳酸菌
有氧
无氧
无氧
重铬酸钾
灰绿色
品尝
亚硝酸盐
亚硝酸盐
对氨基苯磺酸
紫红
亚硝酸盐
突破3 植物组织培养流程
突破体验
3.如图甲是植物组织培养过程示意图，图乙是植物激素对愈伤组织分化影响的示意图。据图回答下列问题：
(1)植物组织培养的原理是植物细胞具有 。
全能性
答案
答案
(2)在A过程中，为了有利于嫩枝组织细胞启动细胞分裂形成愈伤组织，常常需要在配制好的培养基中添加 。嫩枝组织细胞接种后2～5天时，若发现其边缘局部污染，原因可能是 。
(3)在过程B中，若愈伤组织没有形成根，但分化出了芽，其原因可能是
；若要获得更多的愈伤组织，培养基中两种激素的含量应该是 。
植物激素
嫩枝组织细胞消毒不彻底
培养基中生长素较少，细胞分裂素较多
细胞分裂素中等量，生长素较少
答案
(4)切取经光照一段时间后的幼苗芽尖处的组织块，消毒后，接种到诱导再分化的培养基中培养，该培养基中两种植物激素浓度相同。从理论上分析，分化的结果是 ；原因是________________________________________
________________________________________________________________________________________________________。
生根
培养基中细胞分裂素与生长素的浓度相等，
而经光照后的幼苗芽尖处组织块含较多生长素，因此组织块中的细胞分裂素相对较少，生长素相对较多，故诱导生根第7课时 植物的组织培养
考试要求
知识内容 考试属性及要求 考情解读
植物的组织培养 加试 1.进行菊花的组织培养。2.尝试植物激素的应用。3.说明植物组织培养的原理。
一、植物的组织培养
1.概念：取一部分植物组织，如叶、芽、茎、根、花瓣或花粉等，在无菌的条件下接种在三角瓶中的琼脂培养基上，给予一定的温度和光照，使之产生愈伤组织，或进而生根发芽。
2.原理：植物细胞的全能性。
3.过程：外植体愈伤组织芽、根―→植株
4.实验中使用的激素
(1)人工合成的萘乙酸代替生长素，人工合成的苄基腺嘌呤代替细胞分裂素。
(2)两者的摩尔浓度比决定组织是生根还是生芽。细胞分裂素与生长素的比例高时，诱导芽的生成；细胞分裂素与生长素的比例大致相等时，愈伤组织继续生长而不分化；细胞分裂素与生长素的比例低时，会趋于生根。
阅读教材，结合所学知识和提供的材料分析下面的内容。烟草植株的组织培养过程如下图所示：
1.根据图示植物组织培养的过程，回答相关问题。
(1)B是愈伤组织，其特点是：细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。
(2)A过程是脱分化，是指由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，又叫去分化。
(3)C过程是再分化，是指愈伤组织重新分化成根或芽等器官的过程。
(4)植物体上的细胞没有表现出全能性，而是分化成了不同的组织器官，这说明植物细胞全能性表达需要在离体的条件下进行。
(5)全能性表达的条件
离体的植物组织或细胞，在一定的营养物质、激素和其他外界条件的作用下就可能表现出全能性，发育成完整植株。离体的植物组织或细胞叫做外植体。
2.激素在植物组织培养过程中的作用
(1)培养基中加入的植物激素是生长素和细胞分裂素。
(2)两者的摩尔浓度比决定组织是生根还是生芽。
(3)在植物组织培养中，应把握好生长素和细胞分裂素的浓度、用量比例及使用顺序。下表为生长素和细胞分裂素使用先后顺序对植物细胞发育方向的影响。
使用顺序 实验结果
先使用生长素，后使用细胞分裂素 有利于细胞分裂，但细胞不分化
先使用细胞分裂素，后使用生长素 细胞既分裂也分化
同时使用 分化频率提高
3.植物组织培养的关键条件有哪些？体内细胞未表现全能性的原因是什么？
答案 条件之一：离体，一定的营养物质，激素(生长素、细胞分裂素)等；条件之二：培养基状态：固体培养基(需脱分化生根培养基及发芽培养基)。体内细胞未表现全能性的原因是基因的表达具有选择性。
4.热图解读：在植物组织培养再分化阶段中，逐渐改变培养基中植物激素X和植物激素Y的浓度比，细胞群的变化情况如下图所示：
若培养基中植物激素X的浓度为a、植物激素Y的浓度为a＋0.2，则细胞群分化的结果最可能是C试管，分析图可知，植物激素X的浓度小于植物激素Y的浓度时，有利于根的分化。
1.下列关于影响植物组织培养的因素中，说法正确的是( )
A.不同植物组织培养的难易程度不同，同一种植物材料培养的难易程度相同
B.在植物组织培养中，培养基中必须添加植物激素
C.植物激素中生长素和细胞分裂素的作用是互相独立的
D.pH、温度、光照条件等对植物组织培养特别重要
答案 D
解析 不同植物组织培养的难易程度不同，同一种植物材料也会因年龄、保存时间的长短等导致实验结果不同；在植物组织培养中，培养基中常常要添加植物激素，但不是都必须添加植物激素，如菊花茎段组织培养不必添加植物激素；各种植物激素的作用是相互联系的，而不是互相独立的。
