1.取少量酵母菌液放入血球计数板直接计数，测得的数目是( )
A．活细胞数 B．死细胞数
C．菌落数 D．细胞总数
解析：选D。直接计数法不能区分死细胞与活细胞，所以在显微镜下观察到的数目应为细胞总数。
2.下列有关显微镜直接计数法的叙述错误的是( )
A．可在短时间内推算出微生物的数目
B．待测样品不需要进行稀释
C．适合于计数体积比较大的细菌
D．需要进行多次计数并求平均值
解析：选B。在用显微镜直接计数时，需要将待测样品进行一定浓度的稀释制成悬液，然后取一定量的悬液于显微镜下观察多个小室并分别计数，求出平均值，并推算出单位体积内的微生物总数。
3.(2012·济南一中高二检测)关于土壤取样的叙述，错误的是( )
A．土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤
B．先铲去表层土3 cm左右，再取样
C．取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌
D．应在火焰旁称取土壤
答案：C
4.土壤中分解尿素的微生物所需氮源为( )
A．硝酸 B．氨
C．尿素 D．蛋白胨
解析：选C。只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素为氮源，缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源不能生长发育繁殖而受到抑制，所以，能够选择出分解尿素的微生物。
5.自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。
步骤：①制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液。
②用稀释涂布平板法接种样品。
③适宜温度下培养。
结果分析：(1)测定的大肠杆菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确可信的是________。
A．一个平板，统计的菌落数是23
B．两个平板，统计的菌落数分别是22和26，取平均值24
C．三个平板，统计的菌落数分别是21、5和52，取平均值26
D．四个平板，统计的菌落数分别是21、30、24和25，取平均值25
(2)一同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为23.4，那么每毫升样品中的菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.2 mL) ________________________________________________________________________。
(3)用这种方法测定大肠杆菌数量，实际活菌数量要比测得的数量________，因为________________________________________________________________________。
(4)某同学在测定大肠杆菌的密度时发现，在培养基上还有其他杂菌的菌落，能否肯定该大肠杆菌的品系被污染了？为什么？
________________________________________________________________________。
解析：(1)计数微生物时可选取多个菌落数相差不大的平板计数并求其平均值。
(2)23.4÷0.2×106＝1.17×108。
(3)菌落可能由1个或多个细菌连在一起生长而成，所以实际活菌数量要比用菌落数计数测得的数量多。
答案：(1)D (2)1.17×108
(3)多 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的是一个菌落
(4)不能。因为杂菌可能来自培养基或来自培养过程
1.下列不属于菌种计数方法的是( )
A．平板划线法 B．稀释涂布平板法
C．显微镜检法 D．滤膜法
解析：选A。平板划线法可以用于菌种的纯化和分离，不能用于菌种的计数。
2.有关稀释涂布平板法，叙述错误的是( )
A．首先将菌液进行一系列的梯度稀释
B．然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面
C．再放在适宜条件下培养
D．结果都可在培养基表面形成单个的菌落
解析：选D。稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，在适宜条件下培养。只有在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物才被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。
3.请选出进行土壤中细菌计数的正确的操作步骤( )
①土壤取样 ②称取1 g土壤放入盛有99 mL无菌水的锥形瓶中 ③吸取0.5 mL进行平板涂布 ④依次稀释至102、103、104、105、106倍稀释度
A．①→②→③→④ B．①→③→②→④
C．①→②→④→③ D．①→④→②→③
解析：选C。在分离土壤中某细菌时，应先选取土样(1 g)，然后加无菌水获得土壤浸出液，并进行不同倍数稀释，最后将稀释液涂布到培养基表面进行培养，并分离和计数。
4.某同学在稀释倍数为106的培养基上测得平板上的菌落数的平均值为234，那么每克土壤样品中菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL)( )
A．2.34×108 B．2.34×109
C．234 D．23.4
解析：选B。每克土壤样品菌数＝(某稀释倍数的菌落平均数/细菌培养时所用的稀释液体积)×稀释倍数。
5.某同学在101、102、103倍稀释的平均菌落数为2760、295和46，则菌落总数(个/mL)为( )
