植物组织培养
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试卷1
《 植物组织培养技术》试题 (一) 一、填空题(每空1分,共20分，) 1、一般培养室控制的温度是__20-30℃____，培养基常选用的pH值是__5.6-5.8___。 2、在组织培养中，培养基常用___高压蒸汽____法灭菌，不耐热物质用_过滤____法灭菌。 3、非洲菊的叶片__丛生___,故没有直立的茎，在组织培养的继代过程中用__花蕾外植体____法繁殖。 4、1962年，Murashige 和Skoog为培养烟草细胞设计了_MS__培养基，其特点是_无机盐__浓度较高，且为较稳定的__溶液__。 5、从单个细胞或外植体形成的愈伤组织 ，大致要经历 __脱分化、_分裂_和 ＿再分化＿期。 6、6-BA / NAA 的高低决定着外植体的发育方向，其比值高时__诱导芽形成____， 比值低时___诱导根形成____。 7、脱毒苗培养的常用两种方法是_茎尖培养脱毒__和_愈伤组织培养脱毒__。 8、菊花在生产实践中常用 _脚芽扦插__法繁殖，在组织培养可用_茎尖、花蕾__作为 外植体进行培养。 .9、草莓属于_____科植物，用微尖培养草莓主要使其＿＿＿＿，从而 提高产量和质量。 二、判断题（每题2分,共10分，） （×）1、对外植体材料用酒精消毒目的只是灭菌。 （×）2、菊花属于球根花卉，而兰花属于宿根花卉。？P53 （×）3、诱导愈伤组织重新脱分化出各种不同的器官和组织，这个过程 称为脱分化。 （×）4、MS0培养基是没有激素的培养基。 （×）5、受精卵和体细胞都具有全能性。 ?（动物体细胞的核） 三、名词解释（每题2分，共10分） 1、细胞全能性
答：每个细胞都拥有该物种的所有遗传信息，并在条件合适的情况下能够发挥该物种的各种功能和有发育成为一个正常和完整的独立个体的能力。
2、灭菌
答：采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施，称为灭菌。
3、玻璃化现象
答：当植物材料进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会出现半透明状和水渍状，这种现象成为玻璃化，玻璃化是试管苗的一种生理失调症状。
4、指示植物
答：指示植物即接种某种病毒后表现特有症状的植物。主要植物种类有：苋色藜、昆诺阿藜、大灰藜、巴西牵牛和千日红等。
5、驯化
答：植物组织经长期培养，会发生一些变化。开始继代培养要加入生长调节物质，其后加入少量或不加入生长调节物质就可以生长，这种现象成为驯化。
四、选择题（每题1分,共10分） （D）1、下列哪种不是原生质体分离所用的酶 A 纤维素酶 B 半纤维素酶 C果胶酶 D淀粉酶 （ ）2、下列哪种不是组织培养常用的维生素 A：维生素B2 、B：维生素B1 、C：维生素B6、 D：维生素C （C）3、在花药培养中下列哪种不是花粉的发育过程。 A营养细胞发育途径 B 生殖细胞发育途径 C 胚状体发育途径 D 花粉均等分裂途径 （③）4、下列哪种激素不属于生长素类 ①IAA ②IBA ③6-BA ④NAA （ ）5、在未成熟胚胎培养中下列哪种不常见的生长方式 A“胚性”生长 B早熟萌发 C先胚根后胚芽 D先形成愈伤组织再分化 （B）6 、适于花粉培养的最佳时期是＿＿ A双核期 B单核期 C多核期 D无核期 （A）7、下面哪种是MS培养基大量元素所用药剂 A 硫酸镁 B 硫酸亚铁 C硫酸锌 D 硫酸铜 （D）8、下列哪种不是在MS培养基起作用的有机物 A氨基酸 B 肌醇 C 维生素 D 琼脂 （C）9、常见的组织培养程序包括①取材②接种③灭菌④做培养基 A①②③④ B①④③② C①③②④ D①④②③ （A）10、和组织培养相似的代名词是 A 克隆 B有性生殖 C孤雌生殖 D 单性生殖 五、简答题（ 共50分） 1、6-BA在组织培养中有何作用？(6分) 细胞分裂素类激素是腺嘌呤的衍生物，常见的有6-BA、KT、ZT、2-ip等。其活性强弱为2-ip > ZT > 6-BA > KT。
作用：在植物组织培养中，细胞分裂素的主要作用是抑制顶端优势，促进侧芽的生长。当组织内细胞分裂素／生长素的比值高时，有利于诱导愈伤组织或器官分化出不定芽；促进细胞分裂与扩大，延缓衰老；抑制根的分化。因此，细胞分裂素多用于诱导不定芽的分化和茎、苗的增殖。
由于6-BA具有高效、稳定、廉价和易于使用等特点,因而被广泛采用,并且是组织培养者最喜爱的细胞分裂素。BA的主要作用是促进芽的形成,也可以诱导愈伤组织发生。可用于提高茶叶、烟草的质量及产量；蔬菜、水果的保鲜和无根豆芽的培育，明显提高果品及叶片的品质。
2、 述活性炭在组织培养中有哪些作用及使用注意事项？(6分) 在植物组织培养中经常要用到活性炭。活性炭加入培养基中的目的
1）主是利用其吸附能力，减少一些有害物质、生长抑制剂的影响，
2)活性炭使培养基变黑，给培养物创造了暗环境，有利于某些植物生根
3）对形态发生和器官形成有良好的效应，但活性炭对物质吸附无选择性，既吸附有害物质，也吸附有利物质，因此使用时应慎重考虑，不能过量，一般用量为1%~5%。
3.什么叫花粉看护培养法？原理是什么？(6分) 花粉看护培养：是将诱导频率较高的一种植物裂开的花药接种在培养基上作为看护组织，再将另一种植物或同种植物的单花粉粒接种在花药里进行滋养培养，或在花药上放一小片滤纸，再让花粉粒接种在滤纸上培养，或将一种植物的愈伤组织作为看护组织，再接花粉粒培养。由于完整的花药发育过程释放出有利于花粉发育的物质，并通过滤纸供给花粉，促进了花粉的发育。
4.茎尖培养脱毒的原理是什么？接种时应注意什么？
感染病毒植株的体内病毒的分布并不均匀，病毒的数量随植株部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域的病毒的感染深度越低，生长点(约0.1～1.0mm区域)则几乎不含或含病毒很少。这是因为病毒运转速度慢，加上茎尖分生区域内无维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞不断分裂和活跃的生长速度。
在切取茎尖时越小越好，但太小则不易成活，过大又不能保证完全除去病毒。剥离茎尖时，应尽快接种，茎尖暴露的时间应当越短越好，以防茎尖变干。
5、 移栽驯化香石竹时怎样选用基质和搭配基质？(6分)
适合于栽种试管苗的基质要具备透气性、保湿性和保肥的特点，且容易灭菌处理，一般可选用珍珠岩、蛭石、砂子等。为了增加粘着力和一定的肥力可配合草炭土或腐殖土。配制混合基质时需按比例搭配，一般用珍珠岩，蛭石，草炭土或腐殖土比例为1：1：0.5。也可用砂子：草炭土或腐殖土为1：1。此外，要根据不同植物的栽培习性来进行配制，这样才能获得满意的栽培效果。移栽驯化香石竹时就可按上述比例选用和搭配基质进行筛选，选出最适合的基质。
6.接种室有哪些技术要求？(6分)
接种室：接种室又称无菌室，是分离和移接菌种的小房间，实际上是扩大的接种箱。在构造和设置上要求如下：
① 接种室应分里外两间，里面为接种间，面积5~6m2；外间为缓冲间，约2~3m2。两间门不宜对开，出入口要求装上推拉门，以减少开关门时的空气扰动。高度均为2~2.5m。接种室不宜过大，不易保持无菌状态。②房间里的地板、墙壁、天花板要平整、光滑，以便擦洗消毒。③门窗要紧密，关闭后与外界空气隔绝。④接种室的主要设备及用具有(1)接种箱(2)超净台(3)解剖镜(4)无菌操作用的器具如酒精灯、常用接种工具。⑤工作台上方和缓冲间天花板上安装能任意升降的紫外线杀菌灯和日光灯。
因接种室面积大，所以紫外线消毒的时间需30min左右。为提高接种成功率，进入接种室要穿戴经过消毒的衣、帽。菌种制作大多采用接种箱操作。
7.用湿热法进行高压灭菌的大致步骤有哪些？(7分)
湿热灭菌法是指用饱和水蒸气、沸水或流通蒸汽进行灭菌的方法，由于蒸汽潜热大，穿透力强，容易使蛋白质变性或凝固，是药物制剂生产过程中最常用的灭菌方法。
培养基用高压灭菌。打开锅盖，加水至水位线。把已装好培养基的三角瓶，连同蒸馏水及接种用具等放入锅筒内，装时不要过分倾斜培养基，以免弄到瓶口上或流出。然后盖上锅盖，对角旋紧螺丝，接通电源加热，当升至0.05MPa时，打开放气阀放气，回“0”，后关闭放气阀。当气压上升到0.10MPa时，保压灭菌20min，到时停止加热。当气压回“0”后打开锅盖，取出培养基，放于平台上冷凝。灭好的培养基不要放置时间太长，最多不能超过1周。
8、怎样用指示植物法鉴定草莓是否含有病毒？(7分)
指示植物法：将一些对病毒反应敏感、症状特征显著的植物作为指示植物（又称鉴别寄主），利用病毒在其他植物上产生的枯斑作为鉴别病毒种类的方法。这种方法条件简单，操作方便，为一种经济而有效的鉴定方法，
鉴别草莓是否含病毒常用的是小叶嫁接法。具体方法是取被鉴定草莓生长成不久的新叶，除去两边小叶，中央小叶带1～1.5厘米长的叶柄，削成锲形做成接穗，指示植物（林丛草莓、深红草莓）则除去中间的小叶，在叶柄一侧用刀切入1～1.5厘米，接入接穗，用毛线包扎好，涂上少量的白色凡士林以防干燥。若带有病毒，嫁接后1～2个月在新展开的二叶片、匍匐茎或老叶上，会出现病斑，若无则说明被鉴定苗是无病毒苗。
试卷2