2.下列关于植物组织培养中植物激素的使用的说法中，不正确的是( )
A.植物组织培养中的关键性激素是生长素和细胞分裂素
B.先使用生长素，后使用细胞分裂素，有利于细胞分裂和分化
C.先使用细胞分裂素，后使用生长素，细胞既分裂又分化
D.同时使用生长素和细胞分裂素时，两者用量的比例影响植物细胞的发育方向
答案 B
解析 用于植物组织培养的培养基中除营养成分外，还需添加植物激素，一般包括生长素和细胞分裂素；外植体脱分化、再分化的诱导方向取决于二者的比例。先使用生长素，后使用细胞分裂素，有利于细胞分裂，但细胞不分化；先使用细胞分裂素，后使用生长素，对细胞的分裂和分化均有利。
一题多变
判断正误：
(1)植物组织培养就是将离体的细胞、组织、器官等培育成愈伤组织( )
(2)植物组织培养的原理是植物细胞的全能性( )
(3)培养基中生长素和细胞分裂素的比例会影响脱分化和再分化( )
(4)植物组织培养过程需要严格的无菌操作( )
答案 (1)× (2)√ (3)√ (4)√
二、菊花的组织培养过程
1.发芽培养基和生根培养基的比较
(1)发芽培养基：细胞分裂素摩尔浓度大于生长素摩尔浓度的培养基。
(2)生根培养基：生长素摩尔浓度大于细胞分裂素摩尔浓度的培养基。
2.实验内容
以菊花为材料进行组织培养，首先，用细胞分裂素相对较多和生长素相对较少的培养基(发芽培养基)进行培养，使其长出较多的丛状苗；然后，将丛壮苗分株培养。分株后，再移入含有较多生长素的培养基(生根培养基)中，使其生根；将生根的苗从三角瓶中移至草炭土或蛭石中继续生长，待苗健壮后再移至土中。
3.菊花的组织培养操作流程
配制MS固体培养基
↓
外植体的消毒：用70%的乙醇和5%的次氯酸钠溶液对外植体进行消毒，注意时间不能太长
↓
接种：接种过程中插入外植体时形态学上端朝上，每个锥形瓶接种2～3个外植体。外植体接
种与细菌接种相似，操作步骤相同，而且都要求无菌操作
↓
培养：应该放在无菌箱中进行，并定期进行消毒，保持适宜的温度和光照
↓
移栽：将生根的苗从锥形瓶中移至草炭土或蛭石中继续生长，苗健壮后再移至土中
↓
栽培
1.MS培养基(植物组织培养用的培养基)的成分及各成分的作用
成分 作用
微量元素和大量元素 提供植物细胞生活所必需的无机盐
蔗糖 提供碳源，维持细胞渗透压
甘氨酸、维生素、烟酸、肌醇 满足离体植物细胞在正常代谢途径受一定影响后所产生的特殊营养需求
2.与LB培养基相比，MS培养基有何特别之处？
答案 LB培养基以蛋白胨、酵母提取物等有机营养为主，MS培养基则需提供大量的无机营养，无机盐混合物包括植物生长必需的大量元素和微量元素两大类。此外进行植物组织培养，培养基中需添加特定配比的生长素和细胞分裂素。
3.进行植物组织培养时为何必须保障“无菌”？为此需对外植体、培养基分别进行何种处理？
答案 若有杂菌污染，一方面可争夺营养，更重要的是可以产生毒素，从而使外植体受毒害而死亡，故必须保障无菌操作。为保障无菌，外植体需消毒，培养基则必须予以高压蒸汽灭菌。
4.在选取菊花茎段时，为何要选取生长旺盛的嫩枝？
答案 外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一，生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再分化。
5.不同植物、不同组织的生根和生芽是否都可使用与本实验相同的生长素和细胞分裂素浓度？
答案 不可以。
6.本实验用人工合成的激素，而不用植物中存在的天然激素，为什么？
答案 天然激素都有相应的使之分解的酶，所以作用时间短，而人工合成的激素，植物体内没有分解酶，作用时间长，效果显著。
小贴士 影响植物组织培养的因素及成功的关键1影响因素①内部因素：材料的选取。②外部因素：营养成分的种类及配比；植物激素的用量及使用顺序；pH、温度、光照等。2获得成功的关键①植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗逆性差、对培养条件要求较高。②培养材料一旦被微生物污染，就会导致实验失败。原因是微生物增殖快，生长迅速，消耗养分多，并产生代谢废物毒害培养材料。③无菌技术主要包括对操作空间、实验用具、实验材料以及操作者的消毒或灭菌。
3.下列关于MS培养基与微生物培养基的配方的不同之处，说法错误的是( )
A.MS培养基中常常添加植物激素，微生物培养基中不需要
B.MS培养基中的碳源和能源是蔗糖，微生物培养基中的碳源和能源主要是葡萄糖
C.MS培养基中需提供植物生长必需的大量元素和微量元素
D.MS培养基中不需加维生素，微生物培养基中要加维生素作生长因子
答案 D
解析 MS培养基中需要加入甘氨酸、维生素等物质，主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。