A．2.76×104 B．2.95×104
C．4.6×104 D．3.775×104
解析：选D。菌落计数法，注意是计算不同稀释度的平均菌落数。首先选择平均菌落数在30～300之间的，当只有一个稀释倍数的平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落乘以稀释倍数即为该样品的细菌总数；若有两个稀释倍数的平均菌落数均在30～300之间，则按两者菌落总数之比值来决定，若比值小于2应取两者的平均数，若大于2，则取其中较小的菌落总数。本题295、46在30～300之间，46×103与295×102比值为1.6，应取二者平均数(46×103＋295×102)÷2＝3.775×104。若所有稀释倍数的菌落数均不在30～300之间，则应以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数。
6.分离与计数土壤中分解尿素的细菌实验时，甲组实验用氮源只含尿素的培养基，乙组实验用氮源除尿素外还含硝酸盐的培养基，其他成分都相同，在相同条件下操作，培养与观察，则乙组实验属于( )
A．空白对照 B．标准对照
C．相互对照 D．条件对照
解析：选D。乙组和甲组实验仅是培养条件不同，因此为条件对照。
7.斜面培养基正确的画线示意图( )
解析：选A。正确的接种方法是将带菌的接种环伸入待接种的试管中，在培养基面上由底部向上轻划“S”型曲线，将菌种接种到培养基上。
(2012·烟台二中高二检测)下列叙述错误的是( )
A．因为土壤中各类微生物的数量不同，所以，为获得不同类型的微生物要按不同的稀释倍数进行分离
B．测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围不同
C．只有得到了3个或3个以上菌落数目在30～300之间的平板，才说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数
D．牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落
解析：选C。如果涂布三个平板能够得到2个菌落数目在30～300之间的平板，就说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。计数的方法是舍弃相差很大的一个，然后取平均值。
土壤有“微生物的天然培养基”之称，下图表示：对土壤中某种微生物进行分离和计数，而进行的对样品的稀释和稀释液的取样培养流程示意图。请据图回答有关问题：
(1)图示统计样品活菌数目的方法叫做________法，主要包括________操作和________操作。
(2)当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的________，一般选择菌落数在______________之间的平板进行计数。
(3)图中各试管间的“箭头”表示的操作过程是________________________________
________________________________________________________________________。
这一操作过程中每一步都要在火焰旁边进行。
(4)图中选择了104、105、106倍的稀释液进行平板培养，最可能是测定土壤中__________________的数量，这个平板需要在________温度下培养________天。
(5)如果要想分离分解尿素的细菌，平板中培养基成分的特点应该是______________；如果怀疑培养基被污染导致统计结果有误，则需要做对照实验，方法是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
解析：活菌计数最常用的是稀释涂布平板法，测定饮水中大肠杆菌的数量时还可以采用滤膜法。前者最关键的步骤是梯度稀释和涂布平板。本题考查的内容涉及梯度稀释的方法、要点以及涂布平板培养基的配制、选择稀释度的范围、鉴定培养基是否被污染的方法等都是围绕这两个方面进行的。
答案：(1)稀释涂布平板 梯度稀释 涂布平板 (2)一个活菌 30～300 (3)用移液管吸取1 mL上一试管的菌液注入下一试管中，并用手指轻压移液管橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混合 (4)细菌 30～37 ℃ 1～2
(5)以尿素作为唯一氮源 将一个培养基在不加土壤液的情况下与加入土壤液的培养基同时培养
请回答下列与大肠杆菌有关的问题：
(1)从生态系统的成分上看，大肠杆菌属于________；它的同化作用类型是________。
(2)下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方。
成分
含量
蛋白胨
10.0 g
乳糖
5.0 g
蔗糖
5.0 g
K2HPO4
2.0 g
显色剂
0.2 g
琼脂
12.0 g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000 mL。根据用途划分该培养基属于________培养基(选择、鉴别)。该培养基中的碳源是________。
(3)培养大肠杆菌时，常用的接种方法是平板划线法和________________。为防止杂菌污染需要对培养基和培养皿进行________________。
(4)现有一升水样，用无菌吸管吸取1 mL水样至盛有9 mL无菌水的试管中，依次稀释103稀释度。各取0.1 mL已稀释103倍的水样分别接种到三个培养基上培养，记录的菌落数分别为55、56、57，则每升原水样中大肠杆菌数为________________。