一、填空题(每空1分,共20分) 1、在分离原生质体酶溶液内，需加入一定渗透稳定剂，其作用是 保持原生质体膜的稳定，避免破裂。 2、花药是植物的生殖器官，用其进行组织培养可培养出完整单倍体植物 。 3、选用驯化基质主要考虑透气性和保湿性问题 4、组织培养的特点包括培养材料经济、培养条件人为控制，周年生产和生长周期短，繁殖率高三个方面。 5、从单个细胞或外植体形成的愈伤组织 ，大致要经历 启动期（诱导期）、分裂期和分化期。 6、非洲菊的叶片_丛生______故没有直立的茎，在组织培养的继代过程中用 __？___法繁殖。 7、脱毒培养的常用两种方法是热处理脱毒和微茎尖培养脱毒。 8、6-BA /NAA 的高低决定着外植体的发育方向，其比值高时诱导愈伤组织或器官分化出不定芽，比值低时诱导根分化。 9、草莓属于蔷薇科植物，组织培养草莓主要使其____？_____。 10、矮牵牛属于十字花科植物，组织培养中常用花药或花粉作外植体。
二、判断题：
（ ）1、非洲菊常用茎尖作为外植体接种 （ ）2、湿热灭菌时灭菌时间与培养容器的关系是：容器越大灭菌时间 应越长。 （ ）3、愈伤组织就是由伤口处产生的愈合组织 （ ）4、MS0培养基是没有激素的培养基。 （ ）5、升汞靠氯气灭菌，次氯酸钙靠汞离子来灭菌。
1、错（花托是非洲菊组织培养中较为合适的外植体材料）2、错 3、错 4、错 5、错
三、名词解释
1、细胞全能性：植物每一个具有完整细胞核的体细胞，都含有植物体的全部遗传信息，在适当条件下，具有发育成完整植株的潜在能力。
2、灭菌：用理化方法杀死物体表面和孔隙内一切微生物或生物体。
3、White培养基： 由White为培养番茄根尖而设计，无机盐量较低，但提高了MgSO4的浓度和增加了硼素，使用广泛，适合生根培养、胚胎培养等的一种培养基。
4、指示植物：一定区域范围内能指示生长环境或某些环境条件的植物种、属或群落。
5、驯化：根据试管苗与自然苗、试管苗的生存环境与自然环境的差异，人为创设从试管苗生存环境逐渐向室外环境转化的过渡条件，以确保试管苗的移栽成活率。
四、选择题：
（ ）1、下列哪种激素示属于生长素类 ①IAA ②IBA ③6-BA ④NAA （ ）2、通过酶解法提取的原生质体，影响其活性的主要因素有 A：pH值 、B：温度 、C：所用酶的浓度、 D：渗透稳定剂 （ ）3、下面哪种是MS培养基大量元素所用药剂 A 硫酸镁 B 硫酸亚铁 C硫酸锌 D 硫酸铜 （ ）4、在剥离微茎尖或幼胚时，必须应用的仪器是 A 低倍显微镜 B 高倍显微镜 C解剖镜 D放大镜 （ ）5、常见的组织培养程序包括①取材②接种③灭菌④做培养基 A①②③④ B①④③② C①③②④ D①④②③ （ ）6、适于花粉培养的最佳时期是＿＿ A双核期 B单核期 C多核期 D无核期 （ ）7、在花药培养中下列哪种不是花粉的发育过程。 A营养细胞发育途径 B 生殖细胞发育途径 C 胚状体发育途径 D 花粉均等分裂途径 （ ）8、下列哪种在MS培养基不起促进生长作用 A氨基酸 B 肌醇 C 维生素 D 琼脂 （ ）9、 和组织培养相似的代名词是 A 克隆 B有性生殖 C孤雌生殖 D 单性生殖在未成熟胚胎培养中 （ ）10、下列哪种是不常见的组织培养生长方式 A胚状生长 B早熟萌发 C先胚根后胚芽 D先形成愈伤组织再分化
1—5 AB(这题答案不确定)ACB 6—10 BCDAB(这题答案也不确定)
五、简答题（共50分） 1、简述活性炭在组织培养中有哪些作用及使用注意事项？(6分)
1.作用：具吸附作用；茎尖初代培养可防褐化；促进新梢增殖（浓度0.1 －0.2%）；促进生根；减轻组培苗玻璃化（浓度0.3%）；有利于胚胎培养。活性炭对形态发生和器官形成有良好的效应，在失去胚状体发生能力的胡萝卜悬浮培养细胞中加入1%~4%活性炭可使胚状体的发生能力得以恢复。在培养基中加入0.3%的活性炭可降低玻璃苗的产生频率，对防止产生玻璃化有良好作用。
2.注意：活性炭吸附性无选择性。既吸附有害物质，也吸附有利物质，因此使用时应慎重考虑，不能过量，一般用量为1%~5% 2、什么是玻璃化现象？解决玻璃化现象的方法主要有哪几点？(6分)
1.玻璃化现象：当植物材料不断地进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会呈半透明水渍状，这种现象通常称为玻璃化(也称为超水化现象)。发生玻璃化的试管苗称为玻璃化苗
2.解决方法：
(1)适当提高培养基中蔗糖和琼脂的含量水平，降低培养基的水势。
(2)选择合适的激素种类和浓度，适当减少细胞分裂素用量或适当增加生长素比例。
(3)适当延长光照时间或增加自然光照，提高光强。
(4)调整培养温度，培养室要有降温和增温设施，防止温度突然变化。
(5)使用透气性好的封口材料。如牛皮纸、棉塞、滤纸、封口纸等，尽可能降低培养内空气湿度，加强气体交换。
(6)尽量选用玻璃化轻或无玻璃化的植物材料。
(7)适当提高培养基中的无机盐的含量，减少铵态氮而提高硝态氮的用量。
(8)在培养基中适当添加活性炭、间苯三酚、根皮苷、聚乙烯醇(PVA)均可有效控制玻璃化苗的发生。
3、 NAA有什么特点？在组织培养中有何作用？(6分)
答：萘乙酸是广谱型植物生长调节剂，能促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根增加坐果，防止落果，改变雌、雄花比率等。可经叶片、树枝的嫩表皮，种子进入到植株内，随营养流输导到全株。
应用：1、能促进各种类型酚类化合物的形成及组织生长，如在茶树组织中
2、促进叶分化，促进生根，过高浓度则抑制根的生长，如菘蓝叶片组织培养
4、什么叫花粉看护培养法？原理是什么？(6分)
答：花粉看护培养法
在装有50ml液体培养基的小培养皿中，用解剖针撕开花药释放出花粉，形成花粉悬浮液，最后稀释至0.5ml培养基中，含有10个花粉粒的细胞悬浮液。看护培养时，把花药放在琼脂培养基表面上，然后在每个花药上覆盖一小块圆片滤纸。用移液管吸取1滴已准备好的花粉粒悬浮液，滴在每个小圆片滤纸上。培养在25℃和一定光照强度下，大约一个月长出细胞群。由于完整的花药发育过程释放出有利于花粉发育的物质，并通过滤纸供给花粉，促进了花粉的发育。
原理：把花粉从花药中分离出来，以单个花粉粒作为外植体进行离体培养，即诱导花粉细胞发育成单倍体细胞，最后发育成单倍体植株。在合成培养基上，改变其发育机能，即不经过受精发生的细胞分裂，由单个花粉粒发育成完整植物。由于花粉已是单倍体细胞，诱发它经愈伤组织或胚状体发育成的植株都是单倍体植株，且不受花药的药隔、药壁、花丝等体细胞的干扰。
5、 茎尖培养脱毒的原理是什么？接种时应注意什么？(6分)
原理：感染病毒植株的体内病毒的分布并不均匀，病毒的数量随植株部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域的病毒的感染深度越低，生长点（约0.1-1MM区域）则几乎不含或含病毒很少。因为病毒在植物体内通过维管束和胞间连丝传播，而分生区域内无维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞不断分裂和活跃的生长速度。所以顶端分生组织带毒少，病毒含量低。
接种时应注意：无菌操作：接种用的工具要在酒精灯火焰上灼烧。应尽量使外植体切口接触培养基。锥形瓶口应斜向火焰，在酒精灯火焰附近操作。接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等；
6、 接种室有哪些技术要求？(6分)
接种室宜小：密闭光滑，配置拉动门。
接种室要求干爽。吊装紫外线灭菌灯，最好安装一小型空调，
接种室应设有缓冲间，面积2 m2为宜。
7、愈伤组织形态怎样，什么条件可以诱导其形成？(7分)
答1）愈伤组织形态上是没有分化但能进行活跃分裂的一团细胞，细胞排列疏松无序，多为薄壁细胞。
2）诱导产生愈伤组织，首先使细胞失去原有的状态，恢复分裂能力，变成分生细胞，即经过脱分化的过程。主要通过培养基中添加外源激素的刺激，迫使培养的植物组织细胞改变原有的代谢途径，为启动分裂做准备。
8、简述无菌接种的大致过程？
答（1）在接种前20min，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯进行灭菌。
（2）将外植体用自来水冲刷干净
（3）接种员洗净双手，上工作台，用乙醇棉球擦拭双手，并擦拭工作台面。
（4）将初步洗涤及切割的材料放入烧杯，带入超净台上，用消毒剂灭菌，再用无菌水冲洗，最后沥去水分，取出放置在灭过菌的纱布上或滤纸上。
（5）材料吸干后，一手拿镊子、一手拿剪刀或解剖刀，对材料进行适当的切割。如叶片切成0.5cm平方的小块；茎切成含有一个节的小段。微茎尖要剥成只含1-2片幼叶的茎尖大小等。在接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉污染。
（6）用灼烧消毒过的器械将切割好的外植体插植或放置到培养基上。
具体操作过程（以试管为例）是：解开包口纸，使试管口靠近酒精灯火焰，灼烧数秒钟。然后用镊子夹取一块切好的外植体送入试管内，轻轻插入培养基上。若是叶片直接附在培养基上，以放1-3块为宜。至于材料放置方法除茎尖、茎段要正放（尖端向上）外，其他尚无统一要求。
（7）接种完后，将管口在火焰上再灼烧数秒种。并用棉塞，塞好后，包上包口纸，包口纸里面也要过火。做好标记，注明接种植物、处理名称和接种日期。
试卷3