4.以野生菊花为材料进行的组织培养步骤如下图所示：
请回答：
(1)按照菊花的需求量，MS培养基由大量元素、微量元素和____________组成。MS培养基含有十几种化合物，配制不方便也难以称量准确，可将培养基中的各种成分扩大5～10倍分别称量，配成________，用于稀释。
(2)步骤X中的野生菊花一般选择________。
A.开过花的老枝
B.未开花植株的茎上部新萌生的侧枝
C.正在开花的枝条
D.任何枝条均可
(3)野生菊花外植体在接种前要用70%的________和5%的________溶液进行表面消毒。
(4)过程A在无菌的条件下把消毒后的野生菊花外植体接种在三角瓶的琼脂培养基上，给予适宜条件，使之产生愈伤组织。过程B要在________培养基上进行培养，使之长出较多的丛状苗。植物组织培养实验用人工合成的植物生长调节剂，而不用植物中存在的天然激素的原因是________________________________________________________________________。
(5)步骤Y表示________，再移植到土中培养(定植)，即可长成植株并开花。
答案 (1)有机成分 母液 (2)B (3)乙醇 次氯酸钠
(4)发芽(或细胞分裂素多于生长素) 人工合成的植物生长调节剂在植物中没有相应分解的酶，作用时间长，作用效果明显(意思合理即可)
(5)移栽锻炼
一题多变
判断正误：
(1)二倍体植株的花粉经脱分化与再分化后可得到稳定遗传的植株( )
(2)培育草莓脱毒苗所采用的主要技术是植物组织培养( )
(3)脱分化过程不需要植物激素，植物激素只有在再分化过程中发挥作用( )
(4)由于植物细胞都具有全能性，所以菊花的组织培养实验中选材不会影响实验的结果( )
答案 (1)× (2)√ (3)× (4)×
1.影响植物组织培养的因素包括( )
①培养基的配制 ②外植体的选取 ③激素的使用
④消毒 ⑤温度、pH、光照
A.①②③④⑤ B.①②③
C.①②③④ D.①②③⑤
答案 A
解析 植物组织培养过程受多种外界因素的影响，其中包括温度、光照、pH等，而培养基的成分、外植体的选取和消毒是否严格等也影响植物组织培养。
2.下列对植物组织培养过程中脱分化的叙述，正确的是( )
A.植物体的分生组织通过细胞分裂产生新细胞的过程
B.体内分化的细胞形态、结构和功能发生改变的过程
C.高度分化的植物器官、组织或细胞产生愈伤组织的过程
D.愈伤组织分裂产生大量相同细胞的过程
答案 C
3.在植物组织培养过程中，生长素用量与细胞分裂素用量的比值高时，下列描述正确的是( )
A.有利于根的分化和芽的形成
B.不利于根的分化和芽的形成
C.有利于芽的形成，抑制根的分化
D.有利于根的分化，抑制芽的形成
答案 D
解析 生长素用量与细胞分裂素用量的比值高时，有利于根的分化，抑制芽的形成；比值低时，有利于芽的分化，抑制根的形成；比值适中时，促进愈伤组织的形成。
4.下图为植物(菊花)组织培养过程示意图，请回答下列问题：
(1)培养基①和培养基②分别为________和________，两者最主要的区别是
________________________________________________________________________。
(2)若该培养基是MS固体培养基，则其基本组成是________、________、有机成分、激素和琼脂。
(3)愈伤组织发芽的根本原因是__________________________________________________。
(4)菊花组织在接种到培养基之前需进行________处理，整个组织培养过程需在________条件下进行。
(5)本实验用人工合成的激素，而不是植物中存在的天然激素的原因是_________________。
答案 (1)发芽培养基 生根培养基 发芽培养基中细胞分裂素的含量大于生长素的含量，而生根培养基中生长素的含量大于细胞分裂素的含量 (2)大量元素 微量元素 (3)基因的选择性表达 (4)消毒 无菌 (5)人工合成的激素易合成、原料广泛、效果稳定
解析 (1)菊花组织在培养基①中形成愈伤组织后长出丛芽，在培养基②中生根后形成试管苗，所以①是发芽培养基，②是生根培养基，两者最主要的区别是发芽培养基中细胞分裂素的含量大于生长素的含量，而生根培养基中生长素的含量大于细胞分裂素的含量。
(2)MS固体培养基由大量元素、微量元素和有机成分、激素、琼脂组成。
(3)愈伤组织发芽是再分化的过程，其根本原因是基因的选择性表达。
(4)菊花组织在接种到培养基之前必须先进行消毒处理，整个组织培养过程必须在无菌条件下进行。
(5)人工合成的植物激素具有容易合成、原料广泛、效果稳定的优点，因此在农业生产中被广泛应用。
课时作业
[基础过关]
1.下列实例中能体现细胞全能性的是( )
①用悬浮液培养胡萝卜单个细胞可形成可育的植株