解析：(1)大肠杆菌不能制造有机物，必须利用现成的有机物来合成组成自身的物质，属于异养型生物，在生态系统中主要分解有机物，属于分解者。(2)根据表中培养基的组成可看出，该培养基中的碳源是乳糖、蔗糖(蛋白胨)，由于在培养基中添加了显色剂，可判断此培养基为鉴别培养基。(3)培养大肠杆菌等微生物时，常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法。为防止杂菌污染需要对培养基和培养皿进行灭菌。(4)根据公式计算：每升原水样中大肠杆菌数＝(55＋56＋57)÷3÷0.1×103×103＝5.6×108。
答案：(1)分解者 异养型
(2)鉴别 乳糖、蔗糖(蛋白胨)
(3)稀释涂布平板法 灭菌 (4)5.6×108
1．测量微生物数量的方法分为两类，直接计数法和间接计数法。
2．直接计数法中常用的是显微镜直接计数法。
3．间接计数法最常用的是稀释平板计数法，通过统计培养基中出现的菌落数，即可推算出检测样品中的活菌数。
课件41张PPT。第3节 测定微生物的数量学习导航
1.概述微生物计数的基本方法。
2.运用稀释平板法测定样品中微生物的数量。[重、难点]一、直接计数法
1.常用方法：显微镜直接计数法。
2.具体步骤：将待测样品制成悬液→取一定量的悬液放在显微镜下进行计数→观察并计算出单位体积内的微生物总数。
3.优点
4.缺点：难以计数______的细菌。
5.适用范围：一般适用于纯培养悬浮液中各种____________的计数。
二、间接计数法
1.常用方法：________________。所需设备_____，可迅速得到结果
能观察到微生物的__________简单形态特征微小单细胞菌体稀释平板计数法2.具体步骤：需要将待测样品配制成均匀的____________并使其均匀分布于平板中的培养基内，经过培养后，统计培养基中出现的________,即可推算出检测样品中的活菌数。
3.优点：在样品中含菌数_______的情形下也可以完成计数。系列稀释液菌落数较少判一判
(1)在用直接计数法测量培养瓶中酵母菌时，应在培养液静置一段时间后，从瓶底部吸取液体样本。(×)
(2)用稀释平板计数法，通过观察菌落，得出的数值往往比实验值要大。(×)
(3)在计数时，用于培养的器皿要进行灭菌。(√)三、间接计数法实例
1.土壤中好气性细菌的计数
(1)制备土壤稀释液
取土壤表层_____________处的土样。准确称取1 g土样，放入盛有___ mL无菌水的锥形瓶中，振荡20 min后制成102倍的稀释液。然后进行系列稀释，得到103、104、105、106的系列稀释菌液。5 cm～10 cm99(2)取样及倒平板：每个号码设置__个重复。
(3)培养。
(4)观察记录
①计数时对于细菌、放线菌、酵母菌以每个培养皿内有__________个菌落为宜。霉菌以每个培养皿内有__________个菌落为宜。330～30010～1002.检测天然水源中细菌总数和大肠菌群数
(1)细菌总数通常是指1 g或1 mL检测样品中所含__________的总数,单位用cfu/g(mL)表示。细菌菌落(2)大肠菌群数通常是指每100 g或100 mL检测样品中所含大肠菌群的实验数值，以(MPN)表示。大肠菌群是指在____℃条件下，24 h内能发酵______，产酸产气的一类___氧或_______氧型革兰氏阴性无芽孢杆菌的总称。大肠菌群数的检测，常用__________法，使用乳糖胆盐蛋白胨培养基、___________琼脂培养基(EMB培养基)和乳糖发酵管。37 乳糖需兼性厌多管发酵伊红－美蓝3.土壤中分解尿素细菌的计数
有些细菌含有__________酶，能将尿素琼脂培养基中的尿素分解生成氨，氨溶于水变成氢氧化铵，导致培养基变成____性，使酚红指示剂呈现____色。尿素分解碱红想一想
土壤有“微生物的天然培养基”之称，为什么？
【提示】 由于土壤具备了各种微生物生长所需的营养、水分、空气、酸碱度、渗透压和温度等条件，是微生物生活的良好环境。对微生物来说，是微生物的“大本营”；对人类来说，是最丰富的“菌种资源库”。要点一 直接计数法和间接计数法的比较
1.显微镜直接计数法
(1)原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。(2)方法：用计数板计数。计数板是特制的载玻片，其上有特定的面积为1 mm2，高为0.1 mm的计数室，一个计数室又被分成25个(或16个)中格，每个中格再被划分成16个(或25个)小格，每个计数室都由400个小格组成。
(3)操作：将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计数4～5个中格中的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再按计算公式求出每毫升样品中所含的细菌数。
(4)计算公式
每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数
(5)缺点：不能区分死菌与活菌。2.间接计数法(活菌计数法)
(1)原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。(2)操作
①设置重复组,增强实验的说服力与准确性。将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取0.1 mL接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布在整个平板表面，放在适宜的温度下培养计数菌落数。为使结果接近真实值，可将同一稀释度菌液加到三个或三个以上的平板上,经涂布、培养，计算出菌落平均数。②为了保证结果准确，要选择一个合适的稀释倍数，且同一稀释倍数的各个重复组菌落数要相近，若设置的重复组中结果相差太远,意味着操作有误，需重新实验。