《 植物组织培养技术》试题 (三) 一、填空题(每空1分,共20分，) 1、配制培养时，一般先配制母液，其目的在于_提高工作效率__和__提高试验精度_______。 2、压力单位中1kg/cm2相当于__0.1_______MPa，在0.1 MPa时锅内温度为 _____121℃____。 3、微量元素母液可配成___200_____倍，配制培养基时移取___5_____毫升。 4、ＭＳ培养基是______无机盐____浓度较高，为较稳定__满足培养物生存_的溶液。 5、高压灭菌可以对__培养基________及工作服______、玻璃器皿______、橡胶物品______等进行灭菌。 6、凡是暴露在空气中_____的物体，接触自然水源______的物体，其表面都有菌。 7、细胞的全能性是植物的每个细胞都具有该植物的全部__遗传基因_______和 发育成完整植株的能力。 8、愈伤组织除了可植株再生培养外。可进行悬浮培养而__产生次代谢物__________。 9、危害植物的病毒主要是靠_无性繁殖_________的作物 10、分生区域内无维管束，病毒只能通过_附近细胞_________传递。 11、花序轴应选取具该品种典型特征的、其上生长的饱满充实的__花瓣__。（这题找不到正确答案，求助） 二、选择题（每题1分,共10分） 1、微量元素母液的配制浓度（ 2 ） ① 10倍 ②100倍 ③1mg/ml ④10mg/ml 2、接种工具灭菌常采用 （ 1 ） ①灼烧 ②高压 ③过滤 ④熏蒸 3、下列哪种不是组织培养常用的维生素A A：维生素B2 B：维生素B1 C：维生素B6、 D：维生素C 4、下面哪种是MS培养基大量元素所用药剂A A 硫酸镁 B 硫酸亚铁 C硫酸锌 D 硫酸铜 5、下列哪种不是使甲醛挥发的方式 C A 加高锰酸钾 B 加热 C 加水 6、下面哪种基质具有一定的肥力C A 珍珠岩 B蛭石 C 草炭土 D河砂 7、愈伤组织是一种＿A＿＿＿组织 A淡黄色且能分裂，B绿色不能分裂，C有一些变形的组织D是一种成熟组织 8、下面哪一个是分化期的明显表现?D A细胞增加 B细胞增大 C细胞变形 D 细胞在结构上变化 9、下列那种不是无性繁殖的器官C A块茎 B枝条 C种子 D块根 10、下列那种方法脱毒效果较好D A微茎尖 B热处理 C愈伤组织 D化学药剂 11、菊花的果实是下列哪一种B A 浆果 B瘦果 C 核果 D蒴果 12、下面哪些不是菊花植物所含有的花B A舌状花；B漏斗状花；C管状花；D轮状花 三、名词解释（每题2分，共10分） 1、母液
为了避免每次配制培养基都要对几十种化学药品进行称量，应该将培养基中的各种成分，按原量10倍、100倍或1000倍称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做母液。 2、初代培养
是指在组培过程中，最初建立的外植体无菌培养阶段，即无菌接种完成后，外植体在适宜的光、温、气等条件下被诱导成无菌短枝(或称茎梢)、不定芽(丛生芽)、胚状体或原球茎的过程。因此，也称为诱导培养。由于外植体的来源复杂，又携带较多杂菌，因此初代培养一般比较困难。
3、松散型愈伤组织（ppt和Word上都找不到）
所谓愈伤组织是指在人工培养基上经诱导后外植体表面上长出来的一团无序生长的
4、抗血清鉴定
植物病毒是由蛋白质和核酸组成的核蛋白，是一种较好的抗原，给动物注射后会引起抗体产生。抗体是动物受外来抗原的刺激产生的一种免疫球蛋白，主要存在于血清中。有抗体存在的血清叫抗血清。不同病毒引起的抗血清有各自的特异性。病毒作为抗原与其相对应抗体的抗血清之间会发生沉淀反应，即免疫反应，因而抗血清可作为病毒检测的高度专化的试剂。用被鉴定的组培苗的汁液作为抗原，加入已知病毒的抗血清中，观察其反应，可判知被鉴定植物有无病毒和病毒种类，此法称为抗血清鉴定法 5、直接分化（未找到定义）
无胚胎形态，分生中心直接分化器官（未找到定义，只搜到了这句）
四、判断题（每题2分,共10分，） 1、MS0培养基是没有激素的培养基。 2、琼脂只起固化作用，本身并不提供任何营养。 3、熏蒸灭菌适于空气和物体表面的灭菌。 4、生根培养可采用1/2或者１／４MS培养基。 5、500～600目金钢砂起传播病毒的作用。 6、隔虫网的网眼为0.4～0.5mm大小的网纱，可以防止蚜虫进入。 7、非洲菊可用茎尖接种，但容易污染。 8、矮牵牛花冠不呈喇叭状，而是辐射状。 9、由于花粉已是单倍体细胞，诱发它经愈伤组织或胚状体发育成的 植株都是单倍体植株。 10、微滴培养法将有原生质体的悬浮液以小滴接种在无菌且清洁 干燥的培养皿上进行培养。
F T F T F T F T F F
简答题（每题10分，共50分） 1、为什么要配制母液，配制时要注意什么?
答：配制母液不但节省配制时间，而且能够保证配制的准确性和配制时的快速移取，极大提高了工作效率。此外，也便于培养基的低温保藏。
注意：1.配制母液所需药品应采用分析纯或化学纯试剂。
2.配制母液用水为蒸馏水或去离子水，试剂可以通过加热或置于磁力搅拌器上加速溶解。
3.母液保存时间不要过长，大量元素母液最好1个月内用完。如发现母液有混浊或沉淀现象发生，则弃之勿用。
4 . 防止母液发生沉淀
2、表面灭菌如何操作？
答：不同外植体，表面灭菌方式不同。
外植体
消毒方法
根及地下部器官
?
①流水冲洗；②纯酒精漂洗；③用0.1%～0.2%升汞液浸5～10min或2%次氯酸钠溶液浸泡10～15min;④无菌水漂洗3～5次。
茎尖、茎段及叶片
?
①流水冲洗后用肥皂、洗衣粉或吐温洗涤；②70%酒精浸泡数秒；③根据材料老嫩和枝条的坚实程度，用2～10%的次氯酸钠溶液(加或不加吐温－80)浸泡10～15min，或者用0.1%～0.2%的升汞消毒3～10min；④无菌水漂洗3～5次。
花药
?
①70%酒精浸泡数秒；②无菌水冲洗2～3次；③饱和漂白粉滤液中浸泡10min;④无菌水漂洗2～3次。
胚及胚乳
方法一：①成熟或未成熟的种子消毒后剥离出胚或胚乳。
方法二：①去除种皮后，用4%～8%的次氯酸钠溶液浸泡8～10min；②无菌水漂洗3～5次。
果实及种子
?
①根据果实和种子清洁度，流水冲洗10～20min或更长时间；②70%酒精漂洗几秒到几十秒钟(取决于果实和种子的成熟度与果皮、种皮的厚薄)；③果实用2%次氯酸钠溶液浸泡10min后，无菌水冲洗2～3次；④种子用10%的次氯酸钠溶液浸泡20～30min，或用0.1%升汞溶液浸泡5～15min后，无菌水漂洗3～5次。
3、无菌接种室有那些技术要求？
答：无菌接种室对无菌环境要求严格。
1、首先是接种室的消毒可用药剂熏蒸、药剂喷洒、紫外线照射。
2、在接种室内的培养基和用具都要经过干热灭菌、高压湿热灭菌、擦拭消毒和灼烧灭菌后方可使用。
3、实验服、口罩、帽子、滤纸、无菌水灭菌都要经过高压湿热灭菌和紫外灯照射。
4、超净工作台、双手及培养瓶可用药剂喷洒、紫外线照射以及涂抹消毒
4、分裂期细胞有什么特点？
答：在植物组织培养中，分裂期细胞一般体积较小，排列较密，细胞中细胞核较大且没有液泡。另外分裂期细胞未感染病毒，因此是植物组织培养的良好的材料。(好像没什么东西好写)
5、怎样用指示植物法鉴定脱毒苗？
答：指示植物法是指利用病毒在其他植物上产生的枯斑作为鉴别病毒种类的标准，又称为枯斑法。这些对病毒敏感并能产生专一性枯斑症状的植物称为指示植物，又称为鉴别寄主。指示植物一般分为二类：一类是接种病毒后产生系统性症状，病毒可扩展到植株非接种部位，通常没有局部病斑的指示植物；另一类是只产生局部病斑，常为坏死、褪绿或环状病斑的指示植物。
鉴定方法： (1)汁液涂抹法 取被鉴定植物的1~3g幼叶置于研钵中，加入10ml水和等量的0.1 mol/L的磷酸缓冲液（pH7.0），研碎后加入少量500~600目金钢砂作为摩擦剂，制成匀浆，用手指(戴上手套)或纱布或棉球蘸取匀浆在指示植物叶片上轻轻涂抹2～3次，以汁液进入叶表皮细胞又不损伤叶片为度，或用喷枪喷射进行接种。5min后用清水清洗叶面多余匀浆及金刚砂。接种后将指示植株置于室内或防虫网室内，在半遮荫、温度15~25℃的条件下培养，2~6d后可视其病症的有无，来判断被鉴定植物是否脱毒。
(2)嫁接法 将被鉴定植物的芽或幼叶嫁接在指示植物上，4~6周后根据指示植物的症状来判断是否脱毒。
《 植物组织培养技术》试题 (四) 一、 填空题(每空1分,共20分，) 1、菊花多为___短日照_____植物。只有在较短的日照下才能开花。 2、所谓花药预处理是将花蕾剪下放入水中，在冰箱__ __下保持3～4天。 3、微茎尖要剥离掉幼叶和叶原基，最后几乎就是一个闪亮半圆球形的__________。 4、愈伤组织整个过程大致可分为_诱变期、分裂期、分化期_等三个时期 5、用茎段接种进行的快繁优点是： ____细胞可塑性大__和_容易易体培养__等。（不确定） 6、叶器官培养一般是先诱导形成__愈伤组织___，然后再由此产生_胚状体、茎、叶和根_。 7、琼脂加入浓度大约是_0.8%__，蔗糖加入浓度大约是__3%____ 。 8、氮是蛋白质、酶__氨基酸__、__核苷酸__等的组成成分。 9、无菌范畴在组织培养中涉及的主要有__经高温灼烧或一定时间蒸煮过后的物体，经其它物理的或化学的灭菌方法处理后的物体(当然这些方法必须已经证明是有效的)，高层大气、岩石内部、健康的动、植物的不与外部接触的组织内部，强酸强碱，化学元素灭菌剂等表面和内部等等都是无菌的。（不确定） 10、放冷气时压力表指示为___0.05_MPa，在0.1MPa时锅内温度为_ 121℃__。