②植物用种子繁殖后代 ③用烟草单个组织培养形成可育的完整植株
A.①② B.①③
C.②③ D.①②③
答案 B
解析 细胞全能性是指已经分化的细胞仍然具有发育成完整个体的潜能。其中①和③都属于由分化的细胞经过培养形成可育的植株，体现了细胞的全能性。植物用种子繁殖后代，实际上就是由一个受精卵，通过细胞的增殖和分化发育成新个体，这是由未经分化的细胞(受精卵)发育成新个体的过程，因此不能体现细胞的全能性。
2.当植物脱离原来所在植物体的器官或组织而处于离体状态时，下列属于使其表现出全能性，发育成完整植株的条件是( )
A.细胞分裂素 B.生长素
C.一定的营养物质 D.以上三者均是
答案 D
解析 植物细胞表现全能性的条件：离体状态、一定的营养条件、激素、适宜的温度、pH等外界条件，无菌条件等。
3.下列哪组符合菊花组织培养的基本步骤( )
A.制备MS培养基→外植体消毒→接种→培养→移栽→栽培
B.制备MS培养基→外植体消毒→接种→培养→栽培→移栽
C.制备MS培养基→外植体消毒→接种→栽培→培养→移栽
D.制备MS培养基→外植体消毒→接种→移栽→培养→栽培
答案 A
解析 移栽是指将培养基上培养的幼苗长壮后移栽到土壤中，栽培是对移栽后的幼苗进行精细管理培养的过程，应先移栽后栽培。
4.某愈伤组织在如图甲所示的培养基中培养一段时间后得到如图乙所示的结构。经分析可知该培养基中( )
A.细胞分裂素多，生长素少
B.细胞分裂素少，生长素多
C.细胞分裂素和生长素的用量相等
D.只有生长素
答案 B
解析 从图乙中可以看出该培养基有利于生根且抑制芽的形成，所以可推断该培养基中生长素多，细胞分裂素少。
5.下列关于植物组织培养中的灭菌操作，错误的是( )
A.外植体可以用酒精消毒
B.镊子等器械需酒精消毒
C.操作前手需酒精消毒
D.培养基需高压蒸汽灭菌
答案 B
解析 植物组织培养需严格的无菌操作，包括：培养基需用高压蒸汽灭菌；操作前手需用酒精消毒；外植体应浸泡在酒精中杀菌；整个操作过程在酒精灯火焰旁进行，同时对镊子等器械灼烧灭菌。
6.植物组织培养过程中分化成的幼苗需要移栽，下列关于移栽措施的说法错误的是( )
A.移栽时，应打开培养瓶的封口后马上移植
B.移栽时，应先将培养瓶的封口打开一段时间，让试管苗在培养间生长几日
C.移栽时需用流水清洗根部的培养基
D.幼苗需移植到消过毒的新环境下生活一段时间，等幼苗长壮后再移栽到土壤中
答案 A
解析 植物组织培养过程中，移栽生根的菊花以前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日；然后用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的草炭土或蛭石中生活一段时间，等幼苗长壮后再移栽到土壤中。因此，B、C、D均正确，A错误。
7.关于接种时应注意的事项全部正确的是( )
①接种室要消毒 ②无菌操作 ③接种时可以谈话 ④外植体如茎段、茎尖可随机放入培养基 ⑤接种时要防止交叉污染 ⑥接种完立刻盖好瓶口
A.①②③④ B.①②③④⑤⑥
C.③④⑤⑥ D.①②⑤⑥
答案 D
解析 整个接种过程必须在无菌条件下进行，不能谈话，防止呼吸产生的污染，因此操作过程应禁止谈话，并戴口罩；接种的外植体放入培养基时注意形态学下端插入，而且分布均匀，不能随机放入，以保证必要的营养物质和光照条件。
[能力提升]
8.实验中对已长出的健壮丛状苗，紧接下去应该进行怎样的处理( )
A.移入日光灯下，在发芽培养基中培养
B.移入日光灯下，在生根培养基中培养
C.转入遮阳环境中，在草炭土或蛭石中继续培养
D.转入遮阳环境中，土中栽种
答案 B
解析 发芽培养获得的丛状苗应在无菌条件下转入日光灯下的生根培养基中进行生根培养。
9.无菌技术是植物组织培养能否获得成功的关键，以下说法正确的是( )
①由于植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对无菌操作的要求非常严格 ②对培养基用高压蒸汽灭菌 ③对培养材料进行表面灭菌时，一方面要考虑药剂的消毒效果，另一方面还要考虑植物材料的耐受能力 ④不同药剂、不同植物材料甚至不同器官要区别对待 ⑤对培养材料可用高压蒸汽灭菌 ⑥如果不小心导致污染，将可能造成培养工作的前功尽弃
A.①②③④⑤ B.①②③④
C.①②③④⑥ D.①②③④⑤⑥
答案 C
解析 本题考查植物组织培养的无菌操作问题，培养材料要保持细胞活性，所以只能消毒且要在温和条件下进行，既要考虑药剂的消毒效果，又要考虑植物的耐受能力，所以⑤错。
10.下列关于植物组织培养的叙述中，错误的是( )
A.培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压
B.培养基中的生长素和细胞分裂素影响愈伤组织的形成和分化
C.离体器官或组织的细胞都必须通过脱分化才能形成愈伤组织