(3)优点：能观察菌落特征。 在探究培养液中酵母菌种群数量变化的实验中，需利用计数板对微生物细胞进行直接计数。计数板是一个特制的可在显微镜下观察的载玻片，样品就滴在计数室内。计数室由25×16＝400个小室组成，容纳液体总体积为0.1 mm3。某同学操作时将1 mL酵母菌样品加99 mL无菌水稀释，用无菌吸管吸取少许使其自行渗入计数室，盖上盖玻片并用滤纸吸去多余菌液，进行观察计数。(1)在实验中，某同学的部分实验操作过程是这样的：①从静置试管中吸取酵母菌培养液加入计数板进行计数，并记录数据；②把酵母菌培养液放置在冰箱中；③第七天再取样计数，记录数据，统计分析绘成曲线。
请纠正该同学实验操作中的3处错误：
①______________________________________
__________________________________；②______________________________________
__________________________________；
③______________________________________
__________________________________。
(2)在实验前应该对计数板、吸管等器具进行________处理。(3)如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清,应采取的措施是_________________________
_____________________________________。
(4)如果观察到如图所示a、b、c、d、e 5个大格共80个小室内共有酵母菌48个，则上述1 mL酵母菌样品中约有酵母菌________个；要获得较为准确的数值，减少误差，你认为该怎么做？________________________________________________________________________。【解析】 (1)在从试管中吸取酵母菌之前,应将试管轻轻振荡几次，目的是使酵母菌在培养液中均匀分布。酵母菌的培养液应置于适宜温度下培养，并且每隔24小时就要统计一次菌落数目。(2)为了避免杂菌污染，实验中所用吸管、计数板等器具需进行灭菌处理。(3)、(4)解答时要注意以下两点:①统一单位;②注意体积的变化。400个小室共容纳液体总体积为0.1 mm3，则80个小室容纳体积为：2×10－2mm3，含酵母菌48个，又因酵母菌培养液总体积为100 mL,统一单位后即可求出酵母菌个数。【答案】 (1)①应将试管轻轻振荡几次再吸取酵母菌培养液进行计数
②应将酵母菌培养液放置在适宜温度下培养
③应连续七天，每天观察、取样计数并记录数据
(2)灭菌 (3)适当稀释
(4)2.4×108 多次计数，求平均值变式训练
用稀释平板法测定同一土壤样品中的细菌数,在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是( )
A．涂布了1个平板，统计的菌落数是230
B．涂布了2个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238C．涂布了3个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163
D．涂布了3个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233解析：选D。在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性，所以A、B两项不正确。C项虽涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另两个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地用3个平板的计数值求平均值。要点二 间接计数法在统计微生物数目时的注意事项
1.设置对照
(1)目的：排除实验中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
(2)方法：取一个未接种的培养基与接种好的培养基一起培养。2.注意无菌操作
(1)建立无菌观念，严格控制实验器材、实验室、实验操作者的消毒、灭菌。
(2)整个实验过程必须保证无菌操作。
(3)取样、稀释都要在酒精灯火焰附近的无菌环境中进行。
(4)规范操作，防止其他微生物污染，实验结束后洗手、消毒。3.准确计数
(1)在计算结果时，不同的微生物要选择的稀释倍数不同。细菌、放线菌、酵母菌一般以每个培养皿中有30～300个菌落为宜，而霉菌则以有10～100个为宜。
(2)要设置3个或3个以上的重复组，然后求其平均值进行计算。
(3)每隔24 h统计一次，最后选取数目稳定时的记录作为结果。特别提醒 ①间接计数法主要是用来推测样品中大约含有的活菌数。
②统计的菌落数往往比实际的数目低，因为当两个或两个以上微生物在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。 在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应的培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的结果产生原因可能有( )
①由于土样不同 ②由于培养基污染 ③由于操作失误 ④没有设置对照
A．①②③ B．①②③④
C．②③④ D．①③④【解析】 实验结论是否正确与是否设置对照有直接关系，但实验结果与是否设计对照无关。
【答案】 A变式训练
下列调查活动或实验中，计算所得数值与实际数值相比，可能偏小的是( )
①标志重捕法调查灰喜鹊种群密度时标志物脱落
②用血球计数板计数酵母菌数量时只统计方格内菌体③样方法调查蒲公英种群密度时在分布较密的地区取样
④调查某遗传病的发病率时以患者家系为调查对象
A．①② B．②
C．①③ D．②④本部分内容讲解结束按ESC键退出全屏播放