二、判断题（每题2分,共10分，） 1、若用花托接种时，将花托切成2~3mm见方的小块。 错（3—5mm） 2、花药培养属细胞培养，花粉培养属器官培养。 错（花药—器官，花粉—细胞） 3、电子显微镜才能分辨0.5μm大小的病毒颗粒。 对 4、愈伤组织诱导原理是抵消阻碍DNA的复制，让其基因打开，能够复制。 对 5、驯化时初期保持温室的大湿度，后期可以直接恢复到自然条件下的湿度。 错（不同时期湿度要求不同） 6、叶块培养首先是叶块开始增厚肿大，进而形成愈伤组织。错 7、植物克隆即是无性繁殖。 错 8、对于二倍体生物来说，体细胞含有二倍的染色体。 错（两个染色体组） 9、对外植体材料用酒精消毒目的只是灭菌。 错 10、紫外线灭菌物体表面的灭菌 对
三、名词解释（每题2分，共10分）第四、五题自己归纳总结的。 1、宿根植物 指个体寿命超过两年，可持续生长，多次开花、结实，且地下根系或地下茎形态正常，不发生变态的一类多年生草本花卉。依其落叶性不同，宿根花卉又有常绿宿根花卉和落叶宿根花卉之分。常见的宿根植物有芍药、秋海棠、君子兰等。【宿根植物可以采用分蘖、根插等无性繁殖方法加以培育。由于宿根植物不需经常更换，因此往往成为园林布置中的理想植物】 2、微室培养法 即将细胞培养在很少量的培养基中。在培养过程中可以连续进行显微观察，将一个细胞的生长、分裂和形成细胞团的全部过程记录下来。【（1）微室内不能有气泡。（2）最好微室的厚度不要超过20微米，盖玻片 的厚度要在0.17～0.18毫米左右。（3）观察时要保持温度和培养时的一致。】
3、指示植物 一定区域范围内能指示生长环境或某些环境条件的植物种、属或群落。有普遍指示植物和地方指示植物之分。按指示对象可分为：①土壤指示植物。②气候指示植物。③矿物指示植物。④环境污染指示植物。⑤潜水指示植物。如气候指示植物椰子，它的开花是热带气候的标志。 4、诱导期 一般指在一定条件下，诱导外植体细胞脱分化，改变原来的发育途径，逐步逆转其原有的分化状态，转变为具有分生能力的胚性细胞即愈伤组织的时期。 5、诱导培养基 用于不同植物和外植体诱导愈伤组织的培养基。 一般以MS培养基母液为基础，添加对愈伤组织诱导有影响的外源激素，且在适当湿度条件、温度条件、光照条件等培养条件下诱导愈伤组织的培养基。
四、选择题（每题1分,共10分）1、D 2、B 3、C 4、A 5、A 6、C 7、D 8、③ 9、 D 10、B 1、下面哪个不是常见的自然无性繁殖方法 A扦插； B嫁接；C压苗；D播种、 2、 选择花药应选择什么时期 A 双核期 B 单核期 C三核期 D 成熟期 3、下列那种不是无性繁殖的器官 A块茎B枝条C种子D块根 4、下面哪一个是分化期的明显表现? A细胞增加 B细胞增大 C细胞变形 D 细胞在结构上变化 5、下面哪个不是胚发育过程所经历的状态： A受精卵、B胚分裂、C幼胚、D成熟胚。 6、下面哪个不是离体叶培养所包括的范围 A叶原基、A叶柄、C子叶、D叶缘 7、下面哪个不是氮构成的物质 A、蛋白质 B、核酸 C、ATP D、脂肪 8、下列哪种激素属于细胞分裂类 ①IAA ②IBA ③6-BA ④NAA 9 、下列哪种不是涂擦灭菌的对象 A 双手 B 台面 C工具 D空间 10、 下列哪种不是使甲醛挥发的方式 A 加高锰酸钾 B 加热 C 加水
五、简答题（每题10分 共50分） 1、怎样用指示法鉴定菊花是否脱毒? 2、用微茎尖组织脱毒的原理是什么？ 3、愈伤组织的分化期细胞有什么特点？ 4、简答出一般茎段是怎样选材消毒和接种的？ 5、 细胞分裂素有何作用？
1.菊花病毒病 (1)菊花B病毒chrysanthemum B virus(CVB)菊花B病毒归属为香石竹潜隐病毒属，患病菊花在菊花叶片上表现为轻型花叶症或不表现症状，在菊花感病品种上，可以形成明显的花叶症状或坏死斑，严重感病的产生褐色枯斑。菊花B病毒由汁液、扦插条、桃蚜和马铃薯传播，(2)番茄不孕病毒tomato aspermy virus（TAV）番茄不孕病毒归属为黄瓜花叶病毒属，患病菊花病时出现花叶、扭曲，植株萎缩，花色不正常。汁液、桃蚜和其他一些蚜虫作非持久性传播。汁液、桃蚜和其他一些蚜虫作非持久性传播。(3)菊花矮化类病chrysanthemum stunt virus(CSVD)菊花矮化类病毒归属为马铃薯纺锤块茎类病毒属。患病菊花子叶变小、畸形、植株矮花、丛生和扭曲。一些品种出现碎色花。汁液传播，嫁接用刀具可以传播，菟丝子也可以传播，少数能种传。(4)脉斑驳病 菊花叶片上出现脉纹状黄色斑驳，使叶片失去应有的生机，呈萎靡不振状、花朵小，有时不能开放。其病原为菊花脉斑驳病毒。该病毒主要通过汁液、嫁接以及菊长管蚜等进行传播。
鉴定方法
(1)汁液涂抹法 取被鉴定植物的1~3g幼叶置于研钵中，加入10ml水和等量的0.1 mol/L的磷酸缓冲液（pH7.0），研碎后加入少量500~600目金钢砂作为摩擦剂，制成匀浆，用手指(戴上手套)或纱布或棉球蘸取匀浆在指示植物叶片上轻轻涂抹2～3次，以汁液进入叶表皮细胞又不损伤叶片为度，或用喷枪喷射进行接种。5min后用清水清洗叶面多余匀浆及金刚砂。接种后将指示植株置于室内或防虫网室内，在半遮荫、温度15~25℃的条件下培养，2~6d后可视其病症的有无，来判断被鉴定植物是否脱毒。若汁液带病毒即出现可见病症(表5-3)。
表5-3 几种马铃薯病毒的指示植物及其症状(引自潘瑞炽等，2000)
病毒种类
指示植物
症状
汁液涂抹法主要用于草本植物的脱毒鉴定，适用于鉴定通过汁液传播的病毒。利用指示植物法鉴定时，一般以早春为宜，因为早春刚萌发嫩叶或花瓣，接种成功率较高，5月份以后接种较难成功，从而影响检测结果的正确性。
2、原理是植物体内病毒分布不均匀，其生长点（约0.1～1.0mm区域）几乎不含病毒。这是因为分生区域内无维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，其传递速度不如细胞不断分裂和活跃的生长速度。因此，切取茎尖时越小越好，但太小则不易成活，过大则不能保证完全除去病毒。
3、生长旺盛的愈伤组织一般呈乳黄色或白色，有光泽；也有浅绿色或绿色；老的愈伤组织多变为黄色或者褐色。
4、茎段培养
1.取材与消毒
取生长健壮无病虫的幼嫩枝条或鳞茎盘，如果是木本植物则取当年生嫩枝或一年生枝条,去掉叶片，剪成3～4cm的小段。用肥皂水擦洗茎段，于操作台用75%乙醇灭菌10-60s，再用饱和漂白粉溶液浸泡10-20min，（如果材料表面有绒毛应在消毒剂中滴加1~2滴吐温-20或吐温-80。注意根据材料的老嫩和蜡质的多少来确定消毒时间。）最后用无菌水冲洗数次，以彻底冲洗掉材料表面残留的药剂，否则植物材料会受残留灭菌剂的危害。
2.接种
采用灭过菌的器械在无菌条件下进行操作。首先消毒好的茎段去除两端被消毒剂杀伤的部位，将茎段切成0.5-1cm的带节的茎段，若是鳞茎则采取带小段鳞片底盘，再切开底盘，使每块底盘上都带有腋芽。然后接种到培养基上。
5.细胞分裂素（CTK）
一、促进细胞分裂 细胞分裂素的主要生理功能就是促进细胞的分裂。生长素、赤霉素和细胞分裂素都有促进细胞分裂的效应，但它们各自所起的作用不同。细胞分裂包括核分裂和胞质分裂两个过程，生长素只促进核的分裂(因促进了DNA的合成)，而与细胞质的分裂无关。而细胞分裂素主要是对细胞质的分裂起作用，所以，细胞分裂素促进细胞分裂的效应只有在生长素存在的前提下才能表现出来。而赤霉素促进细胞分裂主要是缩短了细胞周期中的G1期(DNA合成准备期)和S期(DNA合成期)的时间，从而加速了细胞的分裂。
二、促进芽的分化
促进芽的分化是细胞分裂素最重要的生理效应之一。1957年斯库格和米勒在进行烟草的组织培养时发现，细胞分裂素(激动素)和生长素的相互作用控制着愈伤组织根、芽的形成。当培养基中［CTK］/［IAA］的比值高时，愈伤组织形成芽；当［CTK］/［IAA］的比值低时，愈伤组织形成根；如二者的浓度相等，则愈伤组织保持生长而不分化；所以，通过调整二者的比值，可诱导愈伤组织形成完整的植株。?
三、促进细胞扩大
细胞分裂素可促进一些双子叶植物如菜豆、萝卜的子叶或叶圆片扩大，这种扩大主要是因为促进了细胞的横向增粗。由于生长素只促进细胞的纵向伸长，而赤霉素对子叶的扩大没有显著效应，所以CTK这种对子叶扩大的效应可作为CTK的一种生物测定方法。
四、促进侧芽发育，消除顶端优势?
CTK能解除由生长素所引起的顶端优势，促进侧芽生长发育。如豌豆苗第一真叶叶腋内的侧芽，一般处于潜伏状态，但若以激动素溶液滴加于叶腋部分，腋芽则可生长发育。
五、延缓叶片衰老?
如在离体叶片上局部涂以激动素，则在叶片其余部位变黄衰老时，涂抹激动素的部位仍保持鲜绿。这不仅说明了激动素有延缓叶片衰老的作用，而且说明了激动素在一般组织中是不易移动的。?
细胞分裂素延缓衰老是由于细胞分裂素能够延缓叶绿素和蛋白质的降解速度，稳定多聚核糖体(蛋白质高速合成的场所)，抑制DNA酶、RNA酶及蛋白酶的活性，保持膜的完整性等。此外，CTK还可调动多种养分向处理部位移动，因此有人认为CTK延缓衰老的另一原因是由于促进了物质的积累，现在有许多资料证明激动素有促进核酸和蛋白质合成的作用。例如细胞分裂素可抑制与衰老有关的一些水解酶(如纤维素酶、果胶酶、核糖核酸酶等)的mRNA的合成，所以，CTK可能在转录水平上起防止衰老的作用。
由于CTK有保绿及延缓衰老等作用，故可用来处理水果和鲜花等以保鲜、保绿，防止落果。如用400mg·L-1的6-BA水溶液处理柑橘幼果，可显著防止第一次生理脱落，对照的坐果率为21%，而处理的可达91%，且果梗加粗，果实浓绿，果实也比对照显著增大。
六、打破种子休眠?