D.同一株绿色开花植物不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基因组成相同
答案 D
解析 在植物组织培养过程中，蔗糖是最常用的碳源和能源物质，蔗糖还可以调节培养基的渗透压，从而维持细胞正常的形态和功能；愈伤组织的分化常受细胞分裂素及生长素用量比例的调节，当这一用量比值高时，可诱导芽的形成，反之则有促进生根的趋势；对于同一株绿色开花植物来说，组织培养的对象既可以是体细胞也可以是生殖细胞，杂合子可以产生基因组成不同的花粉，因此获得的愈伤组织的基因组成不一定相同。
11.如图是用胡萝卜根细胞进行组织培养的某些过程示意图。请据图回答下面的问题：
(1)把组织培养的过程按正确顺序排列________(以字母表示)。
(2)实验前试管和培养基应经________处理。
(3)培养基中除加入各种营养物质外，还应加入______、________等植物激素。
(4)图D上的细胞团是______________。
(5)从理论上讲，植物细胞有形成再生植株的可能性，这是________的表现。
答案 (1)BDCA (2)灭菌 (3)生长素 细胞分裂素
(4)愈伤组织 (5)细胞全能性
解析 (1)植物组织培养技术可用下图表示：
外植体愈伤组织生芽、生根―→ 植株
(2)实验前所用器具和材料都应灭菌。
(3)在进行植物组织培养中，生长素和细胞分裂素在脱分化、再分化中起关键性作用。
(4)脱分化后形成的细胞团是愈伤组织。
(5)植物细胞发育成完整植株，是细胞全能性的表现。
12.为了探究6－BA和IAA对某菊花品种茎尖外植体再生丛芽的影响，某研究小组在MS培养基中加入6－BA和IAA，配制成四种培养基(见下表)，灭菌后分别接种数量相同、生长状态一致、消毒后的茎尖外植体，在适宜条件下培养一段时间后，统计再生丛芽外植体的比率(m)，以及再生丛芽外植体上的丛芽平均数(n)，结果如下表。
培养基编号 浓度/mg·L－1 m/% n/个
6－BA IAA
1 0.5 0 76.7 3.1
2 0.1 77.4 6.1
3 0.2 66.7 5.3
4 0.5 60.0 5.0
回答下列问题：
(1)按照植物的需求量，培养基中无机盐的元素可分为________和________两类。上述培养基中，6－BA属于________类生长调节剂。
(2)在该实验中，自变量是________，因变量是____________________________________，
自变量的取值范围是___________________________________________。
(3)从实验结果可知，诱导丛芽总数最少的培养基是________号培养基。
(4)为了诱导该菊花试管苗生根，培养基中一般不加入________(填“6－BA”或“IAA”)。
答案 (1)大量元素 微量元素 细胞分裂素 (2)IAA浓度 再生丛芽外植体的比率(m)和再生丛芽外植体上的丛芽平均数(n) 0～0.5 mg·L－1 (3)1 (4)6－BA
解析 植物组织培养所用的培养基的主要成分有无机盐(大量元素和微量元素)、有机物，常常还需要添加植物激素。根据实验结果可知，本实验所用培养基中加入的6－BA属于细胞分裂素类生长调节剂。根据表中所列数据及实验结果可知，本实验自变量是IAA浓度，其取值范围是0～0.5 mg·L－1，因变量是再生丛芽外植体的比率(m)和再生丛芽外植体上的丛芽平均数(n)。当生长素用量与细胞分裂素用量的比值高时，有利于根的分化，所以为了诱导菊花试管苗生根，培养基中一般不加入6－BA。
[个性拓展]
13.近几年生物技术发展迅猛，和我们的生活越来越密切了。请回答下列问题：
(1)利用植物组织培养可实现农作物的大规模快速繁殖，植物组织培养基的类型有________、发芽培养基。如图中，由外植体通过植物组织培养技术培育成完整植物，这项技术利用了植物细胞具有全能性的原理。图中A代表________；A→B过程表示________。
―→
(2)在植物组织培养中关于消毒和灭菌操作的叙述，正确的是( )
A.操作者的双手可以不消毒
B.外植体可以用酒精消毒
C.镊子等器械需用酒精灭菌
D.接种后培养基需用高压蒸汽灭菌
(3)通常用来分离菌种的方法有________和________。
(4)具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生酵母菌进行诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：
第一步：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。
第二步：制备选择培养基。在基本培养基的基础上，还要添加__________________，加琼脂后灭菌，制成固体平板。
第三步：将紫外线照射后的菌液稀释涂布平板。
第四步：根据是否能在该培养基上生长筛选出突变菌。
