3.1.2 DNA的粗提取与鉴定 课件（32张ppt）【新教材】 2020-2021学年人教版（2019）高二生物选择性必修三

第3章
基 因 工 程
　　思考：
　　如何将DNA提取出来，并进行鉴定呢?
DNA
DNA
DNA的粗提取与鉴定
探究和实践
提取生物大分子的基本思路
基本思路
提取DNA的方法
选用一定的物理或化学方法，分离具有不同物理或化学性质的生物大分子
利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。
（一）基础知识
1、DNA不溶于酒精溶液
DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可初步分离DNA与蛋白质。
（二）DNA粗提取的原理
2、DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同
---DNA的溶解性和耐受性
3、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性
①蛋白酶—水解蛋白质，对DNA没有影响。
②高温—大多数 在60～80℃时变性沉淀,而 在
80℃以上才会变性。
③洗涤剂—溶解细胞膜，
去除 ;
但对DNA没有影响。
蛋白质
DNA
脂质、蛋白质
4、DNA的鉴定
在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色，因此用二苯胺试剂鉴定DNA分子。
DNA
+
二苯胺
沸水浴
蓝色
（三）目的要求
1、了解DNA的物理化学性质；理解DNA粗提取
和鉴定的原理
2、学会DNA粗提取的方法以及利用二苯胺试剂
对DNA 进行鉴定
（四）材料用具
不同生物的组织中DNA含量不同。在选取材料时，应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。你认为如下提供的材料中哪些不适合提取DNA？为什么？
供选材料：（括号内为染色体条数）
新鲜洋葱（16）、香蕉、菠菜（12）、菜花、、猕猴桃（58）；
猪肝（38）、鱼卵、鸡血（78）、哺乳动物的成熟红细胞；
在液体培养基中培养的大肠杆菌（1）
原则上，凡是含有DNA的生物材料都可以考虑
选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大。
1、实验材料的选取
2、实验用具
烧杯、量筒、玻璃棒、
研钵、纱布、漏斗、
试管、试管架、试管夹、
酒精灯、石棉网、三脚架、火柴、
刀片和天平等。
（五）方法步骤：
1.研磨洋葱
2.过滤获取含DNA的上清液
3.冷却酒精析出DNA
4.DNA的鉴定
称取约30g洋葱切碎，放入研钵中，倒入10mL研磨液，充分研磨。
1. 研磨洋葱
在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液。
也可直接将研磨液倒入塑料离心管中，1500r/min的转速下离心5min，再取上清液放入烧杯中。
2. 过滤获取含DNA的上清液
研磨洋葱
或将溶液倒入塑料离心管中，在10000r/min的转速下离心5min，弃上清液，将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干。
3. 冷却酒精析出DNA
在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%)，静置2~3min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA。
用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分；
向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min。
待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。
4. DNA的鉴定
取两支20mL的试管，各加入2 mol/L的NaCl溶液5mL。将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCI溶液中。
4.DNA的鉴定
{5DA37D80-6434-44D0-A028-1B22A696006F}
1号试管
2号试管
加入2mol/L NaCl
溶液
5mL
5mL
丝状物(DNA)
不加
加入
用玻璃棒搅拌
无
丝状物溶解
加入二苯胺试剂
4mL
4mL
沸水浴
5min
5min
观察现象
不变蓝
变蓝
鉴定结果
操作提示
①获取材料时，选取DNA含量多的，不同实验材料提取DNA的方法可能稍有不同。
②粗提取DNA时，用玻璃棒搅拌含有悬浮物的溶液时，不要直插烧杯底部，搅拌要轻缓、并沿一个方向，以便获得较完整的DNA分子。
③二苯胺试剂现配现用，否则会影响鉴定结果。
④查阅资料了解实验室提取纯度高的DNA的方法。
DNA粗提取与鉴定
实验原理
实验材料
方法步骤
操作提示
DNA不溶于酒精。
DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，可溶于2mol/L NaCl溶液。
沸水浴，DNA遇二苯胺试剂呈现蓝色。
实验用具
1.下列关于DNA粗提取与鉴定的叙述，错误的是( )
A. DNA析出过程中，搅拌操作要轻柔以防DNA断裂
B. 预冷的乙醇溶液可用来粗提取DNA
C. 用二苯胺试剂鉴定DNA需要进行水浴加热
D. 鉴定DNA时，应将丝状物直接加入到二苯胺试剂中进行沸水浴
D
2.如图为“DNA的粗提取与鉴定”实验的相关操作。
(1)图中实验材料A可以是_________________________等，研磨前加入的B应该是_________________。
(2)通过上述所示步骤得到滤液C后，在4℃冰箱中放置几分钟后，再取________，向其中加入等体积、预冷的酒精溶液，析出的白色丝状物为______________。
洋葱（花菜、香蕉、猪肝）
配置好的研磨液
上清液
粗提取的DNA
G
{8A107856-5554-42FB-B03E-39F5DBC370BA} 1
B液中
搅拌研磨后过滤
滤液 E
2
2mol/L的NaCl溶液
搅拌后过滤
滤液 F
3
冷却的95%的酒精溶液中
搅拌后过滤
滤液 G
(3)在“DNA的粗提取与鉴定”实验中，将含有一定杂质的DNA丝状物分别放入体积为2mL的3种溶液中，经搅拌后过滤，获得如表所示的3种滤液，含DNA最少的是滤液_____。