需光种子，如莴苣和烟草等在黑暗中不能萌发，用细胞分裂素则可代替光照打破这类种子的休眠，促进其萌发。
《 植物组织培养技术》试题 (一) 一、填空题(每空1分,共20分，) 1、一般培养室控制的温度是__20-30℃____，培养基常选用的pH值是__5.6-5.8___。 2、在组织培养中，培养基常用___高压蒸汽____法灭菌，不耐热物质用_过滤____法灭菌。 3、非洲菊的叶片__丛生___,故没有直立的茎，在组织培养的继代过程中用__花蕾外植体____法繁殖。 4、1962年，Murashige 和Skoog为培养烟草细胞设计了_MS__培养基，其特点是_无机盐__浓度较高，且为较稳定的__溶液__。 5、从单个细胞或外植体形成的愈伤组织 ，大致要经历 __脱分化、_分裂_和 ＿再分化＿期。 6、6-BA / NAA 的高低决定着外植体的发育方向，其比值高时__诱导芽形成____， 比值低时___诱导根形成____。 7、脱毒苗培养的常用两种方法是_茎尖培养脱毒__和_愈伤组织培养脱毒__。 8、菊花在生产实践中常用 _脚芽扦插__法繁殖，在组织培养可用_茎尖、花蕾__作为 外植体进行培养。 .9、草莓属于_____科植物，用微尖培养草莓主要使其＿＿＿＿，从而 提高产量和质量。 二、判断题（每题2分,共10分，） （×）1、对外植体材料用酒精消毒目的只是灭菌。 （×）2、菊花属于球根花卉，而兰花属于宿根花卉。？P53 （×）3、诱导愈伤组织重新脱分化出各种不同的器官和组织，这个过程 称为脱分化。 （×）4、MS0培养基是没有激素的培养基。 （×）5、受精卵和体细胞都具有全能性。 ?（动物体细胞的核） 三、名词解释（每题2分，共10分） 1、细胞全能性
答：每个细胞都拥有该物种的所有遗传信息，并在条件合适的情况下能够发挥该物种的各种功能和有发育成为一个正常和完整的独立个体的能力。
2、灭菌
答：采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施，称为灭菌。
3、玻璃化现象
答：当植物材料进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会出现半透明状和水渍状，这种现象成为玻璃化，玻璃化是试管苗的一种生理失调症状。
4、指示植物
答：指示植物即接种某种病毒后表现特有症状的植物。主要植物种类有：苋色藜、昆诺阿藜、大灰藜、巴西牵牛和千日红等。
5、驯化
答：植物组织经长期培养，会发生一些变化。开始继代培养要加入生长调节物质，其后加入少量或不加入生长调节物质就可以生长，这种现象成为驯化。
四、选择题（每题1分,共10分） （D）1、下列哪种不是原生质体分离所用的酶 A 纤维素酶 B 半纤维素酶 C果胶酶 D淀粉酶 （ ）2、下列哪种不是组织培养常用的维生素 A：维生素B2 、B：维生素B1 、C：维生素B6、 D：维生素C （C）3、在花药培养中下列哪种不是花粉的发育过程。 A营养细胞发育途径 B 生殖细胞发育途径 C 胚状体发育途径 D 花粉均等分裂途径 （③）4、下列哪种激素不属于生长素类 ①IAA ②IBA ③6-BA ④NAA （ ）5、在未成熟胚胎培养中下列哪种不常见的生长方式 A“胚性”生长 B早熟萌发 C先胚根后胚芽 D先形成愈伤组织再分化 （B）6 、适于花粉培养的最佳时期是＿＿ A双核期 B单核期 C多核期 D无核期 （A）7、下面哪种是MS培养基大量元素所用药剂 A 硫酸镁 B 硫酸亚铁 C硫酸锌 D 硫酸铜 （D）8、下列哪种不是在MS培养基起作用的有机物 A氨基酸 B 肌醇 C 维生素 D 琼脂 （C）9、常见的组织培养程序包括①取材②接种③灭菌④做培养基 A①②③④ B①④③② C①③②④ D①④②③ （A）10、和组织培养相似的代名词是 A 克隆 B有性生殖 C孤雌生殖 D 单性生殖 五、简答题（ 共50分） 1、6-BA在组织培养中有何作用？(6分) 细胞分裂素类激素是腺嘌呤的衍生物，常见的有6-BA、KT、ZT、2-ip等。其活性强弱为2-ip > ZT > 6-BA > KT。
作用：在植物组织培养中，细胞分裂素的主要作用是抑制顶端优势，促进侧芽的生长。当组织内细胞分裂素／生长素的比值高时，有利于诱导愈伤组织或器官分化出不定芽；促进细胞分裂与扩大，延缓衰老；抑制根的分化。因此，细胞分裂素多用于诱导不定芽的分化和茎、苗的增殖。
由于6-BA具有高效、稳定、廉价和易于使用等特点,因而被广泛采用,并且是组织培养者最喜爱的细胞分裂素。BA的主要作用是促进芽的形成,也可以诱导愈伤组织发生。可用于提高茶叶、烟草的质量及产量；蔬菜、水果的保鲜和无根豆芽的培育，明显提高果品及叶片的品质。
2、 述活性炭在组织培养中有哪些作用及使用注意事项？(6分) 在植物组织培养中经常要用到活性炭。活性炭加入培养基中的目的
1）主是利用其吸附能力，减少一些有害物质、生长抑制剂的影响，
2)活性炭使培养基变黑，给培养物创造了暗环境，有利于某些植物生根
3）对形态发生和器官形成有良好的效应，但活性炭对物质吸附无选择性，既吸附有害物质，也吸附有利物质，因此使用时应慎重考虑，不能过量，一般用量为1%~5%。
3.什么叫花粉看护培养法？原理是什么？(6分) 花粉看护培养：是将诱导频率较高的一种植物裂开的花药接种在培养基上作为看护组织，再将另一种植物或同种植物的单花粉粒接种在花药里进行滋养培养，或在花药上放一小片滤纸，再让花粉粒接种在滤纸上培养，或将一种植物的愈伤组织作为看护组织，再接花粉粒培养。由于完整的花药发育过程释放出有利于花粉发育的物质，并通过滤纸供给花粉，促进了花粉的发育。
4.茎尖培养脱毒的原理是什么？接种时应注意什么？
感染病毒植株的体内病毒的分布并不均匀，病毒的数量随植株部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域的病毒的感染深度越低，生长点(约0.1～1.0mm区域)则几乎不含或含病毒很少。这是因为病毒运转速度慢，加上茎尖分生区域内无维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞不断分裂和活跃的生长速度。
在切取茎尖时越小越好，但太小则不易成活，过大又不能保证完全除去病毒。剥离茎尖时，应尽快接种，茎尖暴露的时间应当越短越好，以防茎尖变干。
5、 移栽驯化香石竹时怎样选用基质和搭配基质？(6分)
适合于栽种试管苗的基质要具备透气性、保湿性和保肥的特点，且容易灭菌处理，一般可选用珍珠岩、蛭石、砂子等。为了增加粘着力和一定的肥力可配合草炭土或腐殖土。配制混合基质时需按比例搭配，一般用珍珠岩，蛭石，草炭土或腐殖土比例为1：1：0.5。也可用砂子：草炭土或腐殖土为1：1。此外，要根据不同植物的栽培习性来进行配制，这样才能获得满意的栽培效果。移栽驯化香石竹时就可按上述比例选用和搭配基质进行筛选，选出最适合的基质。
6.接种室有哪些技术要求？(6分)
接种室：接种室又称无菌室，是分离和移接菌种的小房间，实际上是扩大的接种箱。在构造和设置上要求如下：
① 接种室应分里外两间，里面为接种间，面积5~6m2；外间为缓冲间，约2~3m2。两间门不宜对开，出入口要求装上推拉门，以减少开关门时的空气扰动。高度均为2~2.5m。接种室不宜过大，不易保持无菌状态。②房间里的地板、墙壁、天花板要平整、光滑，以便擦洗消毒。③门窗要紧密，关闭后与外界空气隔绝。④接种室的主要设备及用具有(1)接种箱(2)超净台(3)解剖镜(4)无菌操作用的器具如酒精灯、常用接种工具。⑤工作台上方和缓冲间天花板上安装能任意升降的紫外线杀菌灯和日光灯。
因接种室面积大，所以紫外线消毒的时间需30min左右。为提高接种成功率，进入接种室要穿戴经过消毒的衣、帽。菌种制作大多采用接种箱操作。
7.用湿热法进行高压灭菌的大致步骤有哪些？(7分)
湿热灭菌法是指用饱和水蒸气、沸水或流通蒸汽进行灭菌的方法，由于蒸汽潜热大，穿透力强，容易使蛋白质变性或凝固，是药物制剂生产过程中最常用的灭菌方法。
培养基用高压灭菌。打开锅盖，加水至水位线。把已装好培养基的三角瓶，连同蒸馏水及接种用具等放入锅筒内，装时不要过分倾斜培养基，以免弄到瓶口上或流出。然后盖上锅盖，对角旋紧螺丝，接通电源加热，当升至0.05MPa时，打开放气阀放气，回“0”，后关闭放气阀。当气压上升到0.10MPa时，保压灭菌20min，到时停止加热。当气压回“0”后打开锅盖，取出培养基，放于平台上冷凝。灭好的培养基不要放置时间太长，最多不能超过1周。
8、怎样用指示植物法鉴定草莓是否含有病毒？(7分)
指示植物法：将一些对病毒反应敏感、症状特征显著的植物作为指示植物（又称鉴别寄主），利用病毒在其他植物上产生的枯斑作为鉴别病毒种类的方法。这种方法条件简单，操作方便，为一种经济而有效的鉴定方法，
鉴别草莓是否含病毒常用的是小叶嫁接法。具体方法是取被鉴定草莓生长成不久的新叶，除去两边小叶，中央小叶带1～1.5厘米长的叶柄，削成锲形做成接穗，指示植物（林丛草莓、深红草莓）则除去中间的小叶，在叶柄一侧用刀切入1～1.5厘米，接入接穗，用毛线包扎好，涂上少量的白色凡士林以防干燥。若带有病毒，嫁接后1～2个月在新展开的二叶片、匍匐茎或老叶上，会出现病斑，若无则说明被鉴定苗是无病毒苗。
试卷2