(5)土壤中有些细菌含有脲酶，这些细胞能够将________分解成氨，从而使培养基中加入的________指示剂产生红色透明环。
答案 (1)生根培养基 愈伤组织 再分化 (2)B (3)划线分离法 涂布分离法 (4)高浓度蔗糖(或葡萄糖)、调低pH(加酸) (5)尿素 酚红
解析 (1)植物组织培养基的类型有生根培养基和发芽培养基。(2)在植物组织培养中操作者的双手应用酒精进行消毒，A错误；外植体可以用酒精消毒，B正确；镊子等器械需用高压蒸汽灭菌法灭菌操作过程中还需灼烧灭菌，培养基接种前需用高压蒸汽灭菌法灭菌，C、D错误。(3)通常用来分离菌种的方法有划线分离法和涂布分离法。(4)筛选具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌，需在普通培养基的基础上再添加高浓度蔗糖(或葡萄糖)、调低pH(加酸)。(5)含有脲酶的细菌能够将尿素分解成氨，使酚红显红色。(共43张PPT)
第7课时 植物的组织培养
第四部分 浅尝现代生物技术
考试要求
知识内容 考试属性及要求 考情解读
植物的组织培养 加试 1.进行菊花的组织培养。
2.尝试植物激素的应用。
3.说明植物组织培养的原理。
内容索引
一、植物的组织培养
二、菊花的组织培养过程
当堂检测
一、植物的组织培养
基础梳理
1.概念：取一部分植物组织，如叶、芽、茎、根、花瓣或花粉等，在______
的条件下接种在三角瓶中的琼脂培养基上，给予一定的 和 ，使之产生 ，或进而生根发芽。
2.原理： 。
3.过程：外植体 愈伤组织 芽、根―→植株
无菌
温度
光照
愈伤组织
植物细胞的全能性
脱分化
再分化
4.实验中使用的激素
(1) 代替生长素， 代替细胞分裂素。
(2)两者的 决定组织是生根还是生芽。细胞分裂素与生长素的比例 时，诱导芽的生成；细胞分裂素与生长素的比例 时，愈伤组织继续生长而不分化；细胞分裂素与生长素的比例 时，会趋于生根。
人工合成的萘乙酸
人工合成的苄基腺嘌呤
摩尔浓度比
高
大致相等
低
问题探究
阅读教材，结合所学知识和提供的材料分析下面的内容。烟草植株的组织培养过程如下图所示：
答案
1.根据图示植物组织培养的过程，回答相关问题。
(1)B是 组织，其特点是：细胞排列 ，是一种高度_____
化的呈无定形状态的 细胞。
(2)A过程是 ，是指由高度分化的植物组织或细胞产生 的过程，又叫去分化。
(3)C过程是 ，是指 重新分化成根或芽等器官的过程。
愈伤
疏松而无规则
液泡
薄壁
脱分化
愈伤组织
再分化
愈伤组织
答案
(4)植物体上的细胞没有表现出全能性，而是分化成了不同的组织器官，这说明植物细胞全能性表达需要在 的条件下进行。
(5)全能性表达的条件
离体的植物组织或细胞，在一定的 、 和其他外界条件的作用下就可能表现出全能性，发育成完整植株。离体的植物组织或细胞叫做外植体。
离体
营养物质
激素
2.激素在植物组织培养过程中的作用
(1)培养基中加入的植物激素是 和 。
(2)两者的 决定组织是生根还是生芽。
(3)在植物组织培养中，应把握好生长素和细胞分裂素的浓度、用量比例及使用顺序。下表为生长素和细胞分裂素使用先后顺序对植物细胞发育方向的影响。
使用顺序 实验结果
先使用生长素，后使用细胞分裂素 有利于细胞 ，但___________
先使用细胞分裂素，后使用生长素 细胞既分裂也分化
_________ 分化频率提高
答案
生长素
细胞分裂素
摩尔浓度比
同时使用
分裂
细胞不分化
答案
3.植物组织培养的关键条件有哪些？体内细胞未表现全能性的原因是什么？
答案 条件之一：离体，一定的营养物质，激素(生长素、细胞分裂素)等；条件之二：培养基状态：固体培养基(需脱分化生根培养基及发芽培养基)。体内细胞未表现全能性的原因是基因的表达具有选择性。
答案
4.热图解读：在植物组织培养再分化阶段中，逐渐改变培养基中植物激素X和植物激素Y的浓度比，细胞群的变化情况如下图所示：
若培养基中植物激素X的浓度为a、植物激素Y的浓度为a＋0.2，则细胞群分化的结果最可能是 试管，分析图可知，植物激素X的浓度小于植物激素Y的浓度时，有利于 的分化。
C
根
活学活用
1.下列关于影响植物组织培养的因素中，说法正确的是
A.不同植物组织培养的难易程度不同，同一种植物材料培养的难易程度
相同
B.在植物组织培养中，培养基中必须添加植物激素
C.植物激素中生长素和细胞分裂素的作用是互相独立的
D.pH、温度、光照条件等对植物组织培养特别重要
答案
解析
解析 不同植物组织培养的难易程度不同，同一种植物材料也会因年龄、保存时间的长短等导致实验结果不同；在植物组织培养中，培养基中常常要添加植物激素，但不是都必须添加植物激素，如菊花茎段组织培养不必添加植物激素；各种植物激素的作用是相互联系的，而不是互相独立的。
2.下列关于植物组织培养中植物激素的使用的说法中，不正确的是
