a-淀粉酶的固定化与淀粉溶液的检测

(共13张PPT)
知识结构
二、a-淀粉酶的固定化与淀粉水解作用的检测
一、固定化技术基础知识
一、固定化技术基础知识
固定化技术：利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术，包括吸附法、包埋法、化学结合法（将酶分子或细胞相互结合，或将其结合到载体上）。
包埋法
化学结合法
物理吸附法
细胞多采用包埋法固定
酶更适合采用化学结合和物理吸附法
固定化
反应方式
不管是固相柱还是固相悬浮体，回收后，在一定条件下贮存，还可以利用。
1.使底物溶液通过装有固相酶的柱，柱留出液即为酶催化的产物。
2.有时也可将固相酶或固定化细胞悬浮于底物溶液中，一定时间后溶液即成酶催化的产物。
实验原理
α-淀粉酶
β-淀粉酶
糖化淀粉酶
淀
粉
糊
精
麦
芽
糖
葡
萄
糖
二、α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测
运用吸附法将α-淀粉酶的固定在石英砂上。一定浓度的淀粉溶液经过固定化的α-淀粉酶催化后，生成糊精，使流出液加入KI-I2指示液后呈红色，表明水解产物糊精生产。
固定化装置—层析柱
实验材料制备
5mmol/L KI-I2溶液
称取0.127g碘和0.83g碘化钾。加蒸馏水100ml。
a-淀粉酶的固定化
在烧杯中将5mg a-淀粉酶溶于4ml蒸馏水中。再加入 5g石英砂，不时搅拌，30分钟后装入层析柱中。
用10倍体积的蒸馏水洗涤此层析柱以除去未吸附的游离淀粉酶，流速控制为1ml/min。
可溶性淀粉溶液
取50mg可溶性淀粉溶于100ml热水中，搅拌均匀。
实验步骤
2.试验后，用10倍体积的蒸馏水洗涤此层析柱，放置在4℃冰箱里，几天后再重复上述实验，看是否有相同结果。
1.将灌注了固定化酶的层析柱放在铁架台上，用滴管滴加淀粉溶液，使淀粉溶液已0.3mL /min的流速过柱。在流出5mL后接收0.5mL流出液，加入1-2滴KI-I2 溶液，观察颜色。用水稀释1倍后再观察颜色。
HST
层析住
实验结果
1 2 3 4
1、2mL水+1~2滴KI-I2溶液
、2mL淀粉液+1~2滴KI-I2溶液
、2mL淀粉滤液+1~2滴KI-I2溶液
、2mL淀粉滤液+1~2滴KI-I2溶液+稀释1倍
实验注意事项
a.控制滴灌流速。0.3mL/min的流速，我们就可以控制每分钟滴管流出量为每分钟6滴（6=0.3mL/ 50uL）。这样做的目的是控制流速让淀粉和淀粉酶充分接触，反应。
b.显色。在流出5mL后接取0.5mL过滤液，然后向试管中加入1-2滴KI-I2 溶液。切记，KI-I2 溶液不要加入太多，以免碘液颜色覆盖糊精淀粉反应后的颜色。