一、填空题(每空1分,共20分) 1、在分离原生质体酶溶液内，需加入一定渗透稳定剂，其作用是 保持原生质体膜的稳定，避免破裂。 2、花药是植物的生殖器官，用其进行组织培养可培养出完整单倍体植物 。 3、选用驯化基质主要考虑透气性和保湿性问题 4、组织培养的特点包括培养材料经济、培养条件人为控制，周年生产和生长周期短，繁殖率高三个方面。 5、从单个细胞或外植体形成的愈伤组织 ，大致要经历 启动期（诱导期）、分裂期和分化期。 6、非洲菊的叶片_丛生______故没有直立的茎，在组织培养的继代过程中用 __？___法繁殖。 7、脱毒培养的常用两种方法是热处理脱毒和微茎尖培养脱毒。 8、6-BA /NAA 的高低决定着外植体的发育方向，其比值高时诱导愈伤组织或器官分化出不定芽，比值低时诱导根分化。 9、草莓属于蔷薇科植物，组织培养草莓主要使其____？_____。 10、矮牵牛属于十字花科植物，组织培养中常用花药或花粉作外植体。
二、判断题：
（ ）1、非洲菊常用茎尖作为外植体接种 （ ）2、湿热灭菌时灭菌时间与培养容器的关系是：容器越大灭菌时间 应越长。 （ ）3、愈伤组织就是由伤口处产生的愈合组织 （ ）4、MS0培养基是没有激素的培养基。 （ ）5、升汞靠氯气灭菌，次氯酸钙靠汞离子来灭菌。
1、错（花托是非洲菊组织培养中较为合适的外植体材料）2、错 3、错 4、错 5、错
三、名词解释
1、细胞全能性：植物每一个具有完整细胞核的体细胞，都含有植物体的全部遗传信息，在适当条件下，具有发育成完整植株的潜在能力。
2、灭菌：用理化方法杀死物体表面和孔隙内一切微生物或生物体。
3、White培养基： 由White为培养番茄根尖而设计，无机盐量较低，但提高了MgSO4的浓度和增加了硼素，使用广泛，适合生根培养、胚胎培养等的一种培养基。
4、指示植物：一定区域范围内能指示生长环境或某些环境条件的植物种、属或群落。
5、驯化：根据试管苗与自然苗、试管苗的生存环境与自然环境的差异，人为创设从试管苗生存环境逐渐向室外环境转化的过渡条件，以确保试管苗的移栽成活率。
四、选择题：
（ ）1、下列哪种激素示属于生长素类 ①IAA ②IBA ③6-BA ④NAA （ ）2、通过酶解法提取的原生质体，影响其活性的主要因素有 A：pH值 、B：温度 、C：所用酶的浓度、 D：渗透稳定剂 （ ）3、下面哪种是MS培养基大量元素所用药剂 A 硫酸镁 B 硫酸亚铁 C硫酸锌 D 硫酸铜 （ ）4、在剥离微茎尖或幼胚时，必须应用的仪器是 A 低倍显微镜 B 高倍显微镜 C解剖镜 D放大镜 （ ）5、常见的组织培养程序包括①取材②接种③灭菌④做培养基 A①②③④ B①④③② C①③②④ D①④②③ （ ）6、适于花粉培养的最佳时期是＿＿ A双核期 B单核期 C多核期 D无核期 （ ）7、在花药培养中下列哪种不是花粉的发育过程。 A营养细胞发育途径 B 生殖细胞发育途径 C 胚状体发育途径 D 花粉均等分裂途径 （ ）8、下列哪种在MS培养基不起促进生长作用 A氨基酸 B 肌醇 C 维生素 D 琼脂 （ ）9、 和组织培养相似的代名词是 A 克隆 B有性生殖 C孤雌生殖 D 单性生殖在未成熟胚胎培养中 （ ）10、下列哪种是不常见的组织培养生长方式 A胚状生长 B早熟萌发 C先胚根后胚芽 D先形成愈伤组织再分化
1—5 AB(这题答案不确定)ACB 6—10 BCDAB(这题答案也不确定)
五、简答题（共50分） 1、简述活性炭在组织培养中有哪些作用及使用注意事项？(6分)
1.作用：具吸附作用；茎尖初代培养可防褐化；促进新梢增殖（浓度0.1 －0.2%）；促进生根；减轻组培苗玻璃化（浓度0.3%）；有利于胚胎培养。活性炭对形态发生和器官形成有良好的效应，在失去胚状体发生能力的胡萝卜悬浮培养细胞中加入1%~4%活性炭可使胚状体的发生能力得以恢复。在培养基中加入0.3%的活性炭可降低玻璃苗的产生频率，对防止产生玻璃化有良好作用。
2.注意：活性炭吸附性无选择性。既吸附有害物质，也吸附有利物质，因此使用时应慎重考虑，不能过量，一般用量为1%~5% 2、什么是玻璃化现象？解决玻璃化现象的方法主要有哪几点？(6分)
1.玻璃化现象：当植物材料不断地进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会呈半透明水渍状，这种现象通常称为玻璃化(也称为超水化现象)。发生玻璃化的试管苗称为玻璃化苗
2.解决方法：
(1)适当提高培养基中蔗糖和琼脂的含量水平，降低培养基的水势。
(2)选择合适的激素种类和浓度，适当减少细胞分裂素用量或适当增加生长素比例。
(3)适当延长光照时间或增加自然光照，提高光强。
(4)调整培养温度，培养室要有降温和增温设施，防止温度突然变化。
(5)使用透气性好的封口材料。如牛皮纸、棉塞、滤纸、封口纸等，尽可能降低培养内空气湿度，加强气体交换。
(6)尽量选用玻璃化轻或无玻璃化的植物材料。
(7)适当提高培养基中的无机盐的含量，减少铵态氮而提高硝态氮的用量。
(8)在培养基中适当添加活性炭、间苯三酚、根皮苷、聚乙烯醇(PVA)均可有效控制玻璃化苗的发生。
3、 NAA有什么特点？在组织培养中有何作用？(6分)
答：萘乙酸是广谱型植物生长调节剂，能促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根增加坐果，防止落果，改变雌、雄花比率等。可经叶片、树枝的嫩表皮，种子进入到植株内，随营养流输导到全株。
应用：1、能促进各种类型酚类化合物的形成及组织生长，如在茶树组织中
2、促进叶分化，促进生根，过高浓度则抑制根的生长，如菘蓝叶片组织培养
4、什么叫花粉看护培养法？原理是什么？(6分)
答：花粉看护培养法
在装有50ml液体培养基的小培养皿中，用解剖针撕开花药释放出花粉，形成花粉悬浮液，最后稀释至0.5ml培养基中，含有10个花粉粒的细胞悬浮液。看护培养时，把花药放在琼脂培养基表面上，然后在每个花药上覆盖一小块圆片滤纸。用移液管吸取1滴已准备好的花粉粒悬浮液，滴在每个小圆片滤纸上。培养在25℃和一定光照强度下，大约一个月长出细胞群。由于完整的花药发育过程释放出有利于花粉发育的物质，并通过滤纸供给花粉，促进了花粉的发育。
原理：把花粉从花药中分离出来，以单个花粉粒作为外植体进行离体培养，即诱导花粉细胞发育成单倍体细胞，最后发育成单倍体植株。在合成培养基上，改变其发育机能，即不经过受精发生的细胞分裂，由单个花粉粒发育成完整植物。由于花粉已是单倍体细胞，诱发它经愈伤组织或胚状体发育成的植株都是单倍体植株，且不受花药的药隔、药壁、花丝等体细胞的干扰。
5、 茎尖培养脱毒的原理是什么？接种时应注意什么？(6分)
原理：感染病毒植株的体内病毒的分布并不均匀，病毒的数量随植株部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域的病毒的感染深度越低，生长点（约0.1-1MM区域）则几乎不含或含病毒很少。因为病毒在植物体内通过维管束和胞间连丝传播，而分生区域内无维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞不断分裂和活跃的生长速度。所以顶端分生组织带毒少，病毒含量低。
接种时应注意：无菌操作：接种用的工具要在酒精灯火焰上灼烧。应尽量使外植体切口接触培养基。锥形瓶口应斜向火焰，在酒精灯火焰附近操作。接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等；
6、 接种室有哪些技术要求？(6分)
接种室宜小：密闭光滑，配置拉动门。
接种室要求干爽。吊装紫外线灭菌灯，最好安装一小型空调，
接种室应设有缓冲间，面积2 m2为宜。
7、愈伤组织形态怎样，什么条件可以诱导其形成？(7分)
答1）愈伤组织形态上是没有分化但能进行活跃分裂的一团细胞，细胞排列疏松无序，多为薄壁细胞。
2）诱导产生愈伤组织，首先使细胞失去原有的状态，恢复分裂能力，变成分生细胞，即经过脱分化的过程。主要通过培养基中添加外源激素的刺激，迫使培养的植物组织细胞改变原有的代谢途径，为启动分裂做准备。
8、简述无菌接种的大致过程？
答（1）在接种前20min，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯进行灭菌。
（2）将外植体用自来水冲刷干净
（3）接种员洗净双手，上工作台，用乙醇棉球擦拭双手，并擦拭工作台面。
（4）将初步洗涤及切割的材料放入烧杯，带入超净台上，用消毒剂灭菌，再用无菌水冲洗，最后沥去水分，取出放置在灭过菌的纱布上或滤纸上。
（5）材料吸干后，一手拿镊子、一手拿剪刀或解剖刀，对材料进行适当的切割。如叶片切成0.5cm平方的小块；茎切成含有一个节的小段。微茎尖要剥成只含1-2片幼叶的茎尖大小等。在接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉污染。
（6）用灼烧消毒过的器械将切割好的外植体插植或放置到培养基上。
具体操作过程（以试管为例）是：解开包口纸，使试管口靠近酒精灯火焰，灼烧数秒钟。然后用镊子夹取一块切好的外植体送入试管内，轻轻插入培养基上。若是叶片直接附在培养基上，以放1-3块为宜。至于材料放置方法除茎尖、茎段要正放（尖端向上）外，其他尚无统一要求。
（7）接种完后，将管口在火焰上再灼烧数秒种。并用棉塞，塞好后，包上包口纸，包口纸里面也要过火。做好标记，注明接种植物、处理名称和接种日期。
试卷3