A.植物组织培养中的关键性激素是生长素和细胞分裂素
B.先使用生长素，后使用细胞分裂素，有利于细胞分裂和分化
C.先使用细胞分裂素，后使用生长素，细胞既分裂又分化
D.同时使用生长素和细胞分裂素时，两者用量的比例影响植物细胞的
发育方向
答案
解析
解析 用于植物组织培养的培养基中除营养成分外，还需添加植物激素，一般包括生长素和细胞分裂素；外植体脱分化、再分化的诱导方向取决于二者的比例。先使用生长素，后使用细胞分裂素，有利于细胞分裂，但细胞不分化；先使用细胞分裂素，后使用生长素，对细胞的分裂和分化均有利。
答案
一题多变
判断正误：
(1)植物组织培养就是将离体的细胞、组织、器官等培育成愈伤组织( )
(2)植物组织培养的原理是植物细胞的全能性( )
(3)培养基中生长素和细胞分裂素的比例会影响脱分化和再分化( )
(4)植物组织培养过程需要严格的无菌操作( )
×
√
√
√
二、菊花的组织培养过程
基础梳理
1.发芽培养基和生根培养基的比较
(1)发芽培养基：细胞分裂素摩尔浓度 生长素摩尔浓度的培养基。
(2)生根培养基：生长素摩尔浓度 细胞分裂素摩尔浓度的培养基。
2.实验内容
以菊花为材料进行组织培养，首先，用细胞分裂素相对较多和生长素相对较少的培养基( 培养基)进行培养，使其长出较多的丛状苗；然后，将丛壮苗分株培养。分株后，再移入含有较多生长素的培养基( 培养基)中，使其生根；将生根的苗从三角瓶中移至 中继续生长，待苗健壮后再移至土中。
大于
大于
发芽
生根
草炭土或蛭石
3.菊花的组织培养操作流程
配制_____
_________
MS固
体培养基
(1)配制各种母液→配制培养基→灭菌
(2)培养基由大量元素、微量元素、有机成分组成
(3)在菊花组织培养中，可以不添加植物激素，因为其茎
段培养较容易
↓
外植体的消毒：用 和 溶液对外植体进行消毒，
注意时间不能太长
↓
70%的乙醇
5%的次氯酸钠
接种：接种过程中插入外植体时 朝上，每个锥形瓶接种2～3个
外植体。外植体接种与细菌接种相似，操作步骤相同，而且都要求
操作
↓
培养：应该放在无菌箱中进行，并定期进行消毒，保持适宜的 和_____
↓
移栽：将生根的苗从锥形瓶中移至草炭土或蛭石中继续生长，苗健壮后再
移至土中
↓
栽培
形态学上端
无菌
温度
光照
问题探究
1.MS培养基(植物组织培养用的培养基)的成分及各成分的作用
答案
成分 作用
微量元素和大量元素 提供植物细胞生活所必需的_______
蔗糖 提供碳源，维持___________
甘氨酸、维生素、烟酸、肌醇 满足离体植物细胞在正常代谢途径受一定影响后所产生的特殊营养需求
无机盐
细胞渗透压
2.与LB培养基相比，MS培养基有何特别之处？
答案 LB培养基以蛋白胨、酵母提取物等有机营养为主，MS培养基则需提供大量的无机营养，无机盐混合物包括植物生长必需的大量元素和微量元素两大类。此外进行植物组织培养，培养基中需添加特定配比的生长素和细胞分裂素。
3.进行植物组织培养时为何必须保障“无菌”？为此需对外植体、培养基分别进行何种处理？
答案 若有杂菌污染，一方面可争夺营养，更重要的是可以产生毒素，从而使外植体受毒害而死亡，故必须保障无菌操作。为保障无菌，外植体需消毒，培养基则必须予以高压蒸汽灭菌。
答案
4.在选取菊花茎段时，为何要选取生长旺盛的嫩枝？
答案 外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一，生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再分化。
5.不同植物、不同组织的生根和生芽是否都可使用与本实验相同的生长素和细胞分裂素浓度？
答案 不可以。
6.本实验用人工合成的激素，而不用植物中存在的天然激素，为什么？
答案 天然激素都有相应的使之分解的酶，所以作用时间短，而人工合成的激素，植物体内没有分解酶，作用时间长，效果显著。
答案
小贴士
影响植物组织培养的因素及成功的关键
(1)影响因素
①内部因素：材料的选取。
②外部因素：营养成分的种类及配比；植物激素的用量及使用顺序；pH、温度、光照等。
(2)获得成功的关键
①植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗逆性差、对培养条件要求较高。
②培养材料一旦被微生物污染，就会导致实验失败。原因是微生物增殖快，生长迅速，消耗养分多，并产生代谢废物毒害培养材料。
③无菌技术主要包括对操作空间、实验用具、实验材料以及操作者的消毒或灭菌。
活学活用
3.下列关于MS培养基与微生物培养基的配方的不同之处，说法错误的是
A.MS培养基中常常添加植物激素，微生物培养基中不需要
B.MS培养基中的碳源和能源是蔗糖，微生物培养基中的碳源和能源主要
是葡萄糖
C.MS培养基中需提供植物生长必需的大量元素和微量元素
D.MS培养基中不需加维生素，微生物培养基中要加维生素作生长因子
解析 MS培养基中需要加入甘氨酸、维生素等物质，主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。
答案
答案
解析
答案
4.以野生菊花为材料进行的组织培养步骤如下图所示：
请回答：
(1)按照菊花的需求量，MS培养基由大量元素、微量元素和 组成。MS培养基含有十几种化合物，配制不方便也难以称量准确，可将培养基中的各种成分扩大5～10倍分别称量，配成 ，用于稀释。
有机成分
母液
(2)步骤X中的野生菊花一般选择
A.开过花的老枝
B.未开花植株的茎上部新萌生的侧枝
C.正在开花的枝条
D.任何枝条均可
答案
(3)野生菊花外植体在接种前要用70%的 和5%的 溶液进行表面消毒。
(4)过程A在无菌的条件下把消毒后的野生菊花外植体接种在三角瓶的琼脂培养基上，给予适宜条件，使之产生愈伤组织。过程B要在_____________
培养基上进行培养，使之长出较多的丛状苗。植物组织培养实验用人工合成的植物生长调节剂，而不用植物中存在的天然激素的原因是_________________________________________________________
。
答案
乙醇
次氯酸钠
发芽(或细胞
分裂素多于生长素)
人工合成的植物生长调节剂在植物中没有相应分解的酶，作用时
间长，作用效果明显(意思合理即可)
(5)步骤Y表示 ，再移植到土中培养(定植)，即可长成植株并
开花。
答案
移栽锻炼
一题多变
判断正误：
(1)二倍体植株的花粉经脱分化与再分化后可得到稳定遗传的植株( )
(2)培育草莓脱毒苗所采用的主要技术是植物组织培养( )
(3)脱分化过程不需要植物激素，植物激素只有在再分化过程中发挥作用
( )
(4)由于植物细胞都具有全能性，所以菊花的组织培养实验中选材不会影响实验的结果( )
答案
×
√
×
×
课堂小结
植物的组织培养
全能性
脱分化
再分化
MS固体
植物激素
培养成丛状苗
当堂检测
1.影响植物组织培养的因素包括
①培养基的配制 ②外植体的选取 ③激素的使用
④消毒 ⑤温度、pH、光照
A.①②③④⑤ B.①②③
C.①②③④ D.①②③⑤
解析 植物组织培养过程受多种外界因素的影响，其中包括温度、光照、pH等，而培养基的成分、外植体的选取和消毒是否严格等也影响植物组织培养。
√
2
3
4
1
答案
解析
2.下列对植物组织培养过程中脱分化的叙述，正确的是
A.植物体的分生组织通过细胞分裂产生新细胞的过程
B.体内分化的细胞形态、结构和功能发生改变的过程
C.高度分化的植物器官、组织或细胞产生愈伤组织的过程
D.愈伤组织分裂产生大量相同细胞的过程
答案
2
3
4
1
√
3.在植物组织培养过程中，生长素用量与细胞分裂素用量的比值高时，下列描述正确的是
A.有利于根的分化和芽的形成
B.不利于根的分化和芽的形成
C.有利于芽的形成，抑制根的分化
D.有利于根的分化，抑制芽的形成
√
答案
解析
2
3
4
1
解析 生长素用量与细胞分裂素用量的比值高时，有利于根的分化，抑制芽的形成；
比值低时，有利于芽的分化，抑制根的形成；
比值适中时，促进愈伤组织的形成。
2
3
4
1
4.下图为植物(菊花)组织培养过程示意图，请回答下列问题：
(1)培养基①和培养基②分别为 和 ，两者最主要
的区别是_______________________________________________________
_______________________________________。
解析
2
3
4
1
答案
发芽培养基
生根培养基
发芽培养基中细胞分裂素的含量大于生长素的含量，而生根培养基中生长素的含量大于细胞分裂素的含量
2
3
4
1
解析 菊花组织在培养基①中形成愈伤组织后长出丛芽，在培养基②中生根后形成试管苗，所以①是发芽培养基，②是生根培养基，两者最主要的区别是发芽培养基中细胞分裂素的含量大于生长素的含量，而生根培养基中生长素的含量大于细胞分裂素的含量。
(2)若该培养基是MS固体培养基，则其基本组成是 、 、有机成分、激素和琼脂。
解析 MS固体培养基由大量元素、微量元素和有机成分、激素、琼脂组成。
解析
2
3
4
1
答案
大量元素
微量元素
(3)愈伤组织发芽的根本原因是 。
解析 愈伤组织发芽是再分化的过程，其根本原因是基因的选择性表达。
解析
2
3
4
1
答案
基因的选择性表达
(4)菊花组织在接种到培养基之前需进行 处理，整个组织培养过程需在 条件下进行。
解析 菊花组织在接种到培养基之前必须先进行消毒处理，整个组织培养过程必须在无菌条件下进行。
解析
2
3
4
1
答案
消毒
无菌
(5)本实验用人工合成的激素，而不是植物中存在的天然激素的原因是
。
解析 人工合成的植物激素具有容易合成、原料广泛、效果稳定的优点，因此在农业生产中被广泛应用。
解析
2
3
4
1
答案
人工合成的激素易合成、原料广泛、效果稳定