《 植物组织培养技术》试题 (三) 一、填空题(每空1分,共20分，) 1、配制培养时，一般先配制母液，其目的在于_提高工作效率__和__提高试验精度_______。 2、压力单位中1kg/cm2相当于__0.1_______MPa，在0.1 MPa时锅内温度为 _____121℃____。 3、微量元素母液可配成___200_____倍，配制培养基时移取___5_____毫升。 4、ＭＳ培养基是______无机盐____浓度较高，为较稳定__满足培养物生存_的溶液。 5、高压灭菌可以对__培养基________及工作服______、玻璃器皿______、橡胶物品______等进行灭菌。 6、凡是暴露在空气中_____的物体，接触自然水源______的物体，其表面都有菌。 7、细胞的全能性是植物的每个细胞都具有该植物的全部__遗传基因_______和 发育成完整植株的能力。 8、愈伤组织除了可植株再生培养外。可进行悬浮培养而__产生次代谢物__________。 9、危害植物的病毒主要是靠_无性繁殖_________的作物 10、分生区域内无维管束，病毒只能通过_附近细胞_________传递。 11、花序轴应选取具该品种典型特征的、其上生长的饱满充实的__花瓣__。（这题找不到正确答案，求助） 二、选择题（每题1分,共10分） 1、微量元素母液的配制浓度（ 2 ） ① 10倍 ②100倍 ③1mg/ml ④10mg/ml 2、接种工具灭菌常采用 （ 1 ） ①灼烧 ②高压 ③过滤 ④熏蒸 3、下列哪种不是组织培养常用的维生素A A：维生素B2 B：维生素B1 C：维生素B6、 D：维生素C 4、下面哪种是MS培养基大量元素所用药剂A A 硫酸镁 B 硫酸亚铁 C硫酸锌 D 硫酸铜 5、下列哪种不是使甲醛挥发的方式 C A 加高锰酸钾 B 加热 C 加水 6、下面哪种基质具有一定的肥力C A 珍珠岩 B蛭石 C 草炭土 D河砂 7、愈伤组织是一种＿A＿＿＿组织 A淡黄色且能分裂，B绿色不能分裂，C有一些变形的组织D是一种成熟组织 8、下面哪一个是分化期的明显表现?D A细胞增加 B细胞增大 C细胞变形 D 细胞在结构上变化 9、下列那种不是无性繁殖的器官C A块茎 B枝条 C种子 D块根 10、下列那种方法脱毒效果较好D A微茎尖 B热处理 C愈伤组织 D化学药剂 11、菊花的果实是下列哪一种B A 浆果 B瘦果 C 核果 D蒴果 12、下面哪些不是菊花植物所含有的花B A舌状花；B漏斗状花；C管状花；D轮状花 三、名词解释（每题2分，共10分） 1、母液
为了避免每次配制培养基都要对几十种化学药品进行称量，应该将培养基中的各种成分，按原量10倍、100倍或1000倍称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做母液。 2、初代培养
是指在组培过程中，最初建立的外植体无菌培养阶段，即无菌接种完成后，外植体在适宜的光、温、气等条件下被诱导成无菌短枝(或称茎梢)、不定芽(丛生芽)、胚状体或原球茎的过程。因此，也称为诱导培养。由于外植体的来源复杂，又携带较多杂菌，因此初代培养一般比较困难。
3、松散型愈伤组织（ppt和Word上都找不到）
所谓愈伤组织是指在人工培养基上经诱导后外植体表面上长出来的一团无序生长的
4、抗血清鉴定
植物病毒是由蛋白质和核酸组成的核蛋白，是一种较好的抗原，给动物注射后会引起抗体产生。抗体是动物受外来抗原的刺激产生的一种免疫球蛋白，主要存在于血清中。有抗体存在的血清叫抗血清。不同病毒引起的抗血清有各自的特异性。病毒作为抗原与其相对应抗体的抗血清之间会发生沉淀反应，即免疫反应，因而抗血清可作为病毒检测的高度专化的试剂。用被鉴定的组培苗的汁液作为抗原，加入已知病毒的抗血清中，观察其反应，可判知被鉴定植物有无病毒和病毒种类，此法称为抗血清鉴定法 5、直接分化（未找到定义）
无胚胎形态，分生中心直接分化器官（未找到定义，只搜到了这句）
四、判断题（每题2分,共10分，） 1、MS0培养基是没有激素的培养基。 2、琼脂只起固化作用，本身并不提供任何营养。 3、熏蒸灭菌适于空气和物体表面的灭菌。 4、生根培养可采用1/2或者１／４MS培养基。 5、500～600目金钢砂起传播病毒的作用。 6、隔虫网的网眼为0.4～0.5mm大小的网纱，可以防止蚜虫进入。 7、非洲菊可用茎尖接种，但容易污染。 8、矮牵牛花冠不呈喇叭状，而是辐射状。 9、由于花粉已是单倍体细胞，诱发它经愈伤组织或胚状体发育成的 植株都是单倍体植株。 10、微滴培养法将有原生质体的悬浮液以小滴接种在无菌且清洁 干燥的培养皿上进行培养。
F T F T F T F T F F
简答题（每题10分，共50分） 1、为什么要配制母液，配制时要注意什么?
答：配制母液不但节省配制时间，而且能够保证配制的准确性和配制时的快速移取，极大提高了工作效率。此外，也便于培养基的低温保藏。
注意：1.配制母液所需药品应采用分析纯或化学纯试剂。
2.配制母液用水为蒸馏水或去离子水，试剂可以通过加热或置于磁力搅拌器上加速溶解。
3.母液保存时间不要过长，大量元素母液最好1个月内用完。如发现母液有混浊或沉淀现象发生，则弃之勿用。
4 . 防止母液发生沉淀
2、表面灭菌如何操作？
答：不同外植体，表面灭菌方式不同。
外植体
消毒方法
根及地下部器官
?
①流水冲洗；②纯酒精漂洗；③用0.1%～0.2%升汞液浸5～10min或2%次氯酸钠溶液浸泡10～15min;④无菌水漂洗3～5次。
茎尖、茎段及叶片
?
①流水冲洗后用肥皂、洗衣粉或吐温洗涤；②70%酒精浸泡数秒；③根据材料老嫩和枝条的坚实程度，用2～10%的次氯酸钠溶液(加或不加吐温－80)浸泡10～15min，或者用0.1%～0.2%的升汞消毒3～10min；④无菌水漂洗3～5次。
花药
?
①70%酒精浸泡数秒；②无菌水冲洗2～3次；③饱和漂白粉滤液中浸泡10min;④无菌水漂洗2～3次。
胚及胚乳
方法一：①成熟或未成熟的种子消毒后剥离出胚或胚乳。
方法二：①去除种皮后，用4%～8%的次氯酸钠溶液浸泡8～10min；②无菌水漂洗3～5次。
果实及种子
?
①根据果实和种子清洁度，流水冲洗10～20min或更长时间；②70%酒精漂洗几秒到几十秒钟(取决于果实和种子的成熟度与果皮、种皮的厚薄)；③果实用2%次氯酸钠溶液浸泡10min后，无菌水冲洗2～3次；④种子用10%的次氯酸钠溶液浸泡20～30min，或用0.1%升汞溶液浸泡5～15min后，无菌水漂洗3～5次。
3、无菌接种室有那些技术要求？
答：无菌接种室对无菌环境要求严格。
1、首先是接种室的消毒可用药剂熏蒸、药剂喷洒、紫外线照射。
2、在接种室内的培养基和用具都要经过干热灭菌、高压湿热灭菌、擦拭消毒和灼烧灭菌后方可使用。
3、实验服、口罩、帽子、滤纸、无菌水灭菌都要经过高压湿热灭菌和紫外灯照射。
4、超净工作台、双手及培养瓶可用药剂喷洒、紫外线照射以及涂抹消毒
4、分裂期细胞有什么特点？
答：在植物组织培养中，分裂期细胞一般体积较小，排列较密，细胞中细胞核较大且没有液泡。另外分裂期细胞未感染病毒，因此是植物组织培养的良好的材料。(好像没什么东西好写)
5、怎样用指示植物法鉴定脱毒苗？
答：指示植物法是指利用病毒在其他植物上产生的枯斑作为鉴别病毒种类的标准，又称为枯斑法。这些对病毒敏感并能产生专一性枯斑症状的植物称为指示植物，又称为鉴别寄主。指示植物一般分为二类：一类是接种病毒后产生系统性症状，病毒可扩展到植株非接种部位，通常没有局部病斑的指示植物；另一类是只产生局部病斑，常为坏死、褪绿或环状病斑的指示植物。
鉴定方法： (1)汁液涂抹法 取被鉴定植物的1~3g幼叶置于研钵中，加入10ml水和等量的0.1 mol/L的磷酸缓冲液（pH7.0），研碎后加入少量500~600目金钢砂作为摩擦剂，制成匀浆，用手指(戴上手套)或纱布或棉球蘸取匀浆在指示植物叶片上轻轻涂抹2～3次，以汁液进入叶表皮细胞又不损伤叶片为度，或用喷枪喷射进行接种。5min后用清水清洗叶面多余匀浆及金刚砂。接种后将指示植株置于室内或防虫网室内，在半遮荫、温度15~25℃的条件下培养，2~6d后可视其病症的有无，来判断被鉴定植物是否脱毒。
(2)嫁接法 将被鉴定植物的芽或幼叶嫁接在指示植物上，4~6周后根据指示植物的症状来判断是否脱毒。
《 植物组织培养技术》试题 (四) 一、 填空题(每空1分,共20分，) 1、菊花多为___短日照_____植物。只有在较短的日照下才能开花。 2、所谓花药预处理是将花蕾剪下放入水中，在冰箱__ __下保持3～4天。 3、微茎尖要剥离掉幼叶和叶原基，最后几乎就是一个闪亮半圆球形的__________。 4、愈伤组织整个过程大致可分为_诱变期、分裂期、分化期_等三个时期 5、用茎段接种进行的快繁优点是： ____细胞可塑性大__和_容易易体培养__等。（不确定） 6、叶器官培养一般是先诱导形成__愈伤组织___，然后再由此产生_胚状体、茎、叶和根_。 7、琼脂加入浓度大约是_0.8%__，蔗糖加入浓度大约是__3%____ 。 8、氮是蛋白质、酶__氨基酸__、__核苷酸__等的组成成分。 9、无菌范畴在组织培养中涉及的主要有__经高温灼烧或一定时间蒸煮过后的物体，经其它物理的或化学的灭菌方法处理后的物体(当然这些方法必须已经证明是有效的)，高层大气、岩石内部、健康的动、植物的不与外部接触的组织内部，强酸强碱，化学元素灭菌剂等表面和内部等等都是无菌的。（不确定） 10、放冷气时压力表指示为___0.05_MPa，在0.1MPa时锅内温度为_ 121℃__。
二、判断题（每题2分,共10分，） 1、若用花托接种时，将花托切成2~3mm见方的小块。 错（3—5mm） 2、花药培养属细胞培养，花粉培养属器官培养。 错（花药—器官，花粉—细胞） 3、电子显微镜才能分辨0.5μm大小的病毒颗粒。 对 4、愈伤组织诱导原理是抵消阻碍DNA的复制，让其基因打开，能够复制。 对 5、驯化时初期保持温室的大湿度，后期可以直接恢复到自然条件下的湿度。 错（不同时期湿度要求不同） 6、叶块培养首先是叶块开始增厚肿大，进而形成愈伤组织。错 7、植物克隆即是无性繁殖。 错 8、对于二倍体生物来说，体细胞含有二倍的染色体。 错（两个染色体组） 9、对外植体材料用酒精消毒目的只是灭菌。 错 10、紫外线灭菌物体表面的灭菌 对
三、名词解释（每题2分，共10分）第四、五题自己归纳总结的。 1、宿根植物 指个体寿命超过两年，可持续生长，多次开花、结实，且地下根系或地下茎形态正常，不发生变态的一类多年生草本花卉。依其落叶性不同，宿根花卉又有常绿宿根花卉和落叶宿根花卉之分。常见的宿根植物有芍药、秋海棠、君子兰等。【宿根植物可以采用分蘖、根插等无性繁殖方法加以培育。由于宿根植物不需经常更换，因此往往成为园林布置中的理想植物】 2、微室培养法 即将细胞培养在很少量的培养基中。在培养过程中可以连续进行显微观察，将一个细胞的生长、分裂和形成细胞团的全部过程记录下来。【（1）微室内不能有气泡。（2）最好微室的厚度不要超过20微米，盖玻片 的厚度要在0.17～0.18毫米左右。（3）观察时要保持温度和培养时的一致。】
3、指示植物 一定区域范围内能指示生长环境或某些环境条件的植物种、属或群落。有普遍指示植物和地方指示植物之分。按指示对象可分为：①土壤指示植物。②气候指示植物。③矿物指示植物。④环境污染指示植物。⑤潜水指示植物。如气候指示植物椰子，它的开花是热带气候的标志。 4、诱导期 一般指在一定条件下，诱导外植体细胞脱分化，改变原来的发育途径，逐步逆转其原有的分化状态，转变为具有分生能力的胚性细胞即愈伤组织的时期。 5、诱导培养基 用于不同植物和外植体诱导愈伤组织的培养基。 一般以MS培养基母液为基础，添加对愈伤组织诱导有影响的外源激素，且在适当湿度条件、温度条件、光照条件等培养条件下诱导愈伤组织的培养基。
四、选择题（每题1分,共10分）1、D 2、B 3、C 4、A 5、A 6、C 7、D 8、③ 9、 D 10、B 1、下面哪个不是常见的自然无性繁殖方法 A扦插； B嫁接；C压苗；D播种、 2、 选择花药应选择什么时期 A 双核期 B 单核期 C三核期 D 成熟期 3、下列那种不是无性繁殖的器官 A块茎B枝条C种子D块根 4、下面哪一个是分化期的明显表现? A细胞增加 B细胞增大 C细胞变形 D 细胞在结构上变化 5、下面哪个不是胚发育过程所经历的状态： A受精卵、B胚分裂、C幼胚、D成熟胚。 6、下面哪个不是离体叶培养所包括的范围 A叶原基、A叶柄、C子叶、D叶缘 7、下面哪个不是氮构成的物质 A、蛋白质 B、核酸 C、ATP D、脂肪 8、下列哪种激素属于细胞分裂类 ①IAA ②IBA ③6-BA ④NAA 9 、下列哪种不是涂擦灭菌的对象 A 双手 B 台面 C工具 D空间 10、 下列哪种不是使甲醛挥发的方式 A 加高锰酸钾 B 加热 C 加水
五、简答题（每题10分 共50分） 1、怎样用指示法鉴定菊花是否脱毒? 2、用微茎尖组织脱毒的原理是什么？ 3、愈伤组织的分化期细胞有什么特点？ 4、简答出一般茎段是怎样选材消毒和接种的？ 5、 细胞分裂素有何作用？
1.菊花病毒病 (1)菊花B病毒chrysanthemum B virus(CVB)菊花B病毒归属为香石竹潜隐病毒属，患病菊花在菊花叶片上表现为轻型花叶症或不表现症状，在菊花感病品种上，可以形成明显的花叶症状或坏死斑，严重感病的产生褐色枯斑。菊花B病毒由汁液、扦插条、桃蚜和马铃薯传播，(2)番茄不孕病毒tomato aspermy virus（TAV）番茄不孕病毒归属为黄瓜花叶病毒属，患病菊花病时出现花叶、扭曲，植株萎缩，花色不正常。汁液、桃蚜和其他一些蚜虫作非持久性传播。汁液、桃蚜和其他一些蚜虫作非持久性传播。(3)菊花矮化类病chrysanthemum stunt virus(CSVD)菊花矮化类病毒归属为马铃薯纺锤块茎类病毒属。患病菊花子叶变小、畸形、植株矮花、丛生和扭曲。一些品种出现碎色花。汁液传播，嫁接用刀具可以传播，菟丝子也可以传播，少数能种传。(4)脉斑驳病 菊花叶片上出现脉纹状黄色斑驳，使叶片失去应有的生机，呈萎靡不振状、花朵小，有时不能开放。其病原为菊花脉斑驳病毒。该病毒主要通过汁液、嫁接以及菊长管蚜等进行传播。
鉴定方法
(1)汁液涂抹法 取被鉴定植物的1~3g幼叶置于研钵中，加入10ml水和等量的0.1 mol/L的磷酸缓冲液（pH7.0），研碎后加入少量500~600目金钢砂作为摩擦剂，制成匀浆，用手指(戴上手套)或纱布或棉球蘸取匀浆在指示植物叶片上轻轻涂抹2～3次，以汁液进入叶表皮细胞又不损伤叶片为度，或用喷枪喷射进行接种。5min后用清水清洗叶面多余匀浆及金刚砂。接种后将指示植株置于室内或防虫网室内，在半遮荫、温度15~25℃的条件下培养，2~6d后可视其病症的有无，来判断被鉴定植物是否脱毒。若汁液带病毒即出现可见病症(表5-3)。
表5-3 几种马铃薯病毒的指示植物及其症状(引自潘瑞炽等，2000)
病毒种类
指示植物
症状
汁液涂抹法主要用于草本植物的脱毒鉴定，适用于鉴定通过汁液传播的病毒。利用指示植物法鉴定时，一般以早春为宜，因为早春刚萌发嫩叶或花瓣，接种成功率较高，5月份以后接种较难成功，从而影响检测结果的正确性。
2、原理是植物体内病毒分布不均匀，其生长点（约0.1～1.0mm区域）几乎不含病毒。这是因为分生区域内无维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，其传递速度不如细胞不断分裂和活跃的生长速度。因此，切取茎尖时越小越好，但太小则不易成活，过大则不能保证完全除去病毒。
3、生长旺盛的愈伤组织一般呈乳黄色或白色，有光泽；也有浅绿色或绿色；老的愈伤组织多变为黄色或者褐色。
4、茎段培养
1.取材与消毒
取生长健壮无病虫的幼嫩枝条或鳞茎盘，如果是木本植物则取当年生嫩枝或一年生枝条,去掉叶片，剪成3～4cm的小段。用肥皂水擦洗茎段，于操作台用75%乙醇灭菌10-60s，再用饱和漂白粉溶液浸泡10-20min，（如果材料表面有绒毛应在消毒剂中滴加1~2滴吐温-20或吐温-80。注意根据材料的老嫩和蜡质的多少来确定消毒时间。）最后用无菌水冲洗数次，以彻底冲洗掉材料表面残留的药剂，否则植物材料会受残留灭菌剂的危害。
2.接种
采用灭过菌的器械在无菌条件下进行操作。首先消毒好的茎段去除两端被消毒剂杀伤的部位，将茎段切成0.5-1cm的带节的茎段，若是鳞茎则采取带小段鳞片底盘，再切开底盘，使每块底盘上都带有腋芽。然后接种到培养基上。
5.细胞分裂素（CTK）
一、促进细胞分裂 细胞分裂素的主要生理功能就是促进细胞的分裂。生长素、赤霉素和细胞分裂素都有促进细胞分裂的效应，但它们各自所起的作用不同。细胞分裂包括核分裂和胞质分裂两个过程，生长素只促进核的分裂(因促进了DNA的合成)，而与细胞质的分裂无关。而细胞分裂素主要是对细胞质的分裂起作用，所以，细胞分裂素促进细胞分裂的效应只有在生长素存在的前提下才能表现出来。而赤霉素促进细胞分裂主要是缩短了细胞周期中的G1期(DNA合成准备期)和S期(DNA合成期)的时间，从而加速了细胞的分裂。
二、促进芽的分化
促进芽的分化是细胞分裂素最重要的生理效应之一。1957年斯库格和米勒在进行烟草的组织培养时发现，细胞分裂素(激动素)和生长素的相互作用控制着愈伤组织根、芽的形成。当培养基中［CTK］/［IAA］的比值高时，愈伤组织形成芽；当［CTK］/［IAA］的比值低时，愈伤组织形成根；如二者的浓度相等，则愈伤组织保持生长而不分化；所以，通过调整二者的比值，可诱导愈伤组织形成完整的植株。?
三、促进细胞扩大
细胞分裂素可促进一些双子叶植物如菜豆、萝卜的子叶或叶圆片扩大，这种扩大主要是因为促进了细胞的横向增粗。由于生长素只促进细胞的纵向伸长，而赤霉素对子叶的扩大没有显著效应，所以CTK这种对子叶扩大的效应可作为CTK的一种生物测定方法。
四、促进侧芽发育，消除顶端优势?
CTK能解除由生长素所引起的顶端优势，促进侧芽生长发育。如豌豆苗第一真叶叶腋内的侧芽，一般处于潜伏状态，但若以激动素溶液滴加于叶腋部分，腋芽则可生长发育。
五、延缓叶片衰老?
如在离体叶片上局部涂以激动素，则在叶片其余部位变黄衰老时，涂抹激动素的部位仍保持鲜绿。这不仅说明了激动素有延缓叶片衰老的作用，而且说明了激动素在一般组织中是不易移动的。?
细胞分裂素延缓衰老是由于细胞分裂素能够延缓叶绿素和蛋白质的降解速度，稳定多聚核糖体(蛋白质高速合成的场所)，抑制DNA酶、RNA酶及蛋白酶的活性，保持膜的完整性等。此外，CTK还可调动多种养分向处理部位移动，因此有人认为CTK延缓衰老的另一原因是由于促进了物质的积累，现在有许多资料证明激动素有促进核酸和蛋白质合成的作用。例如细胞分裂素可抑制与衰老有关的一些水解酶(如纤维素酶、果胶酶、核糖核酸酶等)的mRNA的合成，所以，CTK可能在转录水平上起防止衰老的作用。
由于CTK有保绿及延缓衰老等作用，故可用来处理水果和鲜花等以保鲜、保绿，防止落果。如用400mg·L-1的6-BA水溶液处理柑橘幼果，可显著防止第一次生理脱落，对照的坐果率为21%，而处理的可达91%，且果梗加粗，果实浓绿，果实也比对照显著增大。
六、打破种子休眠?
需光种子，如莴苣和烟草等在黑暗中不能萌发，用细胞分裂素则可代替光照打破这类种子的休眠，促进其萌